痤疮合剂的制备及其黄芩苷含量测定

张正贵

（湖北省襄阳市第二人民医院，湖北 襄阳 441001）

痤疮合剂的制备及其黄芩苷含量测定

张正贵

（湖北省襄阳市第二人民医院，湖北 襄阳 441001）

目的制备痤疮合剂并测定方中黄芩苷的含量。方法 采用煎煮法制备痤疮合剂，采用三波长紫外分光光度法测定合剂中黄芩苷的含量。结果黄芩苷质量浓度在3．872～48．530 g／m L范围内与吸光度值线性关系良好，r＝0．9946(n＝7)，平均加样回收率为97．40%，RSD＝1．76%（n＝5）。结论痤疮合剂的制备方法简便易行，质量可控。

痤疮合剂；三波长紫外分光光度法；黄芩苷；质量控制

痤疮合剂由黄芩、枇杷叶、桑白皮、地骨皮、山楂等中药组方，具有清热利湿、解毒泻火及活血凉血的功效，主治痤疮、粉刺、丘疹、脓疱、结节囊肿及皮脂腺炎等症，是我院皮肤科临床验方，应用近6年，临床疗效满意，辨证防治有效率为 92．66%[1]。本研究中制备了痤疮合剂，并以主药黄芩所含成分黄芩苷作为含量测定指标，采用三波长紫外分光光度法测定含量，为建立该合剂的质量控制标准提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

1．1 仪器

UV－2401PC型紫外－可见分光光度计（日本岛津公司）；53WBⅡ型紫外可见分光光度计（上海光学仪器厂）；ES－E120型电子分析天平（上海信衡电子科技有限公司）；恒温箱（武汉电器仪器厂）。

1．2 试药

黄芩苷对照品（湖北省食品药品监督检验研究院，批号为 110765－201614）；痤疮合剂（湖北省襄阳市第二人民医院制剂室自制，批号分别为20160208，20160609，20161015）；其他试剂均为分析纯；试验所用中药材均购自襄阳九州通医药有限公司，由湖北省襄阳市食品药品检验所张勤主任药师鉴定均为正品，符合《中国药典》标准。

2 方法与结果

2．1 处方

黄芩 7．2 kg，枇杷叶 7．2 kg，桑白皮 7．2 kg，地骨皮7．2 kg，山楂 7．2 kg，茵陈 7．2 kg，栀子 4．8 kg，大黄 1．4 kg，石膏14 kg，白花蛇舌草14 kg。

2．2 样品制备

按处方比例称取2．1项下10味药材，置倾斜式夹层煎煮锅中，加水浸泡约1 h，煎煮2次，煎煮时间分别为2 h和1．5 h，合并2次煎煮滤液，置浓缩锅中常压浓缩，于60～70℃测定浓缩液的相对密度，超过1．04即合格，再将合格的浓缩液静置、过滤、分装、消毒，贴标签，即得样品[2]。

2．3 黄芩苷含量测定（三波长紫外分光光度法）

2．3．1溶液制备

对照品溶液：称取经105℃干燥至恒重的黄芩苷对照品25．1mg，精密称定，置50m L容量瓶中，用40%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度为0．502 g／L的溶液，即得。

供试品溶液：准确吸取2．2项下方法制备的痤疮合剂上清液7mL，置分液漏斗中，并连续用乙酸乙酯萃取6次，每次10mL，合并萃取液，置蒸发皿中水浴浓缩至无溶剂[3]，再用40%乙醇溶解，转入100m L容量瓶中，冷却至室温，用40%乙醇定容至刻度，摇匀，即得。

阴性对照品溶液：称取除外黄芩、与痤疮合剂处方同比例的中药材，按2．2项下方法制备 1000 m L阴性样品合剂。取阴性样品合剂，按供试品溶液制备方法制成相当于生药含量为48．08 g／L的溶液，即得。

混合对照品溶液：分别用移液管精密吸取上述对照品溶液2m L和阴性对照品溶液10m L，置100m L容量瓶中，用40%乙醇定容至刻度，摇匀，制成含黄芩苷对照品 10．04μg／m L 和生药 4808μg／m L的溶液，即得。

