新生儿外周血有核红细胞检测与精准医疗的研究

韦桂兰 综述,蒋文钦 审校

(广西壮族自治区桂林市人民医院检验科　541002)

新生儿外周血有核红细胞(NRBC)检测是临床检验项目，NRBC在新生儿中的临床意义还不清楚，对新生儿外周血NRBC检出率最高的是出生后的第1天，然后其数量随着日龄增加而减少。目前，多种血液分析仪可对NRBC进行报警提示，具有筛查功能，很多医院还没有对NRBC进行常规检测和常规报告，复检NRBC仅限于校正白细胞使用。结合新生儿的生理病理特点，参照血液分析仪异常报警信息，笔者所在科室建立了适合本院的新生儿外周血NRBC复检规则，经过评估和验证，证明它是适合于新生儿NRBC的复检规则，通过仪器法与手工显微镜检查联合检测，实现精准检验。胎儿NRBC被学者们认为是无创性产前诊断的最佳细胞来源，对新生儿有核红细胞检测与相关疾病的研究也引起了越来越多的临床医生关注[1-2]。

1　新生儿外周血NRBC检测方法

1.1镜检法(以镜检法为金标准)在SP-1000i自动或手动模式推片染色，用油镜在血膜体尾交界处分类400个白细胞时所见到的有核红细胞，同时计数所见到的NRBC数[3-4]。

1.2血液分析仪法Sysmex XN-1000全自动分析仪检测NRBC XN-1000有两个通道即WBC/BASO和NRBC通道(也叫WNR通道)，为了进行白细胞精准检测增加了对NRBC的修正功能。在WNR通道中可对白细胞进行计数和分类，也可对NRBC和嗜碱性粒细胞进行计数。Lysercell WNR试剂中的表面活性剂可使红细胞溶血的同时也能透过白细胞的细胞膜。 根据白细胞外形和内部结构的特征不同，利用散射光可捕捉和辨别其形态的差异，从而把嗜碱性粒细胞与其他白细胞区分开来。Fluorocell WNR试剂可同时对白细胞及NRBC的核酸、细胞器进行荧光染色，白细胞染色部位比NRBC多，同时白细胞荧光强度也比NRBC强。可根据荧光量的差异，将NRBC其他白细胞进行区别计数，记录得到NRBC的绝对数(×109/L)和百分率(NRBC%)数据，也可避免NRBC对白细胞的干扰。

2　全血细胞分析仪检测外周血NRBC与手工显微镜检查联合检测能为临床提供精准检验

多种全血细胞分析仪对有核红细胞进行应用评价研究显示，System XE-2100能准确地自动计数外周血中NRBC，也可在NRBC增高时准确计数白细胞数量,还有助于一些血液病及非血液病患者的筛查与诊断[5]。 XE-2100血细胞分析仪检测外周血，对NRBC有良好的过筛功能，但还不能完全代替手工显微镜检查，仍需严格按照血细胞复检规则对标本进行复检[6]。仪器计数新生儿外周血NRBC的重复性明显好于显微镜计数法，System XE-2100对新生儿外周血NRBC计数快速、准确，能很好地满足临床应用[7]。XE-5000全自动血液细胞分析仪可替代传统的显微镜分类计数方法应用于临床[8]。洪骏等[9]的研究结果显示：System XN-2000全自动血液分析仪可以准确地检测外周血NRBC，并可自动校正WBC分类计数结果，有效降低推片复检率，缩短了标本周转时间。使用XN-3000进行外周血NRBC计数，准确性高，可替代显微镜法，有一定的临床应用价值[10]。XN-1000检测NRBC比流式细胞术有更高的诊断特异性(95.7%)，能快速、准确、有效地自动计数外周血NRBC[3]。 XN-9000能快速、准确、有效地自动计数外周血NRBC。当镜检结果与仪器检测结果差异较大时,需重新校正WBC计数[11]。雅培CELL-DYN Ruby全自动血细胞分析仪检测NRBC时结果的准确性较差,当有NRBC的报警提示时,一定要推血涂片镜检计数,并用公式计算出白细胞总数[12]。精准检验是支撑精准医疗的基础，临床实验室建设是检验精准的保障。目前临床实验室的全血细胞分析仪有多种多样，参差不齐，随着检验技术的不断提高和检验仪器的不断更新，临床实验室把新技术、新方法和新设备及时地应用于常规检验工作，服务于精准医疗，通过大数据的建立、整合，应用到医疗实践中去，实现精准医疗。目前本科室已使用XN-1000常规检测新生儿外周血NRBC，直接测得NRBC数据，结合人工镜检结果，报告NRBC#和NRBC%，通过实践证明，在保证质量控制的前提下，此法对新生儿NRBC联合检测比传统方法更快捷更准确，对新生儿NRBC精准检验是可以做到的。

