胃癌患者淋巴转移与RacGAP1及MCRS1在组织中表达的关系及意义

路 明，李艳丽，高 峰，王春文

(1.吉林市中心医院 基本外科 ，吉林 吉林132000；2.吉林省疾病预防控制中心；3.吉林大学白求恩第一医院；4.吉林大学中日联谊医院)

胃癌(GC)为我国现阶段发病率较高的消化道恶性肿瘤，每年有超过16万人死于胃癌[1,2]。造成胃癌患者死亡的主要原因在于淋巴结转移，如何早期预测淋巴结转移的风险对于个体化治疗，提高患者生存质量及延长患者生存期具有一定意义。研究显示RacGCT酶活性蛋白-1(RacGAP1)和微球蛋白1(MCRS1)在肺癌和直肠癌等恶性肿瘤中存在高表达[3,4]。本文探讨RacGAP1与MCRS1在淋巴转移胃癌组织中表达及对生存时间的影响。

1 对象与方法

1.1研究对象选取2014年5月-2015年4月来我院就诊且确诊为胃癌的患者126例为研究对象。所有患者均行腹腔境胃癌根治术(D2清扫)，留取肿瘤组织。所有组织标本均为新鲜组织，经病理学检查确诊为胃癌，根据是否存在淋巴结转移，分为淋巴结转移组45例和无淋巴结转移组81例。两组的一般情况具有可比性。另外，选取同时期行胃镜检查的15例为对照组，结果为正常胃黏膜。纳入标准： 均经过病理检查确诊，且均为首次确诊；无其他肠道疾病；近期未服用影响RacGAP1与MCRS1表达的药物。排除标准：年龄<18周岁；术前接受放化疗；拒绝参与本项研究者。本研究经医院医学伦理委员会批准，组织标本的取得均获得患者及家属签署的知情同意书。

1.2方法

1.2.1免疫组化检测为组织的RacGAP1与MCRS1表达选取2014年5月至2015年4月来我院就诊且确诊为胃癌的患者126例为研究对象。所有患者均行腹腔镜下胃癌根治术(D2清扫)。根据术后病理结果，按是否存在淋巴结转移，分为45例淋巴结转移组和81例无淋巴结转移组。两组的一般情况具有可比性。另外，选取同时期行胃镜检查，结果为正常胃黏膜的15例为对照。组织标本的取得及检测均获得患者或家属知情同意，本课题经院医学伦理委员会同意。

1.2.2逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) 取“1.2.1”项下胃组织，用无菌、无RNase的EP管，加入Trizol裂解液1.0 ml，在4 ℃下将标本剪成小块并研磨至液体澄清，移至新EP管中，加氯仿混匀，高速离心3 min，取上层水相0.5 ml，加0.5 ml异丙醇，混匀，去上 层，可得总RNA。以MMLV逆转录酶与引物行RT-PCR，互补脱氧核糖核酸(cDNA)合成体系进行逆转录：42℃60 min，95℃5 min。检测RacGAP1mRNA与MCRS1mRNA相对表达，b-actin为内参。RNA 提取试剂盒、PCR 反应试剂盒和RNA 逆转录试剂盒(上海普洛麦格生物产品有限公司)，RacGAP1及MCRS1引物(上海生工生物工程股份有限公司)。扩增条件：94 ℃ 30 s，45 ℃ 30 s，72℃ 60 s，40循环后，72 ℃5min。将 PCR产物进行电泳，置于紫外灯下，采用Image J软件分析并计算RacGAP1mRNA 与MCRS1mRNA的相对含量，引物序列见表1。

表1 RacGAP1和MCRS1的序列

1.2.3随访 对所有胃癌患者进行为期2.5年的随访，随访方式：复诊、电话、微信和邮件等，随访终点为患者死亡和/或随访时间截止(2017年9月14日)。

1.3统计学方法用SPSS19.0软件处理本课题所得数据，胃组织的RacGAP1和MCRS1及RacGAP1mRNA和MCRS1mRNA表达等计量资料以均数±标准差表示，以方差分析进行统计，男女比例及分化程度等计数资料用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.13组的一般临床信息比较3组的性别、年龄和体重指数等一般临床信息具有可比性(P>0.05)，2组胃癌患者的分化程度、肿瘤大小及Hp感染等情况具有可比性(P>0.05)，见表2。

