加米霉素注射液在靶动物猪的安全性试验

肖天石，丁久恒，于泓潇，杨 芳，秦 鹏，刘 波，张秀英

(1.东北农业大学动物医学学院动物疾病防控技术与制剂创制实验室，黑龙江 哈尔滨 150030；2.牡丹江市畜牧兽医局，黑龙江 牡丹江 157009；3.冀中生物科技有限公司，河北 保定 071100)

加米霉素为第二代大环内脂类半合成兽用抗生素，属于氮杂内酯类，其中7α-内酯环中的定位烷基化氮能够使加米霉素被靶器官肺快速吸收[1-3]。与其他大环内脂类抗生素作用机制相同，加米霉素通过与原核生物的核糖体50S亚基结合抑制mRNA位移，从而影响蛋白质合成，进而起到抑菌和杀菌的作用[4-7]。法国梅里亚公司研发的以加米霉素为主要成分的注射剂ZACTRAN分别于2008年7月和2011年6月被欧洲药品局(EMA)和美国食品与药物管理局(FDA)批准用于治疗和预防因溶血性曼氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、睡眠嗜组织菌等细菌引起的牛呼吸系统疾病，2016年2月经EMA批准用于治疗由胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌引起的猪呼吸道疾病[8-14]。目前我国已有多家兽药企业注册申报该药，尚未批准用于国内兽医临床。本论文参照“VICH兽药靶动物安全性研究指导原则概述”[15]和“靶动物安全试验指导原则(征求意见稿)”[16]，评价了加米霉素注射液对靶动物猪的安全性。

1 材料与方法

1.1 供试药物 加米霉素注射液(规格：75g/50 mL；生产批号：20161225)，由保定冀中生物科技有限公司提供。

1.2 实验动物 70日龄大长二元杂交猪24头，饲养于经严格消毒的猪舍内，自由饮水，每头猪每日喂0.5 kg不添加任何药物的全价饲料，适应性饲养2天后备用。

1.3 仪器设备 全自动动物血细胞分析仪：XFA6130型，南京普朗医用设备有限公司生产；全自动生化分析仪：日本HITACHI公司生产；组织切片机：德国莱卡公司生产；光学显微镜，日本Olympus公司生产。

1.4 方法

1.4.1 分组 选择24头健康二元杂交猪(体重30～35 kg)开展试验，随机分为4个组 (1倍推荐剂量组6 mg/kg·bw，3倍推荐剂量组18 mg/kg·bw，5倍推荐剂量组30 mg/kg·bw，生理盐水对照组，给予生理盐水的体积与5倍剂量组给药体积一致)，每组6头猪。连续给药3次，分别于试验第0天、第5天和第10天上午8点进行肌肉注射。

1.4.2 临床表现 从首次给药日至首次给药后第15天，每日观察各试验猪的注射部位的变化、精神状态、行为表现、排尿排便情况。

1.4.3 平均增重和料肉比 分别在试验开始前和首次给药后第15天，称量各试验猪体重并计算饲料消耗量，求出各组平均增重和料肉比。

1.4.4 血液学指标 分别在给药前、首次给药后第5天、首次给药后第10天和首次给药后第15天，采集各试验猪的静脉血于含有抗凝剂的采血管中，进行红细胞数、血红蛋白、红细胞压积、白细胞数、血小板数、白细胞分类计数等血常规指标测定。

1.4.5 血液生化指标 分别在给药前、首次给药后第5天、首次给药后第10天和首次给药后第15天，采集各试验猪的静脉血，将新鲜血液置于37 ℃温育箱孵育30 min，3 000 r/min低温离心15 min，小心吸取上层血清，放于-80 ℃保存。进行谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总蛋白、白蛋白、尿素氮、肌酐、胆红素等血液生化指标测定。

1.4.6 病理剖检和病理组织学 试验结束后，将空白对照组和5倍推荐剂量组全部猪只进行剖检，眼观各重要脏器病变情况，并采集心、肝、脾、肺、肾、淋巴结、十二指肠、空肠、回肠等组织做切片进行组织病理学检查。

1.5 数据统计分析 采用SPSS 20.0软件进行方差分析和χ2(卡方)检验分析各组之间的平均日增重、料肉比、血液生理生化指标的差异显著性。

2 结果

2.1 临床表现 试验期间，各组试验猪精神状况良好，饮水采食正常，排便排尿正常，注射部位无异常，无不良反应，未发现中毒和死亡个体。

2.2 平均增重与料肉比 计算各组试验猪的平均初重、平均终重及平均日增重，根据平均日采食量计算料肉比。整个试验期间药物对猪体重增加无明显影响，三个试验组猪的体重随时间延长而增加，与空白对照组相比差异不显著(P>0.05)。

2.3 血液学指标 在给药前、给药后第5天、给药后第10天和给药后第15天经前腔静脉采集的抗凝血测定血红蛋白、红细胞、红细胞平均体积、平均血红蛋白含量、白细胞、血小板数和淋巴细胞绝对数7项指标。结果表明，1倍推荐剂量组、3倍推荐剂量组及5倍推荐剂量组猪在给药后血液学指标均在正常参考值范围[17]内，且与对空白对照组相比无显著性差异(P>0.05)。

2.4 血清生化指标 在给药前、给药后第5天、给药后第10天和给药后第15天经前腔静脉采集非抗凝血，分离血清后测定谷丙转氨酶、谷草转氨酶、血尿素氮、总胆固醇、总胆红素、总蛋白、白蛋白、球蛋白、碱性磷酸酶和肌酐10项指标。结果显示，1倍推荐剂量组、3倍推荐剂量组及5倍推荐剂量组猪在不同时间段的血清生化学指标变化均在正常参考值范围内，与空白对照组结果相比无显著差异(P>0.05)。

2.5 病理组织学检查 试验结束时，将5倍推荐剂量组和空白对照组全部猪只剖杀，肉眼进行系统的解剖学检查，未发现异常的病理变化。5倍推荐剂量组与空白对照组猪只的脏器表面无出血点或坏死病症，说明5倍推荐剂量组猪连续给药3次对猪的脏器无肉眼可见的不良影响。

将从剖杀猪只采集的心脏、肝脏、肾脏、肺脏、脾、淋巴结、胃、十二指肠、空肠、回肠等种组织通过H.E.染色，在光学显微镜下进行病理组织学检查。H.E.染色的结果显示，5倍推荐剂量组各组织与对空白照组均未观察到可见的组织病理学变化。

3 讨论

本试验从临床观察、增重和料肉比、血液学指标、血清生化学指标、病理组织学检查等方面，系统地评价了加米霉素注射液在1倍推荐剂量、3倍推荐剂量、5倍推荐剂量连续给药3次后对靶动物猪的安全性。试验结果表明，各剂量组的猪只未产生明显临床症状，临床表现与空白对照组相似。增重、血液学指标、血清生理学指标以及病理组织学检查的变化均在正常参考值范围内，且与空白对照组相比无显著差异。由此可见，加米霉素注射液以1倍、3倍、5倍推荐剂量作用于靶动物猪未产生明显不良影响。本试验表明，加米霉素注射液以5倍推荐剂量经肌肉注射连续给药3次对靶动物猪是安全的，加米霉素在临床应用方面具有较高的安全性。