犀角散对肝衰竭小鼠胃肠激素的影响※

林晖明 吴中华 尹燕耀 林云华

（1 江西省南昌市第九医院中西医结合肝病科，南昌 330043；2 上海中医药大学科研实验中心，上海 200000）

犀角散对肝衰竭小鼠胃肠激素的影响※

林晖明1吴中华2尹燕耀1林云华1

（1 江西省南昌市第九医院中西医结合肝病科，南昌 330043；2 上海中医药大学科研实验中心，上海 200000）

目的 运用肝衰竭小鼠模型，观察犀角散对肝衰竭胃肠道动力的作用，探索其作用机理。方法 将60只小鼠随机分为犀角散组（A组）、对照组（B组）、生理盐水组（C组），正常小鼠组（D组），前3组进行卡介苗+脂多糖造模；13 d后，观察各组肝脏结构、血清SP、NO含量及回肠始段SP、NO表达。结果 造模组均可见明显肝细胞坏死，A组肝脏坏死程度较轻；肝衰竭小鼠体内血清SP水平及回肠始段SP表达明显下降，血清NO水平及回肠始段NO表达明显升高；犀角散可上调血清及回肠始段SP含量，下调血清内NO含量。结论 肝衰竭小鼠胃肠动力障碍与其体内胃肠激素水平失调有关，犀角散可调整肝衰竭小鼠体内胃肠激素水平。

胃肠激素；犀角散；肝衰竭；小鼠；动物实验；急黄

肝衰竭患者中常见严重的消化道反应，体表胃电图参数亦存在异常[1]，提示患者存在胃肠道动力障碍，胃肠激素是调节胃肠道运动的重要物质之一，目前研究表明，肝衰竭胃肠动力障碍与体内胃肠道激素紊乱有关[2]。在多种疾病在治疗过程中，中医药显示了良好的促胃肠动力作用[3]，但对于肝衰竭胃肠动力的影响研究较少。P物质（SP）是促进胃肠运动的兴奋性递质之一，而一氧化氮（NO）为胃肠运动的抑制性神经递质之一，在胃肠道有广泛的分布。为此，本研究通过观察犀角散对肝衰竭小鼠回肠始段SP、NO含量的影响，以探讨其促胃肠动力的作用机理和中医治疗肝衰竭的可能机制。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 6～8周龄体重18～22 g雄性昆明种小白鼠60只，于上海中医药大学动物实验中心恒温恒湿动物房饲养，12 h明暗交替，自由饮食进水。

1.1.2 实验药品 犀角散药物组成：水牛角30 g，茵陈30 g，黄芩15 g，栀子15 g，升麻15 g，竹叶9 g，生大黄6 g，上述药物由上海中医药大学动物室煎制，制备成水煎剂，生药含量为1.5 kg/L，保存于4℃冰箱备用。

1.1.3 试剂 皮内注射用卡介苗，购自上海生物制品研究所有限责任公司，批号：150102；内毒素脂多糖（LPS）购自美国sigma公司，批号：L-2880；SP、NO抗体购于美国 Santa Cruz公司；EnVision试剂 (HRP/Rabbit)即用型购于丹麦Dako公司。

1.2 实验方法

1.2.1 分组及给药 60只小鼠随机分为4组：犀角散组（A组）、对照组（B组）、生理盐水组（C组）以及正常小鼠组（D组），每组15只。A、B、C 3组于实验第1日尾静脉注射卡介苗2.5 mg（0.2 mL）/只，第2日开始A组给予犀角散0.4 mL/日灌胃；B组不用药；C组给予生理盐水0.4 mL/日灌胃。第13日尾静脉注射LPS 10 ug，16 h后处死。D组不进行造模，同等条件下常规饲养[4]。

1.2.2 标本采集 分组后定时观察所有小鼠的一般情况。实验13 d后，所有小鼠眼眶采血后脱颈处死，并留取肝组织及回肠始段。

1.2.3 血清学检测 小鼠血液经静置1 h后，以2500 r/min离心15 min，取血清，采用ELISA法检测血清SP、NO。

1.2.4 病理学检测 切取约1 mm×1 mm×1.5 mm的肝组织，10%中性福尔马林固定液中固定48 h，经常规漂洗、脱水、置换、包埋、切片、染色后，观察肝脏组织结构变化。切取约1 mm×1 mm×1.5 mm的回肠组织，10%中性福尔马林固定液中固定48 h，经常规漂洗、脱水、置换、包埋、切片、EnVision染色后，观察回肠组织内SP及NO表达。

