凤仙花不同部位水提液抑真菌效果的实验研究

2017-12-21董晨虹段秀俊阴孟凡胥鹏鹏王嘉琛石高伟光江红

山西中医药大学学报 2017年5期

董晨虹，段秀俊，阴孟凡，胥鹏鹏，王嘉琛，石高伟，光江红

（1.山西中医药大学，山西太原030024； 2.山西中医学院白癜风研究所，山西太原030009）

凤仙花（Impatiens balsamina L.）为凤仙花科凤仙花属一年生草本植物，主要分布于热带地区及亚热带地区，在我国主要产于西南地区，其根、茎、叶、花、种子均可入药，花为凤仙花，叶为凤仙叶，茎为凤仙透骨草，根为凤仙根，种子为急性子［1］。现代研究表明凤仙花含有糖类、黄酮类、醌类、甾醇类、香豆素类等多种化学成分［2-3］。曾荣等［4］用凤仙花水浸剂（1∶3）在试管内进行抗皮肤真菌实验研究，实验表明对堇色毛癣菌、许兰黄癣菌、铁锈色小芽孢癣菌、红色表皮癣菌、腹股沟表皮癣菌等有不同程度的抑制作用。秦海宏等［5］通过小鼠体内抑菌活性实验来观察凤仙花对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制作用。临床上鹅掌风、灰指甲等皮肤病为常见病及多发病，且经久难愈，凤仙花在临床上除用于治疗风湿肢体痿废、腰胁疼痛、妇女闭经腹痛、产后瘀血未尽、跌打损伤、骨折、痈疽疮毒、毒蛇咬伤等，尚用于治疗鹅掌风、灰指甲等手足癣类真菌感染疾病［6］。本实验通过考察凤仙花的根、茎、叶、花、种子等不同部位水提液对红色毛癣菌、石膏样毛癣菌、白色假丝酵母菌与须癣毛癣菌的抑制作用，以期为凤仙花的临床抗真菌应用提供实验依据，也期望从抗真菌的角度扩大凤仙花的药源。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验器材 SLHS-100CH型恒温培养箱（上海一恒科技有限公司）、W-CJ-2G型超净工作台（苏州净化设备有限公司）、THZ-D台式恒温震荡器（山东新华医疗器械股份有限公司）、GZX-9146MBE型鼓风电热干燥箱（上海博讯实业有限公司医疗设备厂）、J2609型酒精喷灯（湖北昌科天平仪器有限公司）、YXQ-LS-50S11型立式压力蒸汽灭菌器（上海博讯实业有限公司医疗设备厂）、SY-2000旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）、EL204型电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）、培养皿、回流管、酒精灯、无菌离心管、游标卡尺、纱布、牛皮纸（天津市化学试剂批发公司）。

1.1.2 药物与试剂凤仙花、凤仙茎、凤仙叶、急性子、凤仙根均由山西中医学院白癜风研究所提供。沙氏葡萄糖液体培养基（批号：20150921）、沙氏琼脂培养基（批号：20150428）均购自青岛高科园海博生物技术有限公司。95%乙醇、甘油（天津市科密欧化学试剂有限公司）均为分析纯，水为去离子水（娃哈哈纯净水）。

1.1.3 实验菌种红色毛癣菌（编号：ATCC-28188）、石膏样毛癣菌（编号：ATCCMYA-4439）、须癣毛癣菌（编号：ATCC-9533）均购自上海瑞楚生物科技有限公司微生物菌种保藏中心。白色假丝酵母菌（编号：CMCC-98001）购于广东省微生物菌种保藏中心。

1.2 方法

1.2.1 水提液的制备分别取凤仙花的根、茎、叶、花、种子各适量，粉碎为粗粉，加入圆底烧瓶中，加水回流提取2次，每次1 h，合并药液，减压浓缩至每1 mL药液相当于原药材0.5 g（0.5 g/mL），灭菌30 min后，放入4℃冰箱保存。

1.2.2 培养基的处理

1.2.2 .1 沙式葡萄糖液体培养基的处理精密称取沙式葡萄糖液体培养基粉末30 g，加热溶解于装有1 000 mL去离子水的锥形瓶中，高温灭菌30 min后备用。

1.2.2 .2 沙式琼脂培养基的处理精密称取沙式琼脂培养基粉末65 g，加热溶解于装有1 000 mL去离子水的锥形瓶中，高温灭菌30 min后，分装于无菌培养皿中备用。

1.2.3 菌液的制备将红色毛癣菌、石膏样毛癣菌、白色假丝酵母菌与须癣毛癣菌等4种菌种冻干粉活化，传至2代后制成混悬液备用。

1.2.4 药敏片的制备取干燥培养皿加入制备好的乙醇提取液20 mL，滤纸紫外灭菌30 min后浸入上述培养皿中4 h，取出放入另一干燥培养皿中，用表面有细孔的牛皮纸包好培养皿，60℃左右干燥后备用。

1.2.5 抑菌实验将上述4种菌液分别划线接种于沙氏琼脂培养基上。取药敏片平贴于培养基表面，压紧。将平面培养基倒置于27℃恒温培养箱中培养24 h，测量抑菌圈直径。

2 结果

凤仙花不同部位水提液的抑真菌效果见表1及图1。

从表1、图1可见，凤仙花不同部位中，花的水提取液对红色毛癣菌、石膏样毛癣菌、白色假丝酵母菌和须癣毛癣菌等4种真菌都具有明显的抑制作用，其余各部位对须癣毛癣菌有较弱抑制性。此外根的水提液尚对白色假丝酵母菌有微弱抑制性；茎的水提液尚对红色毛癣菌有微弱抑制性。叶和种子的水提液对红色毛癣菌、石膏样毛癣菌与白色假丝酵母菌均未呈现抑制作用。

3 讨论

实验结果显示，凤仙花其他部位水提液抑制4种皮肤真菌的效果远不及花的水提液（P＜0.05），说明凤仙花之花是其抗真菌的主要部位，这与传统只用凤仙花治疗鹅掌风、灰指甲等真菌感染疾病的临床应用相一致，也为临床应用凤仙花治疗皮肤真菌病提供了实验依据。

实验结果表明凤仙花抗真菌水提液效果良好，说明凤仙花所含的抑真菌成分具有水溶性。凤仙花其他部位水提液的抑真菌效果不显著，表明凤仙花的根、茎、叶、种子所含抑真菌成分相对偏少，或其所含抑真菌成分水溶性较差，这也是笔者需要进一步研究之处。

在全球抗生素类药物滥用而导致耐药性问题日益突出的背景下，中药与天然药物的开发越来越受到人们的重视。凤仙花性寒味甘微苦，具有祛风除湿、活血止痛、解毒杀虫之功效［7］。临床上皮肤科常用于治疗手足癣、甲沟炎、鹅掌风、灰指甲等真菌性疾病。有学者曾报道用凤仙花提取物治疗神经性皮肤病、疝气痛、痛风等［8］，但目前关于凤仙花，尤其是不同部位抑真菌研究尚未见报道。本文选用4种常见的皮肤病真菌作为研究对象，对凤仙花不同部位水提液的抑菌效果做了初步考察，具体药物浓度与抑菌作用之间的关系以及其他非水溶性成分的抑菌作用还需做进一步的研究。