不同程度溶血对19项生化指标的影响及校正方法的探讨

陈洪燕 李远淼 张厚毅

（1 滕州市滨湖镇卫生院检验科，山东 滕州 277517；2 滕州市龙阳镇卫生院检验科，山东 滕州 277532；3 滕州市中心人民医院检验科，山东 滕州 277599）

溶血是指血液标本由于各种因素而引起的红细胞破裂，使血红蛋白及胞内物质进入血清，使血清呈红色的现象[1]。实际工作中由于真空采血管负压过大，水浴箱温度过高，抽血速度过快，离心分离血清时转速过高等多种原因，溶血现象时有发生，对临床生化检验造成严重干扰，影响临床生化检测结果的准确性。本文主要研究样本不同程度溶血对生化项目检测结果的干扰情况，并根据Hb浓度对检验结果进行校正，现总结如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料：抽取我院门诊2016度11份30例健康体检者血液10 m L，分别注入EDTA-K2抗凝试管、无抗凝剂试管中各5 m L，无肉眼可见的溶血、脂血、黄疸。

1.2 仪器与试剂：迪瑞CS-1200全自动生化分析仪，试剂由迪瑞公司提供的同一批号配套试剂，英国朗道质控品；sysmex XS-900i全自动血液分析仪，并使用希森美康原装配套试剂。检测时仪器性能良好，质控合格。

1.3 方法

1.3.1 将30份血液标本以3000 r/m in离心10 m in，分离不抗凝试管血清和血细胞，并将血清分为H0（500 μL）、H1（490 μL）、H2（480 μL）、H3（460 μL）四管；分离抗凝试管血浆和红细胞，留取红细胞做实验用。

1.3.2 红细胞用生理盐水洗涤5次，弃去上清液，制备压积红细胞。吸取洗涤后的压积红细胞0.5 mL加0.5 m L去离子水，-20 ℃冰箱冻存2 h，然后37 ℃水浴箱内完全融化，使标本充分溶血，再以3000 r/min离心10 min，留取血红蛋白上清液备用。

1.3.3 用sysmex XS-900i血液分析仪检测上清液血红蛋白浓度，如果红蛋白浓度＞100 g/L，则加入适量去离子水，调整血红蛋白浓度等于100 g/L。

1.3.4 用校正过的移液器准确吸取浓度100 g/L血红蛋白液10 μL、20 μL、40 μL、依次加入H1、H2、H3血清管中，混匀各管，H0（Hb=0 g/L）、H1（Hb=2 g/L、）H2（Hb=4 g/L）、H3（Hb=8 g/L）。

1.3.5 四组不同程度溶血标本在迪瑞CS-1200全自动生化分析仪上检测以下项目：ALT（丙氨酸转氨酶）、AST（天冬氨酸转氨酶）、GGT（γ谷氨酰转肽酶）、TP（总蛋白）、ALB（白蛋白）、TB（总胆红素）、DB（直接胆红素）、GLU（葡萄糖）、CHO（总胆固醇、）TG（三酰甘油）、HDL-C（高密度脂蛋白胆固醇）、LDL-C（低密度脂蛋白胆固醇）、CR（肌酐）、UA（尿酸）、UREA（尿素）、LDH（乳酸脱氢酶）、 CK（肌酸激酶）、CK-MB（肌酸激酶同工酶）、α-HBDH（α羟丁酸）19项常用生化项目，记录所有结果，比对，探讨不同程度的溶血标本对生化检验结果产生的影响。

1.4 统计学方法：采用SPSS23.0统计学软件进行统计学分析，数据采用±s表示，组间比较采用单因素分析t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 30份样本未溶血和不同程度溶血19项生化指标测定结果比较，见表1。

