八聚体结合转录因子4在子宫内膜异位症组织中的表达及临床研究

张英芝，劳佩维，朱淼华

(宁波大学医学院附属医院，浙江 宁波 315020)

·基础与临床研究·

八聚体结合转录因子4在子宫内膜异位症组织中的表达及临床研究

张英芝，劳佩维，朱淼华

(宁波大学医学院附属医院，浙江 宁波 315020)

目的：探讨八聚体结合转录因子4(OCT4)在子宫内膜异位症组织中的表达情况及其临床意义。方法采用免疫组化方法检测OCT4蛋白在60例子宫内膜异位症患者的异位内膜组织及在位内膜组织中、50例正常在位子宫内膜组织中的表达情况。结果OCT4蛋白在子宫内膜异位症的异位内膜组织中和正常在位内膜组织中的阳性表达率分别是81.7%和42.0%，差异有统计学意义(P<0.05)。AFS分期为Ⅲ-Ⅳ期的子宫内膜异位症的异位内膜组织中的OCT4蛋白的阳性表达率高于Ⅰ-Ⅱ期(P<0.05)。结论OCT4在子宫内膜异位症的发生、发展中发挥作用，且OCT4随临床分期的加重而表达量增加，表明OCT4在子宫内膜异位症的发展中有促进作用。

子宫内膜异位症； OCT4； 异位子宫内膜； 免疫组化法

子宫内膜组织(腺体和间质)出现在子宫体以外的部位时，称为子宫内膜异位症(Endometriosis，EMT)[1]。异位子宫内膜来源至今尚未阐明，最近研究发现，子宫内膜异位症的发生与子宫内膜组织中干细胞的异常活性有关[2]。作为干细胞相关基因的八聚体结合转录因子4(Octamer-Binding Transcription Factor 4，OCT4)在子宫内膜癌组织中的异常表达已经有较多的研究[3]，但是，OCT4是否与子宫内膜异位症的发生相关，在子宫内膜异位症中OCT4的表达情况等研究报道较为少见。本研究应用免疫组织化学的方法，检测OCT4蛋白在子宫内膜异位症组织中的表达情况，探讨OCT4在子宫内膜异位症发生发展中的作用以及与临床分期的关系。

1 资料与方法

1.1 资料来源

选取2016年6-12月期间在宁波大学医学院附属医院妇一科行腹腔镜手术、病理证实为子宫内膜异位症的患者60例，按美国生育学会(AFS)的“修正子宫内膜异位症分期法”[1]分期为Ⅰ-Ⅱ期的27例，Ⅲ-Ⅳ期的33例，每例患者均取异位内膜组织和在位内膜组织作为标本。另选同期因宫腔粘连行宫腔镜手术患者的正常在位子宫内膜组织50例作为对照组。所有入选的患者术前半年内均未行激素类治疗，未放置过宫内节育器，子宫内膜无其他病变，并取得患者知情同意。所有标本均经病理证实。

1.2 实验试剂和仪器

兔抗人OCT4多克隆抗体(美国eBioScience公司)；SABC 免疫组化试剂盒及DAB显色试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)；PBS缓冲液(武汉博士德生物工程有限公司)；其他试剂及仪器由宁波市病理中心提供。

1.3 实验方法

所有标本组织经10%中性福尔马林液固定，石蜡包埋，制成4μm连续切片。采用免疫组织化学SABC法检测组织中OCT4蛋白量，严格按照SABC试剂盒说明书进行操作。实验中均设阳性和阴性对照片，用PBS代替一抗处理的切片作为阴性对照，以试剂公司提供的阳性片作为阳性对照。

1.4 结果判定

OCT4蛋白主要在细胞核和细胞质中表达。切片中以细胞质和细胞核内出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性染色，所有切片均由2名高级职称病理医师双盲阅片。结果判定采用sinicrope改良法[4]，取4个高倍镜视野计数阳性细胞，阳性细胞百分比<5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分；染色强度分级评分：0分，无染色；1分，弱染色；2分，中度染色；3分，强染色。根据2项得分相乘之积判断阳性强度，0分为(-)，1～4分为(+)，5～8分为(++)，9～12分为(+++)。以乘积≤4分定义为阴性表达，>4分为阳性表达。

1.5 统计学处理

数据应用SPSS17.0软件处理，采用t检验比较研究组和对照组的年龄、体重指数(BMI)及血清CA125的差异；用χ2检验比较2组的痛经情况以及不同组织、不同分期的内膜组织中的OCT4蛋白的阳性表达率，以P<0.05为差异有统计学意义(3组间两两比较取P<0.0167为差异具有统计学意义)。

2 结果

2.1 研究对象一般情况的比较

研究组和对照组患者的一般情况比较见表1，2组患者在年龄、BMI方面无明显差异，但研究组患者的痛经发病率明显高于对照组(P<0.05)，而且血清CA125水平也显著升高(P<0.05)。