1.2.5 统计学方法 所有数据采用SPSS 11.5统计软件处理，计量资料用（±s）表示，采用完全随机的方差分析（ANOVA），组间两两比较采用LSD-t检验。

2 结果

2.1 犀角散对肝衰竭小鼠肝组织结构的影响 实验过程中，A组有3只小鼠于注射LPS后16 h内死亡，B组有8只死亡，C组有7只死亡。组间比较死亡率差异无统计学意义。B、C组可见肝组织广泛多发肝细胞坏死灶伴炎细胞浸润，而A组肝脏炎症程度较轻，提示了犀角散对肝脏炎症的抑制作用。

2.2 犀角散对肝衰竭小鼠血清SP、NO的影响 肝衰竭小鼠血清SP水平较正常小鼠明显下降（P＜0.01），NO水平明显升高（P＜0.01）；犀角散可以升高小鼠血清SP水平，下调NO水平。见表1。

表1 各组血清SP、NO的检测结果 ±s，pg/ml）

表1 各组血清SP、NO的检测结果 ±s，pg/ml）

注：与D组比较，a P＜0.01，b P＜0.05；与A组比较，c P＜0.01，d P＜0.05

组别 例数 SP NO A组B组C组D组12 781 5 54.04±2.97 47.55±6.18ac 50.76±5.48a 56.68±2.20 22.64±2.25 25.41±1.98ac 24.84±1.61bd 21.08±3.27

2.3 犀角散对回肠始段SP、NO的影响 肝衰竭小鼠回肠始段SP水平较正常小鼠明显下降（P＜0.05），NO水平明显升高（P＜0.05）；犀角散可以升高小鼠回肠始段SP水平（P＜0.05），对NO水平的影响差异无统计学意义。

表2 各组回肠始段SP、NO阳性面积的检测结果 （s）

表2 各组回肠始段SP、NO阳性面积的检测结果 （s）

注：与D组比较，a P＜0.01，b P＜0.05；与A组比较，c P＜0.05

组别 例数 SP NO A组B组C组D组12 781 5 3.79±0.65 2.95±0.82bc 2.71±0.30ac 4.16±1.93 2.96±0.48 3.44±1.36b 3.36±0.85b 0.83±0.23

3 讨论

肝衰竭患者常见恶心、呕吐，腹胀等严重消化道症状，提示存在胃肠动力障碍。胃肠道动力不足严重降低患者的生活质量，同时也导致患者营养供应不足，影响肝脏再生，对肝衰竭的治疗产生不利影响；部分患者可因消化道动力丧失而出现中毒性鼓肠而危及生命[5]。早期判断胃肠道动力障碍并及时处理，有助于提高肝衰竭治疗的成功率。

胃肠动力主要受中枢神经系统、肠神经系统及胃肠激素的控制和调节，肠神经系统（ENS）是存在于胃肠壁内一个独立于大脑之外的完整神经网络，具有高度的自主性，起着感知、启动和调控胃肠运动、分泌和血供功能，其包括黏膜下神经丛和肌间神经丛，其中肌间神经丛的运动神经元主要支配肠道平滑肌，这些神经元通过它们的末梢释放神经递质，调节小肠平滑肌的运动，ENS运动神经元包括兴奋性和抑制性运动神经元，SP是肠兴奋性运动神经元释放的刺激肌肉收缩的主要神经递质，NO是肠抑制性运动神经元释放的抑制性递质[6]。本研究中可见肝衰竭小鼠回肠始段SP含量的下降及NO含量的升高，提示肝衰竭状态下存在胃肠激素紊乱，SP含量的下降及NO含量的升高可使肠神经系统兴奋性下降，同时抑制肠道蠕动。

