中药提取物体外抑杀犬螨虫试验

田其真，蔡丙严，封家旺

(1.江苏农牧科技职业学院，江苏泰州 225300；2.西藏职业技术学院，西藏拉萨 850036)

犬螨虫感染是宠物临床上常见的一种以皮肤瘙痒、渗出性炎症及高度接触性传播为特征的顽固性体外寄生虫病[1]。犬螨虫通常分为蠕形螨、疥螨、痒螨3种类型，其感染犬后复发率高、较难治愈，严重影响了犬的生长发育和生活质量，同时也威胁人类的健康[2]。目前，犬螨虫病的治疗主要采取化学药物治疗，由于部分药物对虫卵无效，对幼虫效果不佳，而杀虫药效只能维持10 d左右，必须经过2次～3次14 d～28 d的治疗，才能彻底杀灭螨虫[3]。因此，研制广谱、高效、无残毒、经济、方便，尤其是适用于宠物医院及基层兽医站使用和推广的杀虫药十分必要。中药有较强的抗菌、抗病毒和杀灭多种寄生虫效果，近年来，应用单味中药及复方药物治疗螨病的报道日益增多，一些中药也已被相继开发为商业杀螨剂[4-5]。本试验采用中药提取物与离体螨虫成虫直接接触法，比较了8种中药不同提取物对犬螨虫的体外抑杀效果，为筛选出对犬螨虫作用明显的中药活性部位，指导宠物临床合理用药，同时为研制新型杀犬螨虫制剂奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药物 苦楝皮、椿皮、蛇床子、小茴香、藜芦、白鲜皮、羊蹄根、狼毒等，购自泰州市仁济中药饮片公司；液体石蜡，上海国药集团产品；10 mg/mL伊维菌素注射液，吉林省康达动物药业有限公司产品，批号20160301。

1.1.2 犬螨虫样本 犬蠕形螨35份，疥螨17份，耳痒螨18份，分别采集于泰爱牧宠物医院、江苏农牧科技职业学院教学动物医院临床确诊的患犬病料。

1.1.3 仪器设备 多功能植物粉碎机(CSJ型),旋转蒸发仪型号(IKA RV8),光学显微镜(奥林巴斯CX31),微量移液器(Thermo),电子天平(FA1004N)等。

1.2 方法

1.2.1 中药提取物的制备 将上述8种中药各取100 g，分别用多功能植物粉碎机打碎，然后浸泡0.5 h。将苦楝皮、椿皮、蛇床子、小茴香4种中药及浸渍液分别装入旋转蒸发仪，然后煎汁蒸馏，收集蒸馏液，将剩余蒸馏液过滤去渣，用500 mL/L乙醇沉淀48 h，回收乙醇至无醇味，将蒸馏液与醇沉液合并即得4种中药的提取物。将藜芦、白鲜皮、羊蹄根、狼毒4种中药浸渍液，分别水煎2次，过滤，2次滤液合并浓缩。8种中药生药含量均为1 g/mL，高压灭菌后置4℃冰箱备用。

1.2.2 体外抑杀螨虫试验 将螨虫样本按类别随机分为1组～10组，每组7份，1组～8组为中药提取物试验组，9组为10 mg/mL伊维菌素阳性药物对照组，10组为液体石蜡空白对照组，采用直接接触法进行体外抑杀螨虫试验。先将螨虫样本置于24孔细胞培养板中，每孔7份，然后用微量移液器吸取8种中药提取物滴加于细胞培板中，每孔0.1 mL，对照孔分别加入10 mg/mL伊维菌素和液体石蜡，每孔0.1 mL。将24孔细胞培养板置于温度为25℃～28℃，相对湿度70%～80%的培养箱中作用，每隔1 h取出在高倍显微镜下观察螨虫螯肢与足爪的运动情况，每次观察时间1 min，直至所有螨虫死亡为止。死亡判定标准[6]：①虫体收缩或透明者；②虫体破裂，外周有油滴样堆积物者；③在高倍镜下连续观察1 min，虫体或虫足不活动者。

