HPLC测定黄连上清胶囊中大黄素、大黄酚含量

钱婉霞

摘 要：本文采用高校液相测定了黄连上清胶囊中大黄酚和大黄素的含量，固定相为：安捷伦Cl8（4.6mm×250mm，5um），以甲醇-乙腈-0.1%磷酸（75∶5∶20）为流动相，检测波长为254nm；大黄素在20～160μg·mL-1范围内呈良好的线性关系；大黄酚在50～350μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。大黄素和大黄酚的平均回收率分别为99.6%、99.7%，RSD为0.73%（n=6）、0.66%（n=6）；此方法简便、准确、重现性好，可用于黄连上清胶囊中大黄素和大黄酚的含量测定。

关键词：黄连上清胶囊；大黄素；大黄酚

黄连上清胶囊具有清热通便，散风止痛等功效。黄连上清胶囊用于上焦风热所致的头晕脑胀、牙龈肿痛、暴发火眼、口舌生疮、咽喉红肿、大便干燥等。黄连上清胶囊由黄连、大黄、连翘、薄荷、旋覆花、黄芩、荆芥、栀子、防风、石膏、桔梗、黄柏、蔓荆子（炒）、白芷、甘草、川芎、菊花组成。本文采用高校液相测定了黄连上清胶囊中大黄酚和大黄素的含量。

1 仪器与试药

STI-501Plus梯度高效液相色谱仪（赛智科技（杭州）有限公司）；UV-6双光束扫描型紫外可见分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）；PH-660高精度实验室酸度计（上海禾工科学仪器有限公司）；HN-6AL功率可调超声波清洗（上海汗诺仪器有限公司）；XSYF-D实验室废水处理设备（北京湘顺源科技有限公司）；PH-660高精度实验室酸度计（上海禾工科学仪器有限公司）；BT赛多利斯电子天平（北京五洲东方科技发展有限公司）。大黄素和大黄酚对照品由中国药品生物制品检定所提供。磷酸二氢铵（杭州汇普化工仪器有限公司）、乙腈（杭州汇普化工仪器有限公司）、三乙胺（天津市顺隆达科技有限公司）、磷酸二氢钠（天津市顺隆达科技有限公司）、磷酸（天津市顺隆达科技有限公司）、甲醇（杭州汇普化工仪器有限公司）。

2 含量测定

2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-5]。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5μm）；以甲醇-乙腈-0.1%磷酸（75∶5∶20）为流动相，检测波长为254nm；流速1.0mL·min-1；柱温：30℃。理论板数按大黄酚峰计算应不得低于2000。

2.2 供试品溶液的制备

取黄连上清胶囊内容物，精密加甲醇25ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置50ml圆底烧瓶中，挥去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液10ml，超声处理5分钟，再加氯仿10ml，加热回流1小时，冷却，移置分液漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，并入分液漏斗中，分取氯仿层，酸液用氯仿提取2次，每次10ml，合并氯仿液，氯仿液移至锥形瓶中，挥去氯仿，残渣精密加甲醇25ml，称定重量，置水浴中微热溶解残渣，放冷后，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。

2.3 对照品溶液的制备

分别精密称取大黄酚和大黄素对照品12mg、6mg，置100mL容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4 标准曲线的制备

制备浓度为20μg·mL-1、40μg·mL-1、60μg·mL-1、80μg·mL-1、100μg·mL-1、120μg·mL-1、140μg·mL-1、160μg·mL-1的大黄素对照品溶液，制备浓度为50μg·mL-1、100μg·mL-1、150μg·mL-1、200μg·mL-1、250μg·mL-1、300μg·mL-1、350μg·mL-1的大黄酚对照品溶液。分别按大黄素、大黄酚的测定參数继续测定。以吸光度为横坐标，浓度为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，大黄素在20～160μg·mL-1范围内呈良好的线性关系；大黄酚在50～350μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验

依照2.3项下制备对照品溶液，分别精密吸取大黄素和大黄酚对照品溶液重复测定6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD分别为0.63%和0.73%。结果表明，本实验精密度良好。

2.6 重现性试验

分别称取同批黄连上清胶囊样品6份，分别依照2.3项下供试品制备方法制备供试品，按质量标准含量测定项下方法测定含量，并计算样品的RSD值，RSD值为0.79%，0.81%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。

2.7 稳定性试验

依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4小时进样测定，供试品大黄素和大黄酚峰面积的RSD分别为0.81%和0.75%。结果表明大黄素和大黄酚至少在4小时内稳定。

2.8 回收率试验

采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，分精密添加一定量的大黄素和大黄酚对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量，计算回收率。6次测定的平均回收率分别为99.6%和99.7%，RSD分别为0.73%和0.66%。

2.9 样品含量测定

依照上述含量测定方法，测定黄连上清胶囊中大黄素和大黄酚的含量，结果结果三批样品的大黄素和大黄酚的总含量分别为1.52mg/粒、1.59mg/粒、1.56mg/粒。

3 讨论

分别考察0.067moloL-1磷酸二氢铵溶液-乙腈-三乙胺（60∶40：0.02），乙腈-0.05%磷酸二氢钠-三乙胺-磷酸（50：50：0.01：0.01），甲醇-乙腈-0.1%磷酸（75∶10∶15），甲醇-乙腈-0.1%磷酸（75∶5∶20），甲醇-乙腈-pH6.5磷酸盐缓冲液（20∶20∶60），甲醇-0.08%磷酸溶液（25：75），0.2mol/L的乙酸-甲醇（80：20），甲醇-0.1%磷酸（70∶30），水-甲醇-磷酸（10：90：0.01）为流动相，结果以甲醇-乙腈-0.1%磷酸（75∶5∶20）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用甲醇-乙腈-0.1%磷酸（75∶5∶20）为流动相。

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