高效液相色谱—质谱联用技术对食品中兽药残留量检测分析

陈敏

摘 要：本文采用高效液相色谱，质谱联用技术法提取、净化样品，在采取0.1mol/L缓冲液以及乙腈混合溶液作为提取溶剂时，四环素兽药、喹诺酮类、磺胺类以及金刚烷胺等兽药的回收效果均较好，回收率均能达到要求，解决了四环素类兽药与喹诺酮类以及磺胺类兽药难以在同时进行提取的问题。

关键词：高效液相色谱 质谱联用技术 兽药残留量

中图分类号：R917 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2017）11（a）-0088-02

随着现代人们对于健康生活的重视，食品安全问题已经得到更多人群的关注，这对于食品检测工作机构来说，无疑是提出了更大的工作挑战，其将会面临着更大的检测工作量。因此，如何建立一套快速的兽药残留药物检测方式显得尤为重要。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

准备的仪器有超高效液相色谱仪、高速离心机、旋涡混合器、超纯水仪以及旋转蒸发仪，准备的试剂有29种兽药，甲酸、乙腈为色谱纯、水为超纯水、吸附剂C18、NH2。

对于以上试剂分别取合适的量进行研究，对于四环素类的兽药溶解以及定容时采用甲醇，对于磺胺类的兽药溶解以及定容时采用乙腈，保存的条件在4℃以下。分别吸取以上的标准储备液0.25mL于25mL容量瓶，用乙腈来进行稀释并定容，配制成质量浓度为1.0mg/L的混合标准工作液I；分别吸取四环素类兽药标准储备液各0.5mL，吸取金刚烷胺标准储备液0.1mL，分别吸取喹诺酮类以及磺胺类兽药标准储备液各1mL于100mL容量瓶，同样也是用乙腈来进行稀释并定容，配制混合标准工作液II，其中四环素类兽药质量浓度为0.5mg/L，金刚烷胺质量浓度为0.1mg/L，其他兽药质量浓度为1.0mg/L。

1.2 样品前处理方法

在50mL离心管中加入2g的标准样品，加入3mL乙腈、2mL 0.1mol/L缓冲溶液，并进行2min旋涡、5min离心，将上清液收集起来放入其他的离心管中。再加5mL乙腈在剩余溶液部分，重复上述动作进行旋涡、离心，将上清液收集放入上述离心管中。在收集的上清液当中放入乙酸200μL，氯化钠1g，再一次进行1min旋涡、5min离心，将上层的2mL乙腈放在离心管中，加入100mg C18、100mgNH2，再进行1min旋涡、5min离心，吹干上清液当中的氮气，在剩下的溶液当中加入甲醇1mL、甲酸水0.1%，进行定容，然后进行过滤。

1.3 色谱条件

色谱柱：AcquityTMBEHRP18柱；流动相：A相，甲酸甲醇0.1%；B相：甲酸水0.1%；进样量：10μL；柱温：30℃。

1.4 质谱条件

电离模式：电喷雾正离子ESI（+）；毛细管电压：3.0kV；离子源温度：110℃；脱溶剂气温度：380℃；脱溶剂气流量：550L/h；锥孔反吹气流量：50L/h；多反应监测扫描模式。

2 结果与讨论

2.1 仪器条件的优化

2.1.1 质谱条件

在处于电喷雾正离子这一模式当中时，扫描标准的溶液就可以将每种类型的兽药所含离子获取，将得到的离子进行扫描就可以获取最佳的碰撞能量值。

2.1.2 梯度洗脱条件的优化

本文的研究中所选取的流动相有两种，第一种为甲醇-0.1%甲酸水，第二种为乙腈-0.1%甲酸水，将这两者进行效果比较，研究显示第一种选择的分离效果要好于第二种。

梯度洗脱条件的优化：在多次研究之后，最好的梯度洗脱条件得以确定，获得了最好的药物分离效果，其药物总离子流色谱图如图1所示。

2.2 定容溶液的选择

在本次研究中，分别对比5种类型的定溶液，通过对比的结果显示，比例为10∶90时效果最好，比例为50∶50时效果最差。通过试验后选择0.1%甲醇-甲酸水为定容溶液。

2.3 样品前处理条件的优化

2.3.1 提取溶剂的选择

对于本次研究来说，选择提取的溶剂是一大难点，对于四环素类兽药与喹诺酮类以及磺胺类兽药来说，难以在同时进行提取工作，依据前人研究的基础之上，采取乙腈作为提取溶剂时，四环素兽药、喹诺酮类以及金刚烷胺等兽药的回收率不高；采取5%醋酸乙腈作为提取溶剂时，四环素兽药、喹诺酮类兽药的回收率也只在20%～30%；采取0.1mol/L缓冲液作为提取溶剂时，喹诺酮类以及四环素类兽药的回收效果较好，相对磺胺类兽药的回收率较低，为50%左右。本文最终选择0.1mol/L缓冲液-乙腈作为提取液。

2.3.2 净化方法的确定

本研究采用0.1mol/L缓冲溶液-乙腈进行提取，取2mL乙腈相，C18、NH2分散杂质，吹干上清液中的氮气，选取1mL甲醇-0.1%甲酸进行定容。

结果表明：净化效果好，吸附剂的用量在50mg时，净化效果较差，用量在100mg时，几乎没有兽药吸附，当用量在150mg时，有少量兽药被吸附，以上数据表明用量在100mg，所达到的效果最好。因此，本文选取用量为100mg 的C18、100mg的NH2。

2.4 效果检测

通过试验表明，29种兽药在合适的质量浓度区间，有着较好的线性关系，在29种兽药的LOQ水平、20μg/kg以及50μg/kg等3个水平做加标回收率试验，每一水平做5个平行样品。称取两样品，加入合适溶液，进行1min涡旋，按照前文的方法来提取、净化、测定。经检测29种兽药在猪肉、鸡肉、猪肝以及鸡肝等当中的回收率平均达到了71.5%～93.2%，符合多残留分析的要求。

3 結语

通过本文的研究，在采取0.1mol/L缓冲液以及乙腈混合溶液作为提取溶剂时，四环素兽药、喹诺酮类、磺胺类以及金刚烷胺等兽药的回收效果均较好，回收率均能达到要求，解决了四环素类兽药与喹诺酮类以及磺胺类兽药难以在同时进行提取的问题，建立了29种兽药快速检测的方法，经检测29种兽药在猪肉、鸡肉、猪肝以及鸡肝等当中的回收率平均达到了71.5%～93.2%，符合多残留分析的要求。并对提取方式、净化方法等有了一个新的优化处理，为食品检测机构提供了更为便捷的检测方式，利于对大量的动物样品兽药的残留情况进行监控。

参考文献

[1] 谭阳阳，牛墨，田红.QuEChERS——超高效液相色谱—串联质谱法在动物源食品中禁限用兽药残留检测中的应用[J].食品安全导刊，2017（9）：112-113.

[2] 韩晔华，张艳芬，刘虎威.色谱质谱技术在食品安全分析检测中的应用[J].食品安全质量检测学报，2016，7（4）： 1578-1586.