2 结果

8种中药提取物体外抑杀犬螨虫效果见表1。从表1 可以看出，上述8种中药提取物对犬螨虫均有较好的抑杀作用，其中蒸馏与醇沉混合中药提取物中，小茴香的效果最好，其完全杀灭螨虫时间为作用后4 h，其次为蛇床子，完全杀螨时间为6 h。水提取物中，以羊蹄根的完全杀灭螨虫时间最短，为作用后的5 h。上述3种中药提取物的完全杀灭犬螨虫所需时间均小于10 mg/mL伊维菌素阳性药物对照组的8 h，而椿皮、藜芦提取物的作用时间与10 mg/mL伊维菌素相同均为作用后的8 h。

表1 8种中药提取物体外抑杀犬螨虫效果

注：“-”表示在此时间未统计螨虫存活数量。

Note: "-" Indicates that the survival numberof mites is not counted at this time.

3 讨论

小茴香,为伞形科植物茴香的干燥成熟果实。其味辛，性寒，具有散寒止痛，理气和胃作用[7]。化学成分含挥发油，对真菌孢子有抑制作用[8]。本试验结果表明，小茴香蒸馏与醇沉混合提取物体外具有较强的抑杀犬螨虫作用。蛇床子，为伞形科植物蛇床的干燥成熟果实。其味辛、苦，性温，有小毒，具有温肾壮阳，祛风燥湿，杀虫止痒功效[9]。果实含挥发油，体外试验对须发癣菌有较强的活性[10]。杨海燕等[11]用蛇床子水煎剂观察了体外抑杀犬螨虫效果，作用8 h后可完全抑杀犬螨虫，而本试验用的是蒸馏与醇沉混合提取物，其对犬螨虫完全抑杀时间为作用后的6 h，比水煎剂缩短2 h。羊蹄根，为植物蓼科皱叶酸模或羊蹄的根。其味苦、酸，性寒。化学成分为大黄酸、大黄素等，对多种细菌及小孢子霉菌具有显著抑制作用[12]。本试验结果表明，小茴香、羊蹄根、蛇床子3种中药提物对犬螨虫体外有显著的抑杀作用，效果优于伊维菌素。

宠物临床上对于犬蠕虫的治疗,常选用外用药物如双甲脒涂擦或药浴，皮下注射药物如伊维菌素等，虽具有较好的杀灭效果，但对于吉娃娃、柯利血统的犬等较为敏感，可引起呕吐、过敏等副作用甚至中毒[13]。而中药防治犬螨虫病具有安全、不易产生耐药性等优点。目前，纯中药杀犬螨虫的制剂种类不多，本试验中的小茴香、蛇床子、羊蹄根等中药提取物抑杀犬螨虫效果显著，且药品来源易得，制备方法简单，在后续临床疗效试验的基础上，研制新的杀犬螨虫制剂，将有良好的市场开发前景。

目前，体外抑杀犬螨虫试验多采用药物与离体螨虫成虫直接接触法[14]。应用此方法应注意几点，以确保试验结果的准确度。首先，活螨虫样本的分离及保存较为困难，要选取临床上典型病例进行分离且有充足的螨虫数量，分离完后立即进行试验操作。其次，螨虫与药物添加量要严格控制，药量过少影响药物对螨虫的充分接触，药量过大，影响药物的实际作用效果，一般以24孔细胞培养板，每孔加入螨虫应在5只以上，药液添加0.1 mL比较合适。再次，药物与螨虫作用后要设置合适的作用温度、湿度以满足螨虫存活最适宜的条件。通常将培养箱温度设为25℃～28℃，调节相对湿度为70%～80%。最后，显微镜观察判定药物作用疗效时，应用100倍或400倍镜观察，仔细查看螨虫的鳌肢与足爪的运动情况，连续观察1 min以上，直至所有螨虫死亡为止，在时间充足的情况下，在药物作用后的2 h，可每隔30 min观察一次，有利于比较各种药物作用效果的差异。

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