乙型肝炎病毒分型与定量试剂盒临床试验要求比较

高宇 吕允凤 国家食品药品监督管理总局医疗器械技术审评中心审评六部 （北京 100081）

内容提要： 国家食品药品监督管理总局对于体外诊断试剂盒的上市注册有着严格的审评审批标准，其中临床评价数据是对于试剂盒诊断性能的重要的临床验证资料。对于所涉及的政策要求，申报企业通常在理解、执行方面会存在疑惑。依据国家食品药品监督管理总局于2014年发布的《体外诊断试剂注册管理办法》和病毒分型及定量试剂盒的特点，对两种不同类型试剂在注册审评的临床评价的要求进行对比。对比这两类试剂在伦理要求、临床试验方案、临床研究单位的选择、临床试验病例的选择、方法学比对、分析统计方法以及临床试验总结报告撰写等方面的异同，为从事上市前临床研究的行业人员提供参考。

我国医疗器械上市的审评审批由国家食品药品监督管理总局负责，根据申请人所递交资料对体外诊断试剂的安全性、有效性进行评价。在所递交的资料中，临床评价资料是反映产品安全性、有效性的最重要部分。通过临床试验数据、临床文献资料等信息，对产品能否满足其预期用途进行确认。

病毒检测试剂是体外诊断试剂中重要的一类检测试剂，通常根据检测目的不同分为病毒定性试剂和病毒定量试剂。这两种诊断试剂在检测靶标、检测方法、实验室操作等方面都有较为一致的特点。然而由于检测目的的差异使得试剂在注册资料中临床评价报告的内容、要求有所差异。而申报企业对于上述政策上的差异有时并不能很好的理解和执行。乙型肝炎病毒检测试剂是申报试剂中数量较多的试剂，本文以其为例，对目前基于核酸扩增反应原理的两种不同类型检测试剂在临床研究及所需提交资料的异同点进行比较，以期对申报企业给予参考[4,5]。

1.伦理要求[6,7]

开展临床试验应首先应满足赫尔辛基宣言的伦理学准则。伦理委员会（或机构审查委员会）通过在试验前对试验方案、知情同意书及试验对受试者影响的证明性文件进行审查，考察试验的伦理符合性。批准后，受试者在受试前应知情同意书。然而对于体外诊断试剂临床试验来说，所使用的样本通常为临床剩余样本。一方面难以获得受试者的知情同意，另一方面，从客观上不会对受试者产生风险，因而一般可以向伦理委员会申请免于知情同意。

2.关于临床样本

二者临床样本要求一致，主要考虑被检测病原体的流行病学特征。我国大部分地区HBV基因型为B型、C型，D型在我国属于罕见类型。此外，在我国还包含少数的重组基因型，例如B/C型，B/D型，C/D型等。而我国HBV基因型的另一特点是具有地域差异性。因此在对于临床样本的要求中应以B型、C型为主，而D型及重组基因型可根据产品的预期用途的差异提出单独的要求。

在选择临床病例时，总样本数量至少为500例，其中阳性不少于450例、阴性不少于50例。对于因预期用途的差异而需要单独提出要求的其他基因型，由于其总比例较低，因此在临床试验中建议每种基因型应不少于10例。在临床病例的选择时，同样需要考虑到HBV的地域性差异，临床试验机构不宜集中在某一地区。对于其他病原体的临床试验的病例选择时，也应同样考虑其流行病学特点设置符合其流行病学特征的临床病例样本。

对于临床病例中的阳性样本，病毒的滴度范围应尽可能均匀分布，以覆盖试剂检测范围，特别是线性范围，从而验证其检出能力。样本应来源于真正的患者，如采用库存样本，应进行说明。