表1 19项生化指标不同程度溶血标本测定结果比较表（±s）

表1 19项生化指标不同程度溶血标本测定结果比较表（±s）

注：*表示与未溶组比较差异有统计学意义，P＜0.05

项 目 H0 H1 H2 H3 ALT(U/L) 17.42±6.76 14.75±6.32 13.93±6.85 13.98±7.75 AST(U/L) 20.61±5.21 27.13±6.23 *32.10±6.87 *40.37±8.06 *GGT(U/L) 20.08±5.57 16.83±5.58 13.5±5.99 * 9.33±5.17 *TP(g/L) 70.88±4.22 73.09±4.25 75.72±4.31 *79.81±5.02 *ALB(g/L) 39.78±2.55 40.53±2.54 41.22±2.66 42.21±2.72 *TB(μmol/L) 15.87±5.74 14.06±5.73 12.14±5.42 *9.87±4.75 *DB(μmol/L) 5.85±1.83 5.29±1.85 4.49±1.69 * 3.31±1.54 *GLU(mmol/L)6.01±0.84 5.95±0.85 5.97±0.85 5.98±0.90 CHO(mmol/L)5.39±0.76 5.33±0.79 5.35±0.73 5.35±0.70 TG(mmol/L) 1.60±0.84 1.56±0.86 1.54±0.86 1.53±0.85 HDL-C(mmol/L)1.58±0.19 1.55±0.19 1.52±0.18 1.53±0.19 LDL-C(mmol/L)2.91±0.55 2.88±0.56 2.87±0.55 2.90±0.56 CR(μmol/L) 72.3±26.0 72.4±26.4 72.1±24.9 71.9±23.6 UA(μmol/L)288.6±63.9 273.3±63.7 264.8±62.4 254.8±61.7 UREA(mmol/L)4.32±1.08 4.30±1.07 4.29±1.00 4.33±1.01 LDH(U/L) 155.0±32.6 329.1±53.3 *512.3±61.8 *719.9±98.2 *CK(U/L) 71.0±30.5 88.9±31.3 *106.7±32.5 *127.4±36.5 *CK-MB(U/L)14.50±4.15 47.16±5.99 *82.83±13.11 *135.08±32.00 *α-HBDH(U/L)168.0±34.4 336.8±51.4 *493.0±81.8 *683.0±118.7 *

2.2 Hb浓度与各个生化指标的相关性分析，见表2。

表2 Hb浓度与各个生化指标的相关性分析表

2.3 通过spass软件对Hb浓度与各个生化指标的相关性分析，在α=0.05的检验水准上，以P＜0.05为差异有统计学意义，对与Hb浓度有显著相关的10项生化指标进行回归分析。以Hb浓度X为自变量，以各个生化指标Y为因变量计算各个生化指标的回归方程，并对回归方程进行验证，结果见表3。

表3 10项生化指标的回归方程

3 讨 论

临床工作中，样本溶血是生化检验过程中常见的干扰因素，检测标本的质量直接影响结果的准确性。目前随着全自动生化分析仪的广泛应用和方法特异性的不断提高，采用双波长和双试剂以及设立样本品空白等措施尽可能的减少溶血对测定指标的影响和干扰，但还是难以避免溶血造成的假阳性和假阴性结果，检验人员应详细了解标本溶血对各项检验结果的影响并采取适当的纠正措施[2]。

溶血对生化检验的干扰机制主要包括以下几个方面：①血细胞内高浓度物质逸出，使测定结果增高，如AST、LDH、CK-MB、α-HBDH红细胞内浓度比血清中高出很多倍，轻微溶血即可使检验结果升高，并且随着溶血程度的加深而逐渐增高。而GGT血细胞内浓度则低于血清中，溶血相当于血清被稀释，使测定结果降低[3]。②血细胞内物质进入血清后参与化学反应引起其他物质的浓度改变。在血清CK动力学测定中，因红细胞来源的腺甘酸激酶（AK）参与指示反应，使结果假性升高[4]，偶氮反应测定胆红素时，HB可竞争性抑制胆红素与偶氮试剂的偶氮反应，使测定值低于真实值[5]。③有色物质对吸收光谱的干扰，血红蛋白的颜色影响原实验最佳波长的选择，造成吸光度和散光度产生较大误差，尤其是终点法影响更大[6]。在血清TP、ALB测定中，血红蛋白可对检验产生正干扰，使结果升高。

本研究结果表明溶血可对AST、TP、ALB、LDH、CK、CKMB、α-HBDH检测结果产生正干扰，使结果升高，对GGT、TB、DB产生负干扰，对结果的影响随着溶血程度的加深而增大，与未溶血组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。溶血对生化指标ALT、GLU、CHO、TC、HDL-C、LDL-C、CR、UA、UREA的检测结果与未溶血组相比较无显著差别，差异无统计学意义（P＞0.05）。根据本文的实验结果，我们对与Hb有线性相关的生化指标计算出了二元回归方程，并进行了验证，可根据溶血样本中Hb含量对结果进行校正。

校正后的结果显示溶血程度较轻的样本，相对接近真实值的结果。检验人员发现标本有溶血时，可在仪器上检测血红蛋白浓度，判断溶血对检验结果的影响；及时与临床医师沟通，对于采血困难的急救患者是有一定的参考意义[7]。

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[3]贺伟.溶血标本对48项生化检验结果的影响[J].国际检验医学杂志,2016,37(15):2102-2104.

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