哈巴河县野生杨树菇菌种分离及培养基筛选研究

张俊花+林辰壹

摘要 采用对比法，对哈巴河县野生杨树菇不同液体培养基进行筛选。结果表明，在温度25 ℃、湿度80%的条件下，市售PDA和MYPA培养基适宜野生杨树菇菌种分离和菌丝扩大繁殖。该结果可为今后栽培生产杨树菇提供技术指导。

关键词 野生杨树菇；菌种分离；培养基筛选；新疆哈巴河

中图分类号 S646 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2018）01-0057-02

杨树菇（pleurotus ostreatus），因自然发生在哈巴河县杨树树干或伐桩上而得名。野生杨树菇富含氨基酸和维生素，菇体肥厚，香气浓郁，脆嫩爽滑，味道鲜美。杨树菇子实体大型，菌盖扁半球形或呈扇形，直径4～20 cm，初期浅黑色，后期逐渐变淡，成熟时呈浅灰色或白色；菌盖表面平滑，菌肉白色，肥厚；菌柄短，长2～8 cm，基部有绒毛，侧生或偏生，内实，基部相连，菌盖重叠[1]。杨树菇既是新一代高档的珍稀食用菌，也是一种极具开发价值的药用菌[2]。本文进行3种培养基筛选试验，找出适合野生杨树菇的最佳培养基。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 供试仪器设备。纯水及超纯水系统（HY-CJ-1A）、手提式压力蒸汽灭菌锅（YXQ-280SD）、生化培养箱（SPX-250）、生物安全柜（BSC-1360ⅡA2）、温度湿度计、电子天平、培养皿。

1.1.2 供试试剂。马铃薯葡萄糖琼脂（不含抗生素）、蛋白胨、麦芽浸膏、琼脂粉和酵母膏，由北京奥博星生物技术有限公司生产。供试菌株采自哈巴河县。

1.2 试验方法

1.2.1 培养基配方与制作。①PDA（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）[3]：将200 g马铃薯去皮，去芽眼，切成小条放入铝锅中，加入1 000 mL水，煮沸20～30 min至马铃薯酥而不烂时，用6～8层纱布过滤，取滤汁于锅中，再补水至1 000 mL，加入琼脂20 g溶化，再加入葡萄糖20 g搅拌均匀，趁热分装于试管中，用棉花塞塞好，每个试管10 mL。②市售PDA（北京奥博星生物技术有限公司）：取试剂38 g，加水1 000 mL水煮沸，搅拌均匀，趁热分装于试管，用棉花塞塞好，每个试管10 mL。③MYPA（麦芽酵母膏蛋白胨琼脂培养基）[4]。先在铝锅中加入1 000 mL水加热，再取麦芽浸膏20 g、酵母膏2 g、蛋白胨1 g、琼脂20 g，放入锅中搅拌均匀后煮沸，趁热分装于试管，用棉花塞塞好，每个试管10 mL。

1.2.2 母种培养。将分装好的不同的试管培养基放入灭菌器内，当锅内压力达到0.15 MPa（锅内温度127 ℃）时保持30 min，灭菌结束后待锅内压力自然降至0时才可打开锅盖[5]。待培养基灭菌完成后，取出倾斜放置在生物安全柜中冷却。在灭菌的同时，将采集好的菌株先后用纯水、超纯水、75%酒精清洗干净放置在生物安全柜中。

接种前开启紫外灯30 min，关闭紫外灯后，开启无菌循环系统，先用75%酒精棉球擦手，点燃酒精灯，将小刀和铁丝在火焰上方消毒，用小刀将菌株沿菌盖至菌柄中间纵向切开，在菌柄和菌盖交界处，用小刀切出一小块菇体，每块0.8 cm左右，厚度0.2 cm，然后用铁丝挑起菇体放入培养基斜面中心处[6]，每接种1次都要对小刀、铁丝在酒精灯上消毒。接种完成后放在25 ℃左右的培养箱内暗光培养，每天通风换气，控制空气相对湿度80%左右，观察记录菌丝生长情况，待生长最快的菌丝接近培养基另一端时，进行菌种复壮培养[7]。

1.2.3 母种扩繁。根据菌丝的生长情况，选择菌丝长势很好且无杂菌的培养基中进行扩繁。接种前开启紫外灯30 min，手、台面、接种工具、母种管用酒精棉球擦拭消毒，点燃酒精灯，火焰上方灼燒接种药勺后冷却，凡是伸进试管的杆部均过火灭菌。将原始母种和空自斜面培养基同时握在左手，右手拔掉棉塞，用手将试管口在火焰上方不断搅动，先用药勺弃去原始母种前端1 cm处，然后快速移取0.5 cm2大小的菌种接入试管斜面培养基中央。抽出药勺，再将试管口在火焰上方搅动，在火焰旁塞上棉塞，另一只手换接种管，重复上述操作，接种完毕后贴上标签。接种后，放在培养室内避光培养，培养初期每天都要仔细观察，对污染的试管及时挑除，以免菌丝将污染处盖住，难以挑出，造成损失。