2．3．2测定波长选择

吸收曲线：取2．3．1项下对照品溶液和阴性对照品溶液，分别以40%乙醇稀释50倍和10倍，制成质量浓度为 10．04，4808μg／m L的稀释溶液。取 2种稀释溶液及2．3．1项下混合对照品溶液，分别以UV－2401PC型紫外－可见分光光度计在200～350 nm波长范围内扫描。以40%乙醇为空白，绘制各溶液的紫外吸收曲线，详见图1。

图1 黄芩苷紫外吸收光谱图

测定波长：根据图1，按作图法及计算法[4－6]任选阴性对照品溶液（干扰组分）的最大吸收波长258．0 nm为λ1，黄芩苷对照品溶液的最大吸收波长 278．3 nm为λ2，求得大概波长 λ3为 302．0 nm，按 ΔA＝ A2－[（λ3－λ2） A1＋ （λ2－λ1） A3] ／[（λ3－λ2） ＋ （λ2－λ1）]，求得使干扰组分 ΔA值为 0的 A3对应的波长 λ3。取 2．3．1项下对照品溶液和阴性对照品溶液，分别以40%乙醇稀释 50倍和 10倍，制成质量浓度分别为 10．04，4808μg／m L的稀释溶液，以 UV－2401PC型紫外－可见分光光度计在200～350 nm波长范围内扫描，测定吸光度，结果见表 1，可知，λ3确定为 303．0 nm。

2．3．3 方法学考察

线性关系考察：精密量取0．502 g／L的黄芩苷对照品溶液 0．4，0．5，0．8，1．0，2．0，4．0，5．0 mL，分别置50 mL容量瓶中，加40%乙醇稀释至刻度，摇匀，以40% 乙醇为空白，分别于 258．0，278．3，303．0 nm 波长处测定吸光度，以ΔA值对质量浓度(C)进行线性回归，得回归方程 ΔA＝0．03053C－0．001574，r＝0．9946（n＝7）。结果表明，黄芩苷质量浓度在 3．872 ～48．530μg／m L范围内与 ΔA线性关系良好[7]。

精密度试验：精密吸对照品贮备液20μL，照线性关系考察方法重复测定吸光度5次，记录ΔA值。结果的 RSD为1．15%(n＝52)，表明仪器精密度良好。

表1 计算法选择测定波长 3结果

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于0，2，6，10，16 h时测得 ΔA值。结果的 RSD 为 1．09(n＝5)，表明供试品溶液在16 h内基本稳定。

重复性试验：取同一批样品合剂（批号为20161015）适量，依法制备供试品溶液，平行测定吸光度5次。结果的RSD为1．05%（n＝5），表明方法重复性良好。

加样回收试验[8]：准确吸取已知黄芩苷质量浓度的样品7 mL，共5份，分别置分液漏斗中，分别加入一定量的黄芩苷对照品溶液，摇匀，依法制备供试品溶液。再用40%乙醇稀释10倍，以40%乙醇为空白，测定其在258．0，278．3，303．0 nm 波长处的吸光度，计算加样回收率。结果见表2。

2．3．4样品含量测定

准确量取3批痤疮合剂上清液，依法制备供试品溶液。以 40%乙醇为空白溶液，依法测定在 258．0，278．3，303．0 nm波长处的吸光度，计算ΔA，代入回归方程，求得供试品溶液中黄芩苷的质量浓度（μg／m L），并换算成合剂中黄芩苷的质量浓度（g／L）。结果见表3。

表2 黄芩苷加样回收试验结果（n＝5）

表3 样品中黄芩苷含量测定结果

3 讨论

痤疮合剂是我院皮肤科疗效确切的中药制剂，已应用近20年，已取得当地制剂生产批号（鄂药制字Z20081773），该制剂中黄芩具有清热解毒、澡湿泻火的功效，是方中君药[9－10]，由于黄芩苷的含量检测比较成熟，关于黄芩苷的检测手段也比较多，但大多数报道均采用高效液相色谱法[11]，对于基层医院，受无高效液相色谱仪的条件限制，故本研究中采用三波长分光光度法对黄芩苷进行含量检测，所采用的紫外－可见分光光度计成本较低，在基层医院也较普及，方法重复性也很好。