表1 研究对象的一般情况比较

2.2 组织中OCT4蛋白的表达

OCT4蛋白主要表达于细胞核和细胞质中，在EMT患者的异位膜、在位内膜以及对照组的子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞中均有表达。不同组织中的OCT4蛋白的表达情况见表2，与对照组的子宫内膜比较，EMT患者的异位内膜中OCT4的阳性表达率明显增高(χ2=18.54，P=0.000)，差异有统计学意义(P<0.0167)。

表2 OCT4蛋白在不同组织中的表达情况

2.3 不同分期的异位内膜组织中OCT4蛋白的表达

AFS分期为Ⅲ-Ⅳ期的EMT患者异位内膜中OCT4蛋白的阳性表达高于Ⅰ-Ⅱ期(P<0.05)，见表3。

表3 不同AFS分期的EMT异位内膜组织中 OCT4蛋白的表达

3 讨论

八聚体结合转录因子(OCT4)是近年来发现的一种转录因子，是胚胎干细胞维持自身更新及分化潜能的核心转录因子。在正常成体细胞及恶性肿瘤组织中OCT4的表达已有较多的报道。Padykula[5]提出人类子宫内膜的强再生能力是由子宫内膜干细胞调控的。在子宫内膜组织中存在子宫内膜上皮细胞及基质细胞的祖细胞，而且发现OCT4也存在于子宫内膜组织中。本文中检测正常子宫内膜组织中有OCT4的表达，与文献相符。

近几年研究发现，子宫内膜异位症的发生与子宫内膜组织中干细胞的异常活性有关[2]。作为干细胞相关基因的OCT4，在子宫内膜异位病灶的形成中发挥上调作用[6]。本文的研究结果显示OCT4在EMT患者异位内膜组织中的表达明显高于对照组内膜组织，提示OCT4因其干细胞特性在子宫内膜异位症的发病机制中发挥一定作用。另外，在子宫内膜异位症临床分期期别越高的组织中OCT4的表达量越大，随病情发展而增加，提示了OCT4对子宫内膜异位症的促进作用。

CA125是目前比较公认的卵巢上皮性癌的检测指标，合并有卵巢内异囊肿的卵巢癌患者的血清CA125值明显升高。有研究表明，OCT4可促进异位子宫内膜细胞的自我更新及增强细胞生存能力，而且是促进子宫内膜细胞转移的分子机制基础[7]。本研究中，卵巢内异症患者的血清CA125水平明显高于对照组，因此可推测OCT4在促进EMT向卵巢癌转变中发挥重要作用。

综上所述，子宫内膜异位症患者异位内膜组织中OCT4蛋白的表达均显著高于正常的子宫内膜组织，提示OCT4在子宫内膜异位症的发生、发展中可能发挥作用。且随着临床分期的加重，OCT4的表达量增加，表明OCT4对子宫内膜异位症的病情发展可能有促进作用。这是OCT4对子宫内膜异位症作用的初步研究，并不能揭示OCT4在EMT发生、发展中的作用机制，仍需大量的实验数据证实其在异位子宫内膜组织中高度表达，及促进子宫内膜细胞转移的作用。随着对OCT4研究的不断深入，也许可以为探讨子宫内膜异位症的发病机制提供一条新的思路，为治疗EMT带来一种新的方法。

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ExpressionofOCT4anditsclinicalsignificanceinendometriosis

ZHANGYingzhi,LAOPeiwei,ZHUMiaohua

(The Affiliated Hospital of Ningbo University Medical School,Zhejiang 315020,China)

ObjectiveTo investigate the expression of OCT4 protein in endometriosis and its clinical significance.MethodOCT4 protein expression in ectopic endometrium tissues and eutopic endometrium tissues obtained from 60 patients with endometriosis,and the normal endometrium tissues from 50 patients with intrauterine adhesion were detected by immunohistochemistry.ResultThe positive rates of OCT4 in ectopic endometrium tissues and eutopic endometrium tissues with endometriosis,and the normal endometrium tissues were 81.7%,63.3% and 42.0%, respectively (P<0.05).The positive rates of OCT4 in endometriotic tissues with AFS stage for Ⅲ-Ⅳ of endometriosis were significantly higher than that with Ⅰ-Ⅱ phase(P<0.05).ConclusionOCT4 correlates to the occurrence and progress of endometriosis. The expression of OCT4 were increased significantly with the clinical stage of the increase .OCT4 may play an important role in the development of endometriosis.

endometriosis; OCT4; ectopic endometrium; immunohisto chemistry

张英芝(1976-)，女，浙江金华人，硕士，副主任医师。研究方向：妇科肿瘤及妇科内镜诊疗

R711.71

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1672-0024(2017)06-0049-03