益气逐瘀法对AMI/抑郁大鼠神经体液的影响及其机制研究

朱雨玫 胡馨 刘红旭

摘要 目的：探讨参元益气活血胶囊（参元丹）对急性心肌梗死（AMI）/抑郁大鼠血清5-羟色胺（5-HT）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平的影响，以研究益气逐瘀法对心梗合并抑郁神经体液的影响机制。方法：将30只Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为正常组、模型组、参元丹高剂量组、参元丹低剂量组、对照组，每组各6只，以冠脉结扎法及慢性轻度不可预知性刺激合并孤养法制作AMI/抑郁模型，分别予参元丹高剂量、参元丹低剂量、氟西汀或蒸馏水灌胃18 d。造模成功3 d后处死，测量各组大鼠血清5-HT、TNF-α水平。结果：血清5-HT浓度比较：与正常组比较，模型组大鼠血清5-HT浓度显著降低（P<0.05），与模型组比较，参元丹干预组大鼠血清5-HT浓度均显著升高（P<0.05）。参元丹干预组与对照组比较，血清5-HT浓度均无显著性统计学意义（P>0.05）。血清TNF-α浓度比较：与正常组比较，模型组大鼠TNF-α浓度无显著性统计学意义（P>0.05）。同模型组比较，对照组、参元丹干预组大鼠血清TNF-α浓度差异亦未呈现出统计学意义（P>0.05），但L-SYD血清TNF-α较各组明显升高。结论：参元丹能改善AMI/抑郁的血清5-HT水平下降的情況，但对血清TNF-α水平无显著影响。

关键词 急性心肌梗死；抑郁；参元丹；5-羟色胺；肿瘤坏死因子-α

Abstract Objective：To observe the effect of Shen Yuan Dan（SYD） on 5-HT in the serum of Sprague-Dawley （SD） rats with acute myocardial infarction（AMI）/depression，and study the mechanisms of the theory Enhancing-qi in Removing-stasis in treating AMI/depression.Methods：Thirty SD rats were allocated into normal group，model group，H-SYD（high dose SYD） group，L-SYD（Low dose SYD） group and control group randomly.The model was estabished by coronary artery ligation with chronic mild unpredictable stimulation and fed alone.Models were given high dose of SYD，low dose of SYD，fluoxetine and distilled water.All the models were put into death 3 days later.The levels of 5-HT and TNF-α in rats serum of different groups were measured.Results：1） Serum 5-HT concentration.Compared with the normal group，5-HT concentration in the model group significantly decreased （P<0.05）； The serum concentration of 5-HT between the SYD group was significantly higher than that of the model group （P<0.05）.The concentration of 5-HT in serum of SYD group and control group had no statistical difference （P>0.05）.2） Serum TNF-α concentration.Compared with the normal group，the serum TNF-α concentration in the model group has no statistical difference （P>0.05），besides，TNF-α in serum of L-SYD group was higher than those of the normal group，control group and H-SYD group but without any significant difference（P>0.05）.Conclusion：SYD can reduce the level of 5-HT in serum but failed to affect TNF-α level.

Key Words AMI； Depression； SYD； 5-HT； TNF-α

中图分类号：R285.5文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2017.02.004

自1977年生理-心理-社会医学模式的提出，心理、社会因素在人体疾病发生中的作用逐渐被重视。抑郁障碍是心肌梗死（Myocardialinfarction，MI）患者常见的情绪障碍，2014年2月24日美国心脏协会（AHA）专家组在《Circulation》上发表的科学声明[1]，正式将抑郁列为与肥胖、糖尿病、高血压和吸烟有同等地位的急性冠脉综合征（ACS）危险因素。两者共病的机制仍不甚清楚，其发病机制可能与血管系统、自主神经系统、下丘脑-垂体-肾上腺轴、免疫系统等人的情绪与心血管系统之间的深层联系及神经内分泌调节有关[2]。有动物实验表明心肌梗死后TNF-α在炎性反应级联反应中起决定性作用。其发病机制包括心肌梗死后免疫系统的激活和TNF-α对BBB的通透性的增加，其中TNF-α破坏BBB的机制有环加氧酶通路的激活、NO的释放、细胞间粘附分子表达增加3方面[3]。5-HT升高介导的血小板聚集是抑郁合并心梗的另一潜在机制。血小板的聚集与冠心病发病有关，血小板活性增高会增加心梗伴抑郁症患者心脏病事件发生的几率。本研究据上述研究成果，对参元丹干预下AMI/抑郁大鼠的5-HT及TNF-α水平进行研究，从而探索益气逐瘀法对AMI/抑郁大鼠神经体液的影响及机制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 动物 SD雄性大鼠，SPF级，体质量（200±23）g。北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证编号：SCXK（京）2007-0001。饲养及实验均在清洁动物房内进行，人工控光（12 h明暗交替，6：00 am—18：00 pm光照）、控温（20 ℃±3 ℃）。