1.2.4 菌丝生长量测定。先将配制好的不同的培养基200 mL分装于250 mL的锥形瓶内，用棉塞塞好，然后将平面培养皿与锥形瓶放入高压灭菌锅内灭菌0.15 MPa时保持30 min，灭菌完成后在超净工作台内趁热将不同的培养基倒入平面培养皿上，平面培养皿的厚度为2 mm。冷却后，通过从已培养好的杨树菇母种试管中，用环状接种针在火焰旁取大小相等的菌块，放入平面培养皿的中央，在温度25 ℃、湿度80%的恒温培养箱中倒置避光培养9 d，每隔3 d测量1次，第3天开始用“十”字法测量菌落直径并观察菌丝的长势情况[8]。每个处理3次重复。

1.3 数据分析

利用SPSS 20.0软件对所有数据进行单因素ANOVA Duancan差异显著性分析比较（P<0.05）。

2 结果与分析

2.1 菌丝生长情况

由表1可知，组织分离后的组织块在自制PDA培养基培养的菌丝萌发期时间最长，菌丝生长稀疏，30 d长满试管；市售PDA和MYPA培养基培养的菌丝萌发期时间为2 d，菌丝生长洁白、浓密、粗壮、整齐，明显优于自制PDA培养基。市售PDA（扩繁）培养基培养的菌丝萌发快，2 d后开始萌发菌丝，菌丝生长粗壮、浓密、洁白、整齐、有序，20 d可长满试管。由此表明，在温度25 ℃、湿度（RH）80%±5%的条件下，市售PDA和MYPA培养基适于该菌的室内培养。

2.2 菌丝生长量

由表2可知，在温度25 ℃、湿度（RH）80%±5%的条件下进行培养时，第3天和第6天时，市售PDA和MYPA培养基上的菌丝生长量显著高于自制PDA（P<0.05），在第9天时，MYPA培养基上菌丝生长量最大，显著高于其他2个处理，并且市售PDA培养基显著高于自制PDA培养基（P<0.05）。方差分析结果表明，在温度25 ℃、湿度（RH）80%±5%的条件下，市售PDA和MYPA培养基均适于该菌的室内培养。

3 结论与讨论

通过查找资料选择了常用的3种培养基（自制PDA、市售PDA和MYPA培养基）对野生杨树菇进行菌丝培养，自制PDA中马铃薯200 g、葡萄糖20 g、琼脂20 g；市售PDA中马铃薯浸粉3 g、葡萄糖20 g、琼脂15 g；MYPA培养基中麦芽浸膏20 g、酵母膏2 g、蛋白胨1 g、琼脂20 g。通过培养观察，市售PDA和MYPA培养基培养的菌丝萌发期时间2 d，菌丝生长洁白、浓密、粗壮、整齐，明显优于自制PDA培养基，且试管长满时间较自制PDA培养基短；在菌丝生长量方面市售PDA和MYPA培养基显著高于自制PDA，而在菌丝生长量的第9天，MYPA培养基明显高于市售PDA培养基。3种培养基中MYPA培养基中氮源丰富，市售PDA次之，自制PDA最少，一定量的氮源对该菌丝的生长很重要。但MYPA培养基在配制过程中因是膏状，称样复杂，市售PDA操作方便。市售PDA和MYPA培养基各有利弊。综上，在温度25 ℃、湿度（RH）80%±5%的条件下，市售PDA和MYPA培养基适于该野生杨树菇的菌种分离和菌丝体的扩大繁殖。

4 参考文献

[1] 晏忠诚.杨树菇栽培技术[J].农村科技，2010（8）：84.

[2] 张亦诚，雷朝云，何成勇.杨树菇引种栽培试验初报[J].贵州农业科学，2005（1）：69.

[3] 杨顺强，罗家刚，桑正林，等.不同pH值PDA培养基对平菇、香菇母种培养的影响[J].现代农业科技，2016（14）：67-68.

[4] 宋金.平菇毛木耳金针菇高效栽培技术[M].南京：江苏科学技术出版社，2012.

[5] 李峰，赵建选，胡晓强.规范制种程序制作优质平菇菌种[J].食用菌，2012（6）：31-32.

[6] 丁超，余传生，董宏.图文精讲反季节平菇栽培技术[M].南京：江苏科学技术出版社，2009.

[7] 侯军，胡梅，殷伟敏，等.杨树菇母种培养基筛选试验[J].洛阳农业高等专科学校学报，2002（1）：10-12.

[8] 刘拴成，穆俊祥，曹兴明，等.不同微量元素对平菇菌丝生长的影响[J].黑龙江农业科学，2017（4）：103-108.