卡前列甲酯-羟丙基-β-环糊精包合物舌下片的制备及质量评价Δ

何瑶，阮一，李卓恒，王丽娟，李峥（.重庆市急救医疗中心药剂科，重庆40004；.陆军军医大学第三附属医院药剂科，重庆40000；.重庆医药高等专科学校药学院，重庆40；4.重庆市第五人民医院药剂科，重庆40006）

卡前列甲酯-羟丙基-β-环糊精包合物舌下片的制备及质量评价Δ

何瑶1＊，阮一1，李卓恒2，王丽娟3，李峥4#（1.重庆市急救医疗中心药剂科，重庆400014；2.陆军军医大学第三附属医院药剂科，重庆400020；3.重庆医药高等专科学校药学院，重庆401331；4.重庆市第五人民医院药剂科，重庆400062）

目的：制备卡前列甲酯-羟丙基-β-环糊精（HP-β-CD）包合物舌下片，并进行质量评价。方法：采用湿法制粒法制备卡前列甲酯-HP-β-CD包合物舌下片，以片剂的外观、崩解时间、润湿时间、主药含量为考察指标，以处方中甘露醇-乳糖的质量比、聚维酮的体积分数、低取代羟丙纤维素（L-HPC）的用量为因素，采用正交试验筛选处方。评价最优处方所制舌下片的崩解时间、润湿时间、主药含量、含量均匀度及溶出度。结果：最优处方为卡前列甲酯-HP-β-CD包合物78.82 mg（含卡前列甲酯1 mg），甘露醇-乳糖（质量比9∶1）的混合粉末100 mg，2%的PVP溶液适量，L-HPC 30 mg，硬脂酸镁1 mg。所制3批舌下片的崩解时间为（25.30±3.21）～（26.53±2.69）s，润湿时间为（64.65±8.07）～（65.54±7.21）s，主药含量为（96.13±0.43）%～（97.06±0.82）%，含量均匀度为5.95～7.68，10 min内累积溶出度均超过50%，30 min内可完全溶出。结论：成功制得质量符合要求的卡前列甲酯-HP-β-CD包合物舌下片。

卡前列甲酯；羟丙基-β-环糊精；包合物；舌下片；正交试验；质量评价

卡前列甲酯为前列腺素F2α衍生物，具有多种生理生化功能，对血管、支气管、子宫和胃肠道平滑肌舒缩及胃酸分泌均有影响，还可以影响血小板和血管内皮细胞功能，被广泛用于防治产后出血[1]。卡前列甲酯水溶性小，对光、热、湿等外界因素敏感，性质不稳定。目前仅有卡前列甲酯的栓剂（商品名：卡孕）上市，其药品说明书给药途径为阴道给药，且需在－5℃条件下储存。较多临床研究和专家共识表明，将卡孕栓通过口腔黏膜给药用于产后出血，能迅速吸收并达到有效血药浓度而发挥效果[1-3]。在此基础上，本课题组希望将卡前列甲酯制成口服制剂，以增加临床应用时的选择剂型。

舌下黏膜给药系统将药物制备成适宜剂型通过黏膜吸收，避免了首关效应，能有效提高药物生物利用度。本课题组前期试验已经制备了卡前列甲酯-羟丙基-β-环糊精（HP-β-CD）包合物，已证实其可显著改善卡前列甲酯的溶解性能、提高药物稳定性、促进药物吸收。因此，本课题组拟通过处方筛选和制备工艺研究，将卡前列甲酯-HP-β-CD包合物制成舌下片，旨在为临床提供一种稳定性好，贮藏、使用方便，生物利用度高的卡前列甲酯新型给药制剂。

1 材料

1.1 仪器

LC-2010型高效液相色谱仪，包括2010型四元梯度泵和2010型紫外检测器（日本Shimadzu公司）；PM300型分析电子天秤（瑞士Mettler-Toledo公司）；TDP型单冲压片机（上海第一制药机械厂）；ZB-IB型智能崩解仪（天津大学精密仪器厂）；ZRS-8G智能溶出试验仪（天津大学无线电厂）。

1.2 药品与试剂

卡前列甲酯对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100320-201302，纯度：99.2%，）；HP-β-CD（山东新大精细化工有限公司，批号：20130622）；卡前列甲酯-HP-β-CD包合物（重庆市急救医疗中心自制，批号：20151003，规格：79 mg含有卡前列甲酯1 mg）；甘露醇（法国Roquette公司，批号：120594）；乳糖（海拉尔乳糖厂，批号：15-8665）；低取代羟丙纤维素（L-HPC，上海运宏化工有限公司，批号：20130911）；聚维酮（PVP，上海维酮材料科技有限公司，批号：20141093）；硬脂酸镁（淄博市鲁川化工有限公司，批号：20140725）；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2 方法