1.1.2 药物 参元丹（SYD，制剂名称：参元益气活血胶囊，北京市药监局批准文号99京卫字[056]第F203号）

1.2 方法

1.2.1 模型制备 急性心肌梗死大鼠模型的建立：腹腔注射3%戊巴比妥钠（30 mg/kg）麻醉后，背位固定，气管插管，连接小型动物呼吸机行人工呼吸，（呼吸频率90次/min，潮气量10～12 mL，呼吸比设为1∶1）。胸骨左旁第3～4肋间切开皮肤，长约1～1.5 cm，逐层钝性分离皮下组织、肌肉，于2～3肋骨间进胸，向右上方推开胸腺，暴露心脏及大血管根部，剪开心包，用6-0 Prolene线在左心耳与肺动脉圆锥交界稍下2 mm处，结扎前降支血管。正常组不进行手术。慢性轻不可预见性应激抑郁模型的建立：在手术成功第2天开始，对动物进行18 d的随机轻度应激刺激，包括禁水（24 h）、禁食（24 h）、夹尾（1 min）、热应激（40 ℃、3 min）、冰水游泳（4 ℃、5 min）、摇晃（每次160 Hz、5 min）、电击足底（30 V、5 s）、昼夜颠倒24 h、行为限制2 h共9种刺激，随机安排到18 d内，每日采用1种刺激，平均每种刺激被采用2次，同种刺激不能连续出现，使动物不能预料刺激的发生。正常组不予任何刺激。

1.2.2 分组与给药方法 30只大鼠随机分为：1）正常对照组（正常组），2）心肌梗死并抑郁模型对照组[模型组，蒸馏水4.5 mL/（kg·d）]，3）参元丹低剂量试验组[L-SYD组，生药1 g/mL的清膏，1.5 g/（kg·d）]，4）参元丹高剂量试验组[H-SYD组，4.5 g/（kg·d）]，5）氟西汀对照组[对照组，0.04%盐酸氟西汀液，4.5 mL/（kg·d）]。每组6只术后连续给药18 d。

1.2.3 检测指标与方法 各组动物统一于实验结束后的次日下午3：00，在心尖博动最强处经皮穿刺取血2 mL，放于5 mL无菌EP管中静置30 min，2 000 r/min离心15 min（离心半径为15 cm）。分离血清，保存于-80 ℃冰箱，用酶联免疫吸附法测定血清1）TNF-α；2）5-HT的含量。

1.3 统计学方法 所有的数据均以均数士标准差表示，多组间总体比较方差齐者采用方差分析（ANOVA），两两比较采用q检验，方差不齐时采用Tamhane检验。以P<0.05为差异有统计学意义。统计分析用SPSS 15.0软件完成。

2 结果

2.1 5组血清5-HT比较 与正常组比较，模型组大鼠血清5-HT浓度显著降低（P<0.05），与模型组比较，参元丹干预组大鼠血清5-HT浓度均显著升高（P<0.05）。参元丹干预组与对照组比较，血清5-HT浓度均无统计学意义（P>0.05）。

2.2 5组血清TNF-α比较 与正常组比较，模型组大鼠TNF-α浓度无显著性统计学意义（P>0.05）。同模型组比较，对照组、参元丹干预组大鼠血清TNF-α浓度差异亦未呈现出统

3 讨论

5-HT，是重要的血管调节物质，也是中枢神经系统重要的神经递质。5-HT对血管的作用主要取决于5-HT受体及内皮功能[4]。生理状态下，5-HT能够舒张小血管，能使血管平滑肌和成纤维细胞增殖，血小板聚集，并能放大生长因子的作用。机体应激时，5-HT反应性增高，对外周血管及组织起到保护作用。然而，持续应激作用时，机体处于病理状态，5-HT过度增高，则会损伤内皮功能，导致机体损伤[5]。Frishman WH[6]等人研究认为，心脏分布有多种5-HT受体，5-HT对心脏有直接的作用，参与了多种心血管疾病的发病。机体处于应激状态时，5-HT水平增高，进而引起多种心理和行为异常[7]。本研究中模型组的血清5-HT较正常组明显下降，这表明应激损伤会消耗血清中的5-HT，合并海马神经递质生成不足，5-HT递质系统的功能明显减退，故5-HT水平下降。对于应用参元丹干预的实验组与模型组比较，参元丹干预后可显著提高抑郁大鼠海马神经递质的生成并增强5-HT递质系统功能，而同种药物干预的高低剂量组间并无明显统计学意义。

抑郁症与一定程度的炎性反应激活相伴发生，促炎性细胞因子升高已成为抑郁症的标志性现象。抗抑郁药能够阻断临床上应用细胞因子免疫治疗的患者出现的抑郁样症状[8]。TNF-α属于前炎症细胞因子，是一系列炎性反应中最早产生的细胞因子。研究表明，心理性应激反应能使脑内情感调节区的TNF-α等促炎症性细胞因子浓度增加[9]。本研究结果未观察到参元丹干预大鼠血清TNF-α浓度与模型组的统计学意义，但参元丹高剂量组血清TNF-α较各组明显下降，提示高剂量参元丹干预可能对AMI/抑郁大鼠的炎性反应有所调控。

参考文献

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