中医认为，痤疮病多因湿热蕴结而起，故以清热利湿、解毒泻火及活血凉血功效来组方[12－14]。在测定该合剂的黄芩苷成分时，单用单一波长进行测定，由于阴性干扰，无法测定，故采用三波长方法测定，可有效消除阴性干扰。从3种组分的紫外图谱可以看出，混合组分的最大吸收波长与标准品的最大吸收波长相同，均在278．3 nm 波长处。

痤疮合剂所含成分较多，制剂原料及制备工艺均直接影响制剂疗效[15]，方中黄芩为君药，对本制剂的疗效有一定代表性，选其作为检测对象。由测定结果可见，痤疮合剂中黄芩苷的含量在 0．335～0．349 g／L 内。本法操作简便、结果准确，可作为该合剂质量控制中的定量方法。但本方法也存在一定不足，如对于合剂检测前的预处理较繁杂，不符合现代快检的要求，有待今后改进。

[1]钱 梅，万 宏．痤疮合剂质量标准的研究[J]．湖北中医杂志，2011，33（9）：67－68．

[2]曹春林．中药药剂学[M]．上海：上海科学技术出版社，1986：244．

[3]李学斌，张玉成，邓光瑞，等．黄芩及双黄连注射剂中黄芩苷含量测定[J]．中成药，1992，14（8）：16－17．

[4]过乃蓉，刘 军，陈震华，等．三波长分光光度法的原理及应用[J]．分析化学，1983，11（6）：408．

[5]魏璐雪．中药制剂分析[M]．武汉：湖北科学技术出版社，1991：15－16．

[6]刘明乐，王洪军，黄德红，等．三波长分光光度法测定愈风Ⅱ号合剂中黄芩苷的含量[J]．湖北中医学院学报，2003，5（1）：34．

[7]张振巍，白丹丹，张娜娜，等．三波长校正系数法测定一清胶囊中黄芩苷的含量[J]．中国药师，2013，16（4）：555．

[8]肖坤福．三波长分光光度法测定多穗柯叶中黄酮的含量[J]．时珍国医国药，2006，18（6）：82．

[9]张喜平，田 华，程琪辉．黄芩苷的药理作用研究现状[J]．中国药理学通报，2003，23（11）：89－90．

[10]李 雪，付守廷．黄芩苷药理作用研究新进展[J]．沈阳药科大学学报，2008，26（2）：85－87．

[11]金 涛，仇雅静．HPLC测定痤疮合剂中黄芩苷的含量[J]．海峡药学，2004，16（4）：63．

[12]白姗姗，边风华．耳尖放血联合桑芩合剂治疗湿热证痤疮临床观察[J]．中医药通报，2016，15（1）：52．

[13]邱慧娟，王 晖，孙明翠．除湿清热方治疗痤疮的临床应用 [J]．中医临床研究，2016，8（28）：70．

[14]杨 宁．自拟痤疮合剂治疗寻常型痤疮胃肠湿热证44例临床观察[J]．云南中医中药杂志，2016，37（1）：41．

[15]国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）[M]．北京：化学工业出版社，2000：附录ⅦA，附录ⅦG．

Preparation of Acne Mixture and Content Determination of Baicalin

Zhang Zhenggui

（ The Second People′s Hospital of Xiangyang City， Xiangyang， Hubei， China 441001）

Objective To prepare Acne Mixture and determine the content of baicalin in Acne Mixture．Methods Decoction method was used for production of Acne Mixture and the content of baicalin in the Acne Mixture was determined by three－wavelength ultraviolet spectrophotometry．Results The mass concentration of baicalin had a good linear relationship with the absorbance value in the range of 3．872－48．530 μg／mL（r＝0．9946，n＝7），the average recovery was 97．40% ，and the RSD was 1．76% （n＝5）．Conclusion The preparation method of Acne Mixture is simple，and the quality is controllable．

Acne Mixture；three－wavelength ultraviolet spectrophotometry；baicalin；quality control

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2017)24－0025－03

10．3969 ／j．issn．1006－4931．2017．24．008

张正贵（1962－），男，大学本科，主管中药师，研究方向为中药制剂的研发，（电子信箱）1160725705＠qq．com。

2017－07－04；

2017－09－17)