2.1 卡前列甲酯-HP-β-CD包合物舌下片的制备

2.1.1 处方卡前列甲酯-HP-β-CD包合物78.82 mg（含卡前列甲酯1 mg），甘露醇与乳糖的混合粉末100 mg，1%～3%（V/V）浓度的PVP溶液适量，L-HPC适量，硬脂酸镁1 mg。

2.1.2 制备工艺按“2.1.1”项下处方量称取卡前列甲酯-HP-β-CD包合物、甘露醇与乳糖的混合粉末，混匀，再加入L-HPC，过40目筛混匀后，再加入PVP溶液作为黏合剂制成软材；过20目筛制粒，50℃干燥2 h；过40目筛整粒，最后加入硬脂酸镁，混匀后压片机压制成片。

2.2 卡前列甲酯的含量测定方法

2.2.1 对照品溶液的制备取卡前列甲酯对照品100 mg，精密称定，置于10 mL棕色量瓶中，用流动相稀释并定容至刻度，制得质量浓度为10.0 mg/mL的对照品溶液，于4℃下保存，备用。

2.2.2 供试品溶液的制备取20片卡前列甲酯-HP-β-CD包合物舌下片，研细，取2.00 g粉末（相当于卡前列甲酯10 mg），置于50 mL棕色量瓶中，用流动相超声（功率200 W，间隔5 s）20 min溶解，静置至室温，用流动相定容。取约40 mL上述溶液，2 000 r/min（离心半径：3 cm）离心5 min，取上清液，经0.45 μm微孔滤膜过滤，制得供试品溶液，于4℃下保存，备用。

2.2.3 空白溶液的制备按照“2.1.1”项下处方中辅料配比制备不含卡前列甲酯-HP-β-CD包合物的空白片剂，

再按“2.2.2”项下方法制成空白溶液，于4℃下保存，备用。

2.2.4 色谱条件参考文献[4]色谱条件。色谱柱为Hypersil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-水（70∶30，V/V）；流速为1 mL/min；柱温为室温（25～30℃）；检测波长为202 nm；进样量为20 μL。取对照品溶液、空白溶液和供试品溶液，进样测定。结果，在该色谱条件下，卡前列甲酯的保留时间约为12.2 min，理论板数以卡前列甲酯计大于8 000，空白溶液在对照品溶液色谱图中的相同保留时间处无吸收峰，表明辅料不干扰卡前列甲酯的测定。色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图Fig 1HPLC chromatograms

2.2.5 线性关系考察分别移取对照品溶液0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，置于10 mL量瓶中，流动相定容至刻度，制得质量浓度分别为0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL的系列对照品溶液。按“2.2.4”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，以卡前列甲酯质量浓度为横坐标（x）、峰面积为纵坐标（y）进行线性回归，得回归方程为y＝0.257 8x+0.015 6（r＝0.999 6，n＝7）。结果表明，卡前列甲酯在0.05～1.0 mg/mL的质量浓度范围内与峰面积的线性关系良好。以3倍信噪比计算得检测限为0.4µg/mL；以10倍信噪比计算得定量限为1.0µg/mL。

2.2.6 精密度试验按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.4”项下色谱条件进样测定。同日内测定5次考察日内精密度；每日测定1次，连续测定5 d，考察日间精密度。结果，峰面积日内RSD为0.54%（n＝5），日间RSD为0.88%（n＝5），符合含量测定相关规定。

2.2.7 准确度考察按“2.1.1”项下处方量取各辅料，加入10 mL的流动相溶解，再分别加入1 mL的对照品溶液制备成低、中、高质量浓度（0.2、0.4、0.8 mg/mL）的样品溶液。按“2.2.2”项下方法处理后测定并计算回收率。结果，低、中、高质量浓度样品溶液的回收率分别为（99.96±0.98）%、（100.07±0.67）%、（100.12±0.55）%（n＝3），符合含量测定相关规定。

2.2.8 稳定性试验取卡前列甲酯-HP-β-CD包合物舌下片适量，按“2.2.2”项下方法制成供试品溶液，分别放置于0、12、24、36、48、60、72 h时进样测定，记录峰面积。结果，峰面积的RSD为1.23%（n＝7），表明供试品溶液在72 h内稳定。

2.2.9 重复性试验取卡前列甲酯-HP-β-CD包合物舌下片适量，按“2.2.2”项下方法制成供试品溶液，分别量取供试品溶液6份，进样测定，记录峰面积。结果，峰面积的RSD为0.55%（n＝6），符合含量测定相关规定。

