脱毒马铃薯试管苗无菌安全接种技术

胡振兴+高龙梅+杨小丽+张玲+李益+李薇

摘要 结合多年脱毒马铃薯试管苗繁育实践工作经验，总结出一套无菌安全接种技术规程，包括接种准备、接（转）苗、接种完毕后收尾，不但做到了接种安全有序、试管苗污染率低，而且效率高、操作快速、管理规范。

关键词 脱毒马铃薯；试管苗；无菌；接种技术

中图分类号 S532 文献标识码 B 文章编号 1007-5739（2018）01-0095-01

自国家实施马铃薯主粮化战略以来，马铃薯在农业生产中的地位日益凸显，其市场需求量呈高增长态势。传统的马铃薯生产多以母薯无性繁殖为主，这种繁殖方式不但生长周期长，无法满足现代工厂化育苗的需求，而且容易受病毒侵染造成种性退化[1]。脱毒马铃薯的生产与推广应用对提高马铃薯的生产水平、促进马铃薯产业的快速发展具有重要作用。

在多年的脱毒马铃薯试管苗繁育过程中，总结出了一套脱毒马铃薯试管苗无菌安全接种技术规程，不但做到了接种安全有序、试管苗污染率低，而且操作快速、管理规范，效果非常明显。

1 接种准备工作

接种准备工作包括以下几项：①接种室提前用甲醛和高锰酸钾熏蒸消毒（每1 m3用40%甲醛10 mL倒入装有高锰酸钾5 g的容器内）；并强制过滤通风[2]。②用香皂或洗手液将手洗净，更换工作服、鞋、防尘帽、口罩。用75%酒精或0.5%苯酚对超净工作台喷雾降尘消毒，接通超净工作台电源，打开电源开关、风机，打开紫外灯照射15～30 min[3]。③准备好消毒灭菌药物、接种用苗、接种培养基、接种工具、酒精灯（在超净工作台外用漏斗添加酒精至1/2～2/3）。④关闭紫外灯，打开照明灯。⑤用75%酒精消毒双手、用75%酒精棉（棉球不能太大、酒精不能太多）擦拭超净工作台的台面和侧壁以及放在超净工作台中的所有器具，将棉球及时移出超净工作台，稍后点燃酒精灯[4]。⑥将镊子、剪刀、解剖刀等接种用器具在酒精灯火焰外焰上（不能太靠近酒精灯灯芯）进行灼烧灭菌，从头至尾过火数遍，然后反复过火尖端处（不得少于5 s），摆放好让其自然冷却。⑦将灭好菌的无菌滤纸在超净工作台外褪去外包装袋，在超净工作台上小心地打开包装报纸，用灭过菌的镊子将无菌滤纸取出放在离风窗10～20 cm处，不可太往外。去除第1张滤纸。将接种镊子进行再次灼烧灭菌，然后摆放好冷却待用。

2 接（转）苗

2.1 取苗

在酒精灯火焰上前方打开培养瓶的瓶盖/封口膜，瓶口对准酒精灯火焰外焰旋烤7～10 s，然后开始取苗，将取出的苗子放在无菌滤纸上。

取苗时，瓶口不要斜向外；如果不能一次取出其内的全部材料，要先把封口膜（瓶盖）对着风源放在酒精灯的左前方，取苗后及时盖上。

2.2 切苗

用镊子和剪刀将植物材料在灭好菌的无菌滤纸上进行剪切，要求快速准确。将苗子切成带1～2个叶片和腋芽的节段接种于培養基上[5]，在操作过程中，剪刀和镊子都要在无菌滤纸斜上方操作，不可在其正上方操作。

2.3 接苗

在酒精灯火焰上前方打开培养瓶的瓶盖（封口膜），封口膜放在酒精灯的左前方，将瓶口对准酒精灯火焰外焰旋烤7～10 s，烤完瓶口后，在酒精灯火焰前上方用镊子将接种材料接种到新的培养基上，接完后瓶口对准酒精灯火焰外焰再次旋烤，然后及时封上封口膜[6]。接苗时，镊子最好不要与瓶口接触；组培苗在瓶内要排放整齐、均匀、美观。注意：①接种过程中动作要小心谨慎，以防将酒精瓶或酒精灯碰倒碰翻；严禁将棉球点燃后置于酒精灯或酒精瓶下及附近；用后的棉球要及时移出超净工作台；严禁将有明火或过烫的接种工具放入酒精瓶。万一发生意外，应及时用灭火器扑灭[7]。②转接苗时，双手不能离开超净工作台，接种过程中不宜说话、出大气、咳嗽；③接种过程中手不能经过滤纸上方；接种工具不能移出超净工作台。④接种过程中要随时对手进行消毒，镊子和接种刀要随时灼烧灭菌并冷却待用，不可太热；⑤每接完1瓶要换1次滤纸，对接种工具消1次毒。⑥接种后要及时标记，把品种代号、培养基类型、接种日期、个人编号标示到瓶上。

3 接种完毕后收尾工作

一是用酒精灯帽盖灭酒精灯，严禁用嘴吹灭。二是把接种过程中产生的垃圾清理掉，把工作台收拾干净，台上的物品摆放整齐。三是关闭风机、照明灯、电源开关，断开电源。四是将瓶苗整齐有序地摆放在培养架上。五是将垃圾及其他物品带出接种室。六是做好接种工作记录。

4 参考文献

[1] 吴玥琳，凌永胜，林金秀.马铃薯脱毒试管苗组织培养技术概述[J].农业科技通讯，2017（8）：238-241.

[2] 孟长军.组培实验室常见消毒方法优劣比较[J].中国园艺文摘，2012（8）：177-179.

[3] 秦晓萍.马铃薯脱毒苗组培快繁技术[J].中国种业，2015（4）：81-83.

[4] 朱广廉.植物组织培养中的外植体灭菌[J].植物生理学通讯，1996，32（6）：444-449.

[5] 赵佐敏，艾勇.马铃薯组培脱毒试管苗繁育技术[J].中国马铃薯，2003，17（5）：301-304.

[6] 辛国斌.脱毒马铃薯实验室扩繁技术的改进与应用[J].中国马铃薯，2002，16（4）：239-240.

[7] 刘进平，莫饶，吴繁花.组培工厂及植物组织培养实验室的安全管理[J].农业与技术，2005，25（1）：125-129.