3　精准医疗在有核红细胞检测中的应用

WALKNOWSKA等在1969年首次报道从孕妇外周血中提取胎儿细胞进行产前诊断，随后的研究表明，胎儿NRBC是最好的产前诊断细胞来源，而具有完整的核物质胎儿NRBC，携带了完整的胎儿基因[1]。目前高通量基因测序已用于产前筛查与诊断；刘丽平等[1]研究显示，胎儿有异常的孕妇其外周血中也有胎儿NRBC增多的现象。王志宏等[13]的研究提示母血中胎儿NRBC数量增加预示妊娠并发症程度加重并威胁胎儿生命,应积极采取干预措施,必要时终止妊娠。但由于孕妇外周血胎儿细胞含量很少，分离技术复杂，价格贵等原因，此技术尚不能在临床推广使用。众多研究表明,许多急性和慢性刺激可以导致循环血液中NRBC数量增加,新生儿外周血NRBC数与新生儿窒息严重程度有关，新生儿外周血NRBC计数对新生儿窒息的早期诊断和窒息程度判断及预后具有重要意义[14]。谭宁等[15]的研究显示与NRBC计数与围生期窒息新生儿早期脑损伤程度存在相关性,对评估新生儿脑损伤预后有一定价值。李灏等[16]的研究显示与NRBC产生和释放增加有关的各种病理过程,并强调急慢性缺氧、免疫调节等对NRBC的影响。贾中伟等[17]等检测外周血NRBC可能成为新生儿窒息诊断的依据之一。健康成人中无NRBC，成人外周血中一旦出现NRBC则为病理现象，准确计数外周血中的NRBC具有重要的临床意义。新生儿外周血的NRBC在出生后很快减少,随着新生儿外周血NRBC检测作为一项常规项目开展，精准检验新生儿外周血NRBC变成了可行。目前作为前沿检验技术的高通量测序、质谱等检测还很多的问题需要解决，在分子诊断学技术、质谱技术等领域，医学检验迫切需要采用自建检测方法开展一些新的检验项目，在临床检验中基于准确性的标准化检测是目前急需的[18-19]。探讨新生儿外周血NRBC精准检测方法能为临床提供更准确的数据，以利于临床的跟踪治疗与科学研究。

4　问题与展望

利用血液分析仪直接检测NRBC数量和百分数，有望成为常规的检测方法，尤其与手工镜检联合检测可提供更准确的结果。目前，很多医院还没有对外周血NRBC进行常规检测和常规报告，对NRBC的检测和复检规则的应用主要是用于校正白细胞使用。各实验室很少做本实验室的正常参考值，对于新生儿血液中NRBC数量的正常参考范围尚有待大量临床研究来验证[16]。已经被证实了的是孕妇胎儿NRBC是最好的产前诊断细胞来源。近年来，因为我国婚检率下降和“二孩政策”放开后出现大量高龄产妇，出生缺陷率呈上升趋势。而新生儿NRBC是否能成为早期诊断新生儿疾病的靶细胞，尚需要大量临床研究资料来证实。临床实验室是实现精准检验的载体，把一些新技术、新方法和新设备及时地应用于常规检验工作，做到检验精准，才能为精准医疗提供更加可靠的依据，才能服务于精准医疗[20]。