黄颡鱼肠道病原拮抗性芽孢杆菌的合理应用及筛选

黄建华　何志刚　胡浒

摘 要：本文对黄颡鱼肠道病原拮抗性芽孢杆菌的合理应用及筛选的研究，从芽孢杆菌概况入手，分析黄颡鱼肠道中对病原拮抗性芽孢杆菌的筛选，然后阐述病原拮抗性芽孢杆菌在水产中应用，为水产品的生产安全与鱼类的健康养殖提供一定的帮助，对益生菌在黄颡鱼配合饲料中合理应用具有重要的现实意义。

关键词：黄颡鱼；病原拮抗性芽孢杆菌；抗菌性；合理应用；筛选

中图分类号：S943 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20171233116

近几年，随着经济的快速发展，渔民为了追求更多的利润，而长期滥用药物，这不但使耐药性细菌增加而影响水产业食品安全，还威胁了自然环境的安全，甚至是带来严重的社会问题。而黄颡鱼作为我国重要的淡水鱼类，黄颡鱼肠道中病原拮抗性芽孢杆菌可分泌抗菌物质，有效解决了现有生物抗生素耐药性问题，并且不会污染环境及对人类造成伤害。

1 芽孢杆菌概况

芽孢杆菌属于菌科，其对外界有害因子抵抗力较强，分布比较广，存在水、空气及动物肠道等，具有产酶种类多、生物活性强等性质，其对植物性碳水化合物降解能力突出[1]。芽孢杆菌特征是细胞内产生内生孢子，形状为圆形、弧形，具有高光学反射性，物理特性稳定，是一种处于休眠状态的活细胞，特点为耐受高温高压、抗性强及不变质等，属于兼性厌氧菌，存活率比较高，易于进行培养。在制剂中芽孢杆菌以内生孢子形态存在，可耐受饲料加工、储藏，其饲料用后在肠道环境中稳定极高，而孢子进入肠道后则可以迅速复活。

2 黄颡鱼肠道病原拮抗性芽孢杆菌的筛选

由于黄颡鱼肠道中存在大量的杆菌，而如何将有益的病原拮抗性芽孢杆菌进行利用，就要对其进行筛选，其主要分为指示菌、芽孢杆菌的分离与纯化、病原拮抗菌筛选及芽孢杆菌的鉴定，将有益的病原拮抗性芽孢杆菌进行使用，从而促进水产业的可持续发展，以下是具体的内容。

2.1 指示菌

选择健康的黄颡鱼，体重为30～50g，该鱼的体表与体内在解剖后，均无出现出血与充血情况，且肠道无明显的食糜情况。对于脑心浸液（BHI）培养基，采用源于青岛高科园海博生物技术有限公司。将草鱼的柱状嗜纤维菌与嗜水气单胞菌、鳗鲡养殖水体的迟缓爱德华氏菌及罗非鱼的温和气单胞菌进行分离，保存大肠杆菌在本单位。

2.2 芽孢杆菌的分离与纯化

采用无菌方法，将取0.5g黄颡鱼肠断组织，均浆，加无菌生理盐水4.5mL制成原液，待稀释10倍后进行使用。将细菌悬液稀释后放于80℃水浴中，并进行15min的处理。然后在脑心浸液体培养基中进行接种，温度保持在37℃，增菌进行培养24h。待梯度稀释后，在 BHI 平板上涂布0.1mL菌液进行培养。随机对菌落挑取，纯化后接种斜面，在培养后进行保存备用（温度为37℃）。以革兰氏染色與氧化酶的试验每株菌，保留阳性芽孢杆菌。

2.3 筛选病原拮抗菌

对于病原拮抗菌的筛选，需要采用牛津杯法，活化24h芽孢杆菌和指示菌。待离心洗涤后调整浓度为 106cfumL。在BHI平板上进行涂布，以吸取0.1mL指示菌菌液为基础，用无菌镊子，将灭菌后牛津杯取出，置于其上，待轻压后，使杯底与培养基紧贴。加入0.2mL芽孢杆菌菌液于每个牛津杯中，将皿置放置30℃恒温进行培养24h，测量抑菌圈的直径，包括牛津杯直径，将此实验重复进行3次。

2.4 鉴定芽孢杆菌

在培养细菌活化24h后，观察菌落的形态，然后进行革兰氏染色，镜检芽孢以率和形态形成。采用API50CHB试剂盒（法国生物梅里埃公司）进行鉴定。

3 黄颡鱼肠道病原拮抗性芽孢杆菌的合理利用

黄颡鱼肠道中存在大量的杆菌，而对病原拮抗性芽孢杆菌在水产中应用，主要依靠枯草芽孢杆菌。由于枯草芽孢杆菌成杆状，在水体或饲料中进行添加，而芽孢杆菌具有很强的蛋白酶、淀粉酶活性及脂肪酶，可抑制或杀灭水体中或生物体内的一些有害致病菌，使有益菌的群落增强，饲料转化率提高8%以上，促进鱼类生长，从而实现防治水产疾病。

4 结语

本文对黄颡鱼肠道病原拮抗性芽孢杆菌的合理应用及筛选的研究，了解了芽孢杆菌的特点与功能，对其筛选，其主要分为指示菌、芽孢杆菌的分离与纯化、病原拮抗菌筛选及芽孢杆菌的鉴定，对于病原拮抗性芽孢杆菌在水产中合理应用，应根据水产环境与鱼类的实际情况，邀请相关的专家，待分析之后，进行芽孢杆菌的应用，这有利于水产品的生产安全与鱼类的健康养殖，对在黄颡鱼配合饲料中添加益生菌应用具有重要的现实意义。

参考文献

[1]职爱民，贾国超，郑春华，等.芽孢杆菌作为微生物饲料添加剂的功能及其应用[J].饲料与畜牧，2014（5）：41-44.endprint