喹啉铜原药高效液相色谱分析方法研究

梁永星 ，吴燕飞 ，邓欣毅 ，蓝宏彦 ，邓明娟 ，邓明学

（1.柳州市惠农化工有限公司，广西柳州 545616；2.广西特色作物研究院，广西桂林 541004）

喹啉铜原药高效液相色谱分析方法研究

梁永星1，吴燕飞1，邓欣毅1，蓝宏彦1，邓明娟1，邓明学2*

（1.柳州市惠农化工有限公司，广西柳州 545616；2.广西特色作物研究院，广西桂林 541004）

探索喹啉铜原药日常检测可用的高效液相色谱法。以甲醇、冰乙酸和0.8%氯化钠水溶液为流动相，使用ODS-2 C18色谱柱和紫外可变波长检测器，在250 nm波长下对喹啉铜原药进行分离和定量分析。该分析方法的线性相关系数为0.999 9，标准偏差为0.077 8，变异系数为0.08%，平均回收率为99.84%。该方法操作简单、快捷，准确度和精密度均能达到定性和定量分析的要求。

喹啉铜；原药；高效液相色谱；分析

喹啉铜（oxine-copper）为螯合态有机铜杀菌剂，对真菌、细菌性病害具有优异的防治效果。其作用方式独特，通过在作物表面形成致密保护膜，阻断病菌与作物接触，阻止病原菌侵染作物。喹啉铜还可以作用于病原菌内部，抑制病原菌主要传导物的活动和传导，从而杀死病原菌[1]。

目前，报道的喹啉铜检测方法有气相色谱法、液相色谱法[1-4]。前者采用硫酸水溶液处理喹啉铜，使其完全分解成8-羟基喹啉和硫酸铜，用EDTA溶液络合Cu2+，测定铜离子含量，再用二甲苯萃取8-羟基喹啉，用气相色谱法测定8-羟基喹啉的含量，并换算出喹啉铜的含量[1]。此方法不仅费时、繁琐，而且准确度易受到影响。后者用甲醇做溶剂，由于喹啉铜微溶于甲醇，实验中一般称取少量喹啉铜溶于大量甲醇，并经过长时间加热超声使其充分溶解。然而，过小的称样量和过量稀释试样，不仅会对产品分析的准确度和精密度产生影响，还会造成试剂的浪费，增加分析成本。另外，过长的超声提取时间也不能满足快速分析的要求。

虽然喹啉铜不溶于水和一般有机溶剂，但较易溶于冰乙酸，在20倍冰乙酸中全溶。因此，以冰乙酸为助溶剂，选择甲醇＋冰乙酸＋0.8%氯化钠水溶液为流动相，并以流动相为稀释剂对喹啉铜原药进行定量分析。该方法操作简单、快捷，分离效果好，准确度和精密度均能达到定性和定量分析的要求，且成本低。方法适用于企业开展常规含量检测。

1 试验部分

1.1 试剂和溶液

甲醇：色谱纯；2次蒸馏水：2级水，电导率（25℃）≤0.10 mS/m；冰乙酸：分析纯，已知质量分数≥99.5%；氯化钠：分析纯，已知质量分数≥99.5%；喹啉铜标样：已知质量分数98.2%，国家农药质量监督检验中心提供；喹啉铜原药，柳州市惠农化工有限公司提供。

1.2 仪器

液相色谱仪：岛津LC-20AT高效液相色谱仪，带可变波长紫外检测器；威玛龙色谱工作站；色谱柱：WondaCract ODS-2 C18不锈钢色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；过滤器：滤膜孔径约0.45 μm。

1.3 液相色谱操作条件

流动相：V（甲醇）∶V（冰乙酸）∶V（0.8%氯化钠水溶液）=28∶2∶70；流量：1.0 mL/min；柱温：室温；检测波长：245 nm；进样体积：20 μL。喹啉铜保留时间约为5.2 min。标样和试样的高效液相色谱图分别见图1、图2。该操作条件是典型的色谱条件，可根据不同仪器和不同色谱柱进行适当的调整，以获得最佳分离效果。

图1 标样液相色谱图

图2 试样液相色谱图

1.4 标样溶液的配制

称取0.05 g喹啉铜标样，精确至0.000 2 g，置于50 mL容量瓶中，用2 mL冰乙酸溶解后，再用流动相稀释到刻度，超声波振荡5 min，冷却至室温。用移液管准确吸取该溶液1.0 mL于50 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。用0.45 μm滤膜过滤，滤液备用。

1.5 试样溶液的配制

称取含喹啉铜0.05 g的试样，精确至0.000 2 g，置于50 mL容量瓶中，用2 mL冰乙酸溶解后，再用流动相稀释到刻度，超声波振荡5 min，冷却至室温。用移液管准确吸取该溶液1.0 mL于50 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。用0.45 μm滤膜过滤，滤液待测。