表2 3组的一般临床信息比较

2.23组受试者胃组织的RacGAP1和MCRS1及RacGAP1mRNA和MCRS1mRNA表达与对照组比，胃癌组织的RacGAP1与MCRS1及RacGAP1mRNA和MCRS1mRNA均呈高表达(P<0.05)，但与无淋巴结转移组比，淋巴结转移胃癌组织的RacGAP1与MCRS1及RacGAP1mRNA和MCRS1mRNA表达均较高(P<0.05)，见表3、图1和图2。

表3 3组受试者胃组织的RacGAP1和MCRS1及RacGAP1mRNA和MCRS1mRNA表达(%)

与对照组比，*P<0.05，与无淋巴结转组比，&P<0.05。

1：对照组；2：无淋巴结转移组；3：淋巴结转移组

1：对照组；2：无淋巴结转移组；3：淋巴结转移组

2.3胃癌患者的2.5年生存时间比较2.5年内126例胃癌患者均获得随访，死亡29例(23.02%)，存活97例(76.98%)，死亡29例患者均无意外死亡。与淋巴结转组66.67%(30/45)相比，无淋巴结转移组82.72%(67/81)的生存率较高(χ2=4.201,P=0.040)。将RacGAP1或RacGAP1mRNA按高至低排序，中位数以上为高表达，中位数及以下为低表达，结果显示，与高表达44/63(69.84%)相比，低表达54/63(85.71%)生存率较高(χ2=5.185,P=0.023)，将MCRS1或MCRS1 mRNA按高至低排序，中位数以上为高表达，中位数及以下为低表达，结果显示，与高表达43/63(68.25%)相比，低表达55/63(87.30%)生存率较高(χ2=7.290,P=0.007)。

3 讨论

RacGAP1是GTP 酶活性蛋白家族的一员，RacGAP1作为细 胞 增 殖 的 标 志 物参与细胞分裂增殖过程，研究报道RacGAP1在肝细胞癌、乳腺癌及脑膜瘤等恶性肿瘤组织中过表达，RacGAP1过表达可以作为评估肿瘤高侵袭性的标志，如RacGAP1mRNA过表达与癌复发及预后不良相关[5,6]。本课题结果显示RacGAP1蛋白或mRNA在胃癌组织存在高表达的情况，且高表达伴随淋巴细胞转移，影响患者的生存时间，与RacGAP1加速胃癌的发病过程相关，其机理如下[7-10]：1)Hp感染是诱导胃癌发生的危险因素，Hp可通过增加RacGAP1mRNA表达来提高组织内RacGAP1蛋白表达，与Hp可将RacGAP1的DNP转换到胃黏膜细胞，诱导癌变发生。2)RacGAP1可调节Rac和cdc42的活性，重构细胞骨架，使得细胞极重排，改变细胞形态，降低癌组织与周围正常组织的黏附，为癌细胞转移创造条件，上调的Rac和cdc42还能增强癌细胞的耐药性，抑制癌组织对化疗的敏感度。3)RacGAP1通过影响核心蛋白复合体-1表达来调节细胞骨架，干扰细胞转录，增强癌细胞向周围转移。

MCRS1蛋白由462个氨基酸(aa)组成，主要定位在核仁和中心体，MCRS1在恶性肿瘤发展、淋巴结转移过程及生存情况发挥重要作用，可能机理有以下几点[11,12]：1)MCRS1表达受细胞周期调控，一般初始表达在细胞G1期末，在S期早期高峰表达，S期晚期表达降低，通过转录与调节途径参与细胞的增殖分化。其中，MCRS1作为细胞周期相关的转录因子，MCRS1在细胞核内与STRA13、Mi-2β和转录因子Daxx相互作用，或与NDRG2共同影响细胞分化和肿瘤细胞增殖，或与单纯疱疹病毒1型的核调节蛋白ICP22协同作用，并以细胞周期依赖的方式积聚。2)MCRS1与中心体Nde1及SU48形成蛋白复合物定位于着丝粒纤维末端，通过调节其稳定性参与有丝分裂纺锤体形成过程，影响细胞的生存。3)MCRS1蛋白通过与p53和BRG1形成与p21启动子转化相关的复合物参与细胞衰老过程。4)MCRS1蛋白通过细胞周期蛋白D1-细胞周期蛋白依赖性激酶4-p21途径调控胃癌癌细胞的增殖和凋亡。5)MCRS1具有抑癌和促癌的双重特性，因MCRS1可抑制TEIF介导的hTERT转录，抑制端粒酶活性和细胞增殖。

综上所述，胃癌淋巴转移患者的胃组织存在RacGAP1与MCRS1即RacGAP1mRNA和MCRS1mRNA在组织高表达，一定程度降低了患者的生存时间。

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