2.3 正交试验设计优选处方

2.3.1 因素与水平通过查阅文献[4-9]，结合前期预试验，选择处方中填充剂甘露醇-矫味剂乳糖的质量比（A）、黏合剂PVP的体积分数（B，%）、崩解剂L-HPC的用量（C，mg）为因素，每个因素选择3个水平，因素与水平见表1。

表1 因素与水平Tab 1Factors and levels

2.3.2 评价指标参考文献[5-8]，以片剂的外观、崩解时间、润湿时间、主药含量为指标进行综合评分，设计正交试验优化卡前列甲酯-HP-β-CD包合物舌下片处方。综合评分总分为10分，其中外观1分（表面光滑，有亮泽，计1分；表面粗糙，有麻点、粉尘，计0分）；崩解时间3分（30 s以内，计3分；30～60 s，计2分；大于60 s，计1分）；润湿时间3分（50 s以内，计3分；50～90 s，计2分；大于90 s，计1分）；主药含量3分（大于95%，计3分；90%～95%，计2分；小于90%，计1分）。正交试验设计与结果见表2，方差分析结果见表3。

由表2和表3结果可知，各因素对综合评分的影响大小顺序为C＞A＞B，其中A和C对综合评分有显著影响（P＜0.05），B对综合评分无显著影响（P＞0.05）。根据数据分析，确定最优处方为A3B2C3，即甘露醇-乳糖质量比为9∶1、PVP体积分数为2%、L-HPC用量为30 mg。

2.4 质量评价

表2 正交试验设计与结果Tab 2Design and results of orthogonal test

表3 方差分析结果Tab 3Results of variance analysis

以最优处方制备3批卡前列甲酯-HP-β-CD包合物舌下片，对其进行质量评价。

2.4.1 含量测定将3批样品按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.4”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，代入回归方程计算卡前列甲酯的含量。结果，卡前列甲酯-HP-β-CD包合物舌下片中卡前列甲酯含量均在标示量的90.0%～110.0%范围内，结果见表4。

表4 3批卡前列甲酯-HP-β-CD包合物舌下片的质量评价结果（±s，n＝9）Tab4Resultsofqualityevaluationof3batchesofCarboprostmethyl-HP-β-CD clathrate sublingual tablets（±s，n＝9）

表4 3批卡前列甲酯-HP-β-CD包合物舌下片的质量评价结果（±s，n＝9）Tab4Resultsofqualityevaluationof3batchesofCarboprostmethyl-HP-β-CD clathrate sublingual tablets（±s，n＝9）

批号20160317 20160318 20160319含量，%96.13±0.43 97.06±0.82 96.77±0.96崩解时间，s 25.30±3.21 26.53±2.69 25.79±4.75润湿时间，s 65.54±7.21 64.65±8.07 65.54±5.76含量均匀度7.68 7.22 5.95 30 min累积溶出度，%101.76±1.35 99.97±1.65 101.70±1.79

2.4.2 崩解时限测定参照2015年版《中国药典》（四部）“崩解时限的测定方法”[10]，分别取3批样品各6片，置于升降式崩解仪转篮中，测定其崩解时限。结果显示，3批样品的崩解时间均不超过35 s，见表4。

2.4.3 润湿时限测定参照文献[11]方法，取一张吸水纸（8 cm×4 cm），对折后放入pH 6.8的10 mL磷酸盐缓冲液（PBS）的培养皿（直径9.5 cm）中，待其完全吸收饱和时，倾出多余溶液。取3批样品，各6片，分别置于吸水纸中心，直到水分分散至整个片剂为止，记录时间。结果显示，3批样品的润湿时间均不超过80 s，具体见表4。

2.4.4含量均匀度参照2015年版《中国药典》（四部）“含量均匀度检查方法”[10]，分别取3批样品各6片，以含量测定项下测定的结果计算含量均匀度（A+1.8S）。结果显示，3批样品的含量均匀度均小于8，具体见表4。

2.4.5 溶出度测定参照2015年版《中国药典》（四部）“溶出度的测定方法”[10]，采用桨法测定3批样品的体外溶出度。设定转速为50 r/min，水温为（37±0.5）℃，溶出介质为pH 6.8的PBS 1 000 mL，取样时间为5、10、15、20、30、45、60 min，取样量为10 mL，取样同时补加等量同温介质。溶出液经0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。以PBS为空白，进样测定续滤液中卡前列甲酯的含量，计算累积溶出度。结果显示，3批样品在10 min时的累积溶出度均已超过50%，30 min内可完全溶出，见表4。3批样品的体外溶出曲线见图2。

图23 批卡前列甲酯-HP-β-CD包合物舌下片的体外溶出曲线Fig 2The in vitro dissolution curves of 3 batchesofCarboprostmethyl-HP-β-CD clathrate sublingual tablets

