自组装纳米Venetoclax紫杉醇对乳腺癌影响的研究

何晓宣 李砚超 王磊 王思琪 张存浩 豆瑞静 陈雨 卢梦迪 孙林林

摘 要：目的：自组装成功纳米Venetoclax紫杉醇后，可为临床上治疗乳腺癌提供依据。方法：用不同浓度Venetoclax和紫杉醇单独处理乳腺癌细胞，选取合适的Venetoclax和紫杉醇浓度联合作用乳腺癌细胞，观察细胞活力的变化。结果：纳米Venetoclax紫杉醇能够显著抑制细胞活力，对乳腺癌细胞具有更强的杀伤作用。

关键词：紫杉醇；Venetoclax；乳腺癌细胞

前言

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，据资料统计，发病率占全身各种恶性肿瘤的7-10%，在妇女仅次于子宫癌，它的发病常与遗传有关，以及40～60岁之间，绝经期前后的妇女发病率较高，仅约1-2%的乳腺患者是男性。紫杉醇主要适用于卵巢癌和乳腺癌，对肺癌、大肠癌、黑色素瘤、头颈部癌、淋巴瘤、脑瘤也都有一定疗效。但是不能直接杀死癌细胞，而是促进细胞凋亡的重建。 Bcl-2以及相关促生存基因的过表达会增加细胞凋亡的阈值，因此，尽管使用抗癌药物治疗，癌细胞也依然会存活。Venetoclax一个选择性的Bcl-2抑制剂，对多种肿瘤细胞均具有抑制作用，其中包括白血病、NHL和多发性骨髓瘤等。Souers AJ 等的研究表明，Venetoclax能通过特异性地抑制 Bcl-2蛋白， 激活内源性线粒体凋亡通路，使肿瘤细胞快速凋亡；Venetoclax 在动物模型中并不会引起严重的血小板减少。临床研究显示 Venetoclax单用或联用其他化疗药物均对急性髓细胞白血病（AML）具有一定疗效[1-2]。但是现在还没有人研究Venetoclax单独和联合紫杉醇对乳腺癌的影响，基于此我们用Venetoclax联合紫杉醇研究对乳腺癌的影响。

1材料与方法

1.1试剂与仪器

MEM高糖培养基：美国Gibco公司；胎牛血清：南美血源；紫杉醇：Sigma；Survivin抗體：碧云天生物技术研究所；96孔板：美国Corning公司；Infinite200型酶联免疫检测仪：瑞士Tecan公司。

1.2实验方法

CCK-8：观察培养瓶中细胞生长密度达到达80%时，接种到96孔板。每孔加入100微升，共5000个细胞。培养24小时后，将入不同浓度的药物，作用24小时后，加入CCK-8，在细胞培养箱内继续孵育2-4小时，在450nm测定吸光度。

2结果

2.1不同浓度紫杉醇对人乳腺癌MCF-7细胞增殖活性的影响

细胞活性随紫杉醇浓度的增加逐渐降低，且紫杉醇 10、 20 、40nM组细胞活性明显低于阴性对照组 （ P< 0.01），见表1。

2.2不同浓度Venetoclax对人乳腺癌MCF-7细胞增殖活性的影响

细胞活性随Venetoclax浓度的增加逐渐降低，且Venetoclax 在2.5、5、 10 、20nM组细胞活性明显低于阴性对照组 （ P< 0.01），见表2。

2.3 Venetoclax和紫杉醇联合用药对人乳腺癌MCF-7细胞增殖活性的影响

Venetoclax和紫杉醇联合用药时，细胞活力显著下降，且细胞活性明显低于单独用药组 （ P< 0.01），见表3。

3 分析与讨论

紫杉醇广泛用于治疗转移的乳腺癌、卵巢癌和不适应手术的肺癌等肿瘤患者，导致有丝分裂阻滞和诱导细胞凋亡是其抗肿瘤的主要机制。Bcl-2 是凋亡抑制蛋白家族的新成员，也是迄今为止发现的最强的凋亡抑制因子。化疗药物处理后，在多种肿瘤组织中表达增高。因此，我们在实验中只选择了Bcl-2蛋白抑制剂Venetoclax。Venetoclax是一种B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）抑制剂，虽然不能直接杀死乳腺癌细胞，但是它能提高乳腺癌细胞对化疗药物紫杉醇的敏感性。将Venetoclax和紫杉醇结合，能够明显抑制细胞活力，从而对乳腺癌细胞展现出很好的杀伤效果，为乳腺癌治疗的临床应用打下了坚实的基础。

参考文献：

[1] High efficacy of the BCL-2 inhibitor ABT199 （venetoclax） in BCL-2 high-expressing neuroblastoma cell lines and xenografts and rational for combination with MCL-1 inhibition. Oncotarget. 2016 May 10；7（19）：27946-58.

[2] Venetoclax responses of pediatric ALL xenografts reveal MLLr ALL sensitivity， but overall requirement to target both BCL2 and BCLXL. Blood. 2016. 03-707414.