3.临床试验方案的设计及临床研究单位的选择

在临床试验方案实施前，申报企业应与临床试验单位充分沟通制定临床试验方案。综合考虑包括流行病学、临床医学、生物统计学在内的多方面因素，合理、科学地制定。各临床机构的试验方案应基本一致。在实验过程中应严格遵守试验方案，全程双盲，且申报企业不得随意干涉试验进程。试验过程中，病例的纳入与排除都应有详细的记录，明确记录原因。

考虑到HBV的地域差异及相应的法规要求，在选择临床机构时至少选择三家具有地域代表性的临床研究机构，各机构间的临床样本量应基本保持一致。此外，还需考虑临床机构对于聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）方法的实施能力。操作人员应具有一定的PCR实验基础，并能够在申报企业技术人员的指导下熟练掌握检测系统的操作方法、熟悉评价方案。在试验过程中还应关注试剂及设备的运行状态、环境的要求，以保证实验的重复性及结果的可靠性。

4.研究方法

由于检测指标的差异，分型试剂与定量试剂的研究方法是二者上市临床研究中差异最突出的方面。

对于已有同类产品上市的产品，应证明申报产品的性能与其等效或性能优于已上市产品，这是体外诊断试剂上市临床试验基本原则。应选择我国已批准上市且普遍认为质量较好的同类产品作为对比试剂进行性能评价。

对于定量检测试剂，主要关注其定量的准确度。因此通常通过两种对比试剂来考察申报试剂的误差范围。将其中一种为正式的对比试剂，而另一种为验证试剂。在选择对比试剂与验证试剂时，应着重考虑与申报试剂的检测范围的一致性。对比试剂及验证试剂的检测范围应包含申报试剂的检测范围或与其一致，以避免无法进行性能比对及验证的情况。当申报试剂与对比试剂验证结果具有较大差异时，应用使用验证试剂进行验证。

而对于分型试剂来说，主要关注其对靶基因检出的特异性。验证方法同样通过与已上市同类产品相比对，证明二者等效或申报试剂性能优于对比试剂。此外，对于基因分型产品还可与测序法进行方法学比对。通过两种不同的检测方法结果的一致性，考察申报试剂的检出能力。当使用测序法考察申报试剂时，应提供包括测序机构资质及选择依据在内的详细资料。

5.统计学分析

由于二者检测指标的差异，其临床研究的统计学分析的方法也有较大差异。

对于定量试剂来说，在统计时主要关注申报试剂与考察试剂的等效性。一般通过线性回归等方式考察两组数据之间的相关性。以判断两组结果间的统计学差异。统计时，应按照临床试验方案中所明确的申报试剂与对比试剂的等效性标准进行检验。

对于定性试剂来说，其对比试验的等效性研究通过统计分析申报试剂与对比试剂的检测结果之间阴、阳性符合率有无明显统计学差异即可。

6.临床试验报告

临床试验完成后应出具临床试验报告，可由临床试验牵头机构或申报企业出具。临床试验报告应参照《体外诊断试剂临床研究技术指导原则》的要求进行撰写。报告中应包括临床试验的基本情况、临床机构情况、主要研究者、纳入/排除标准、病例总例数、流行病学基本特征（分布）、临床试验方案、数据管理方法、统计学方法、临床评价方法、标准及临床试验结果等部分。对临床试验结果进行总结后，应对申报试剂的性能、临床应用的可行性进行分析总结。此外，应当对本次临床试验中所出现的问题进行总结并提出相应的改进意见。在报告的最后应当做出明确的临床试验结论。

7.讨论

病毒检测试剂是注册申报中数量较大的一类试剂，由于被测物性质、检测方法的差异在其临床性能验证时的要求也会有较大差异。这些差异一般体现在临床病例、研究方法及统计方法的选择。对于体外诊断实际来说，临床试验的目的是全面、客观地反应试剂的性能，以体现其安全性、有效性。生产企业在病毒检测试剂开发进行临床试验方案指定应充分考虑其流行病学特征及检测方法的特点，设置科学、合理的方案，使所制定的方案与我国实际临床使用时总体情况一致。