3 讨论

由于卡前列甲酯对光、热、湿等外界因素敏感，性质不稳定，因此其舌下片处方所用辅料应符合吸湿性小的条件。有研究针对常用辅料的吸湿性进行了对比[6，11-12]，甘露醇、乳糖溶解性好又有甜味，几乎无吸湿性，且在已上市的舌下片制剂中广泛使用，因此为卡前列甲酯-HP-β-CD包合物舌下片的理想填充剂和矫味剂。本课题组前期试验比较了分别单用甘露醇和乳糖作为填充剂的情况，试验发现单用甘露醇时，流动性较乳糖差；单用乳糖时，制得的片剂易出现表面粗糙、有麻点等现象，因此本试验最终选择甘露醇和乳糖的混合粉末作为填充剂。

由于舌下片舌下含服仅依靠唾液润湿药片，使药片崩解，在服药时不得饮水，因此舌下片要求在少量水环境下即可达到快速崩解溶出。结合2015年版《中国药典》（四部）片剂质量要求，并参考文献[4-8，13-15]，本研究选择了崩解时间、润湿时间、体外溶出度和含量均匀度为指标进行质量评价。其中，在2015年版《中国药典》（四部）中并没有明确规定润湿时间的测定方法和标准。因此，本试验参照文献方法进行润湿时限测定，试验结果表明，该方法适用于本研究中的舌下片，测定润湿时间较准确。通过对卡前列甲酯-HP-β-CD包合物舌下片质量评价，结果显示，该舌下片质量指标符合相关规定，制备工艺也较简单，适合于工业化生产。本文为卡前列甲酯新剂型的研究提供了试验依据，但有关其药动学试验还需进一步研究。

本研究首次将卡前列甲酯-HP-β-CD包合物制备成舌下片，具有较好的开发前景，对于临床产后出血防治的新剂型的研发具有很好的参考价值。

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Preparation and Quality Evaluation of Carboprost Methyl-hydroxypropyl-β-cyclodextrin Clathrate Sublingual Tablets

HE Yao1，RUAN Yi1，LI Zhuoheng2，WANG Lijuan3，LI Zheng4（1.Dept.of Pharmacy，Chongqing Emergency Medical Center，Chongqing 400014，China；2.Dept.of Pharmacy，the Third Affiliated Hospital of Army Medical University，Chongqing 400020，China；3.School of Pharmacy，Chongqing Medical and Pharmaceutical College，Chongqing 401331，China；4.Dept.of Pharmacy，the Fifth People’s Hospital of Chongqing，Chongqing 400062，China）

OBJECTIVE：To prepare the Carboprost methyl-hydroxypropyl-β-cyclodextrin（HP-β-CD）clathrate sublingual tablets，and conduct quality evaluation.METHODS：Wet granulation method was used to prepare Carboprost methyl-HP-β-CD clathrate sublingual tablets.Using the appearance，calving time，wetting time and main drug content as investigation indexes，mass ratio of mannitol-lactose，povidone volume fraction and amount of low-substituted hydroxypropylcellulose（L-HPC）as factors，orthogonal test was used to screen the formulation.The calving time，wetting time，main drug content，content uniformity，dissolution degree of sublingual tablets with optimal formulation were evaluated.RESULTS：The optimal formulation was as follow as 78.82 mg of carboprost methyl-HP-β-CD clathrate（containing carboprost methyl 1 mg），100 mg of mannitol-lactose（mass ratio of 9∶1）mixed powder，appropriate amount of 2%povidone solution，30 mg of L-HPC，and 1 mg of magnesium stearate.The calving time of prepared 3 batches of sublingual tablets was（25.30±3.21）-（26.53±2.69）s；wetting time was（64.65±8.07）-（65.54±7.21）s；main drug content was（96.13±0.43）%-（97.06±0.82）%；content uniformity was 5.95-7.68；the cumulative dissolution degree within 10 min was more than 50%，and it can completely dissolute within 30 min.CONCLUSIONS：Carboprost methyl-HP-β-CD clathrate sublingual tablets，which are up to requirements，are prepared successfully.

Carboprost methyl；Hydroxypropyl-β-cyclodextrin；Clathrate；Sublingual tablets；Orthogonal test；Quality evaluation

R943

A

1001-0408（2017）34-4860-04

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.34.28

重庆市卫生和计划生育委员会医学科研计划项目（No.20142078）

＊主管药师，硕士。研究方向：医院药学、药剂学。电话：023-63692203。E-mail：27382552@qq.com

#通信作者：主管药师。研究方向：医院药事管理、临床药学、药剂学。电话：023-62875628。E-mail：597220337@qq.com

2017-06-03

2017-08-30）

（编辑：邹丽娟）