肝衰竭病情进展迅速，属于中医“急黄”范畴，即肝瘟病。其基本病机为湿热疫毒内蕴，熏蒸肝胆，肝失疏泄，肠道不利，邪毒壅滞，不能外泄。其治疗重点在于截断病势，扭转病情，当治以解毒通腑为主，犀角散是其治疗的常用方剂之一。犀角散以犀角（水牛角）清热解毒凉血，以黄芩、栀子、升麻、竹叶相配加强清热解毒，以茵陈清热利湿退黄，以生大黄通涤胃肠热毒，共达清热凉血、通腑解毒之目的。本实验结果显示，犀角散能上调血清及回肠始段SP含量，下调血清内NO含量，减轻肝脏炎症程度。探讨其作用机制可能与本方有调整体内胃肠激素水平，提高肠神经系统兴奋性，从而促进肠道蠕动，疏通大肠的作用有关。

明朝著名医家李梴《医学入门·脏腑》中有言“肝与大肠相通”“肝病宜疏通大肠”“肝寄腑于大肠，借道大肠降气泻浊”[7]。由此可见，自古以来肠道功能变化在肝病治疗中的作用就已得到诸多医家的重视，本实验结果提示在肝衰竭治疗中应当重视胃肠激素水平的变化，中医药治疗可以通过调整体内胃肠激素水平，改善胃肠动力，从而达到纠正肠源性内毒素血症，截断病势，阻止肝损伤进展，扭转病情的目的。

[1]米军，吴燕京，金瑞，等.慢性肝衰竭患者体表胃电图表现[J].胃肠病学和肝病学杂志，2011，20(8):691-692.

[2]朱金照，饶俊伟.胃肠激素在肝衰竭大鼠胃肠道动力改变中的影响[J].中国中西医结合消化杂志，2014，22(6):307-309.

[3]刘慧敏.中药胃肠动力学研究概况[J].时珍国医国药，2013，24(12):2983-2985.

[4]Xu HB，Gong YP，Cheng J，et al.CXCL16 participates in pathogenesis of immunological liver injury by regulating T lymphocyte infiltration in liver tissue[J].World J ofgastroenterol，2005，11(32):4979-4985.

[5]方兴刚，过建春.肝功能衰竭患者胃肠道屏障障碍及其治疗研究进展[J].中西医结合肝病杂志，2012，22(1):59-61.

[6]宋美芳，曾南.中药对胃肠动力的调节作用及机制研究[J].四川生理科学杂志，2007，29(4):179-181.

[7]陈英杰.“肝与大肠相通”探析[J].中医研究，2007，20(11):3-8.

The Effect of Xijiao Powder on Gastrointestinal Hormone of Liver Failure Mice

LIN Huiming1,WU Zhonghua2,YIN Yanyao1,LIN Yunhua1
(1.Department of Integrative Medicine,Nanchang Ninth Hospital,Jiangsu Province,Nanchang 330002,China;2.Science Experiment Center,Shanghai University of Traditional Chinese Medicine,Shanghai 201203,China)

Objective To investigate the effects of Xijiao powder on gastrointestinal dysmotility of liver failure mice and to discuss its mechanism.Methods Sixty mice were randomly divided into 4 groups:Xijiao powder group (A group),control group (B group),NS group(C group);and normal group (D group).A group,B group and C group were induced by Bacille Calmette-Guerin and lipopolysaccharide.The mice were sacrificed on the 13th day.The liver tissues of mice were measured.SP and NO of blood and lieum were detected.Results Subsequent LPS challenge in BCG-primed mice induced multilobular hepatocellular necrosis in liver tissue.The hepatocellular necrosis of Xijiao powder group was lighter.The levels of SP were significantly decreased in the liver failure mice'serum and ileum,and the levels of NO were significantly increased.Xijiaosan powder up-regulated SP of blood and lieum,down-regulated blood NO in mice.Conclusion The gastrointestinal motility disorder in liver failure mice is related to the imbalance of gastrointestinal hormone levels.Xijiao powder adjusted gastrointestinal hormone in liver failure mice.

gastrointestinal hormone;Xijiao powder;liver failure;mice;animal experiment;fulminant jaundice

10.3969/j.issn.1672-2779.2017.24.065

1672-2779（2017）-24-0146-02

国家临床重点专科建设项目经费资助【No.国卫医发[2013]42 号】；江西省科技计划项目【No.20141BDH80031】；江西省卫生厅中医药科研计划【No.2013A169】

李海燕 本文校对：宗亚力

2017-10-24）