1.6 测定

在上述色谱操作条件下，待仪器稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻2针的喹啉铜峰面积相对变化＜1.5%时，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。用外标法计算其含量。

1.7 计算

将测得的2针试样溶液及试样前后2针标样溶液中喹啉铜峰面积分别进行平均，试样中喹啉铜质量分数w（%）按下式计算。

式中：A1—标样溶液中喹啉铜峰面积的平均值；A2—试样溶液中喹啉铜峰面积的平均值；m1—标样的质量，g；m2—试样的质量，g；P—标样中喹啉铜的质量分数，%。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件的选择

通过岛津LC-20AT高效液相色谱仪的光谱数据采集功能，获得喹啉铜紫外波长扫描图（图3）。从图中可以看出，喹啉铜最大吸收波长在252 nm处，在205 nm处也有较大吸收。为了尽量减少溶剂的干扰，将检测波长定为250 nm。

图3 喹啉铜紫外色谱图

色谱柱选择常规的WondaCract ODS-2 C18不锈钢色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）。依据喹啉铜理化性质，用冰乙酸溶解，并用流动相稀释样品，以甲醇、冰乙酸和氯化钠水溶液作为流动相。为了得到更好的分离效果和峰形，将流动相按不同比例在色谱柱上进行试验，最终确定流动相甲醇＋冰乙酸＋0.8%氯化钠水溶液的体积比28∶2∶70。在流速1.0 mL/min时，有效成分色谱峰峰形对称，无杂质峰干扰，基线平稳，能在短时间得到分析结果，提高了工作效率。

2.2 分析方法线性相关性试验

量取1.4中配制的标样母液0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL，分别置于5个50 mL容量瓶中，用流动相稀释到刻度，摇匀过滤后待测。按1.3色谱操作条件分别进样。以喹啉铜质量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制线性相关曲线，如图4。

图4 喹啉铜线性关系图

2.3 分析方法精密度试验

分别称取5个平行试样（准确至0.000 2 g），按1.3色谱条件进行分析，计算喹啉铜的标准偏差和变异系数（表1）。

表1 分析方法精密度试验结果

2.4 分析方法准确度试验

称取已知含量的样品5份（0.050 8 g、0.051 3 g、0.049 7 g、0.050 3 g、0.049 2 g），精确至0.000 2 g，分别加入不同质量的喹啉铜标样，在1.3操作条件下进行分析。测得喹啉铜的平均回收率为99.84%，方法的准确度较高（表2）。

表2 分析方法准确度试验结果

3 结论

试验建立了高效液相色谱法检测喹啉铜原药中有效成分的质量分数。试验结果表明，本方法具有较高的准确度和精密度，线性关系良好，且简便、快速，分离效果好，是产品质量控制和应用研究中较为理想的分析方法。

[1]郭利丰,肖鸣,黄雅俊.33.5%喹啉铜悬浮剂的气相色谱分析研究[J].现代农药,2011,10(5):38-40.

[2]周梦春,蔡磊明,赵凌宜,等.喹啉铜原药高效液相色谱分析方法[J].农药,2008,47(12):891-892.

[3]李国平,单炜力,王国联.高效液相色谱法测定混剂中喹啉铜和噻菌灵[J].农药科学与管理,2005,26(9):38-40.

[4]章新,朱惠贤,王林,等.微柱高效液相色谱法测定Cu(HQ)2和HQ[J].云南民族大学学报:自然科学版,2005,14(2):123-124.

Analytical Method of Oxine-copper TC by HPLC

LIANG Yong-xing1,WU Yan-fei1,DENG Xin-yi1,LAN Hong-yan1,DENG Ming-juan1,DENG Ming-xue2*
(1.Liuzhou Huinong Chemical Co.,Ltd.,Guangxi Liuzhou 545616,China;2.Guangxi Academy of Specialty Crops,Guangxi Guilin 541004,China)

A method for separation and quantitative analysis of oxine-copper TC by HPLC was established.The oxine-copper TC was separated and determined using methanol,aceticacid and 0.8%sodium chloride aqueous solution as mobile phase,on ODS-2 C18column,with UV detector at 250 nm wavelength.The results showed that the linear correlation coefficient was 0.999 9,the standard deviation was 0.077 8,the variation coefficient was 0.08%,the average recovery was 99.84%.The method was simple,fast,and had high precision and accuracy.It was suitable for the analysis of oxine-copper TC.

oxine-copper;TC;HPLC;analysis

TQ 450.7

A

10.3969/j.issn.1671-5284.2017.06.009

2017-06-28

广西公益性科研院所基本科研业务费专项（201504）

梁永星（1980—），男，广西壮族自治区柳州市人，工程师，主要从事农药分析工作。E-mail：503768450@qq.com

邓明学（1964—），男，广西壮族自治区全州县人，副研究员，主要从事柑橘病虫害防治和农药应用技术研究。E-mail：dengmxgl@163.com

（责任编辑：顾林玲）