高效液相色谱法检测纺织品中孔雀石绿染料

薛建平++林丽云+陈金泉++裴德君

摘要

本文以1%甲酸-乙腈为提取溶剂，结合超声波提取前处理和高效液相色谱分析技术，建立了纺织品中孔雀石绿染料的快速检测方法。该方法的平均回收率为93.4%～98.7%，相对标准偏差小于5%，方法检出限为0.01mg/kg，定量限为0.03mg/kg。方法简单快速、准确度高、检出限低，可满足纺织品中孔雀石绿含量的日常检测要求。

关键词：纺织品；孔雀石绿染料；高效液相色谱

1 引言

孔雀石绿是一类三苯甲烷类染料，被广泛应用于制陶业、纺织业、皮革业、食品染色和细胞化学染色，既是工业性染料，又是一种杀真菌剂[1]。在纺织领域中，孔雀石绿染料主要用于丝绸、羊毛的染色。但孔雀石绿与人体长期接触，会进入人体还原成无色孔雀石绿，该物质具有致畸致癌的危害[2]。2016年1月，国际环保纺织协会发布了新一版OEKO-TEX Standard 100，新标准将孔雀石绿作为禁用致癌染料列入其中。但目前，纺织品中孔雀石绿的检测方法还未见有文献报道。

目前国内外与孔雀石绿检测相关的研究多集中在水和水产品上。对于水和水产品中孔雀石绿的检测，已报道的检测方法主要有高效液相色谱法[3-5]和高效液相色谱串联质谱联用法[6-7]，其中前者设备价格相对低廉，开发的检测方法易于推广。本文采用高效液相色谱-二极管阵列检测器（HPLC-DAD）对纺织品中的孔雀石绿染料进行分析研究，建立一套可靠的定性定量检测方法。

2 试验部分

2.1 试剂和材料

孔雀石绿标准品（CAS号为2437-29-8），纯度为97%，购于Dr. Ehrenstorfer公司；乙腈、甲酸均为色谱纯；乙酸铵、乙酸纯度均大于99%；试验水为超纯水。

1%甲酸-乙腈提取溶剂的配制：在100mL乙腈中加入1mL的甲酸，混匀。

标准储备液的配制：分别准确称取适量的孔雀石绿标准品，用1%甲酸-乙腈配制成浓度为1000mg/L的标准储备液。使用时，用1%甲酸-乙腈逐级稀释配制成1.0mg/L、0.75mg/L、0.25mg/L、0.1mg/L、0.03mg/L系列混合标准工作溶液。

2.2 设备和仪器

1260高效液相色谱仪-二极管阵列检测器（美国Agilent公司）；ZORBAX SB-CN色谱柱、ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱（4.6mm×250mm，膜厚5μm，美国Agilent公司）；超声波发生器（昆山市超声仪器有限公司）；聚四氟乙烯过滤膜（0.22?m）。

2.3 试验方法

2.3.1 试样提取

取纺织试样，剪成约5mm×5mm的小片，混匀。从混合样中称取1.0g（精确至0.01g），置于50mL具密封塞的管状瓶中，准确移取10mL的1%甲酸-乙腈，于超声波发生器中室温下萃取20min，用0.22μm聚四氟乙烯膜过滤后供色谱分析。

2.3.2 仪器分析

色谱柱：ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱（250mm×4.6mm，5?m）；柱温30℃；进样体积20?L；流动相乙腈：0.1mol/L乙酸铵缓冲液（用乙酸调至pH=4.5）为60：40；流速1.0mL/min；DAD检测器波长618nm。

3 结果与讨论

3.1 提取溶剂的选择

对于在水产品中孔雀石绿残留量的检测，一般采用乙腈作为提取溶剂。徐彦辉[6]等人认为，在酸性条件下对孔雀石绿进行提取，可提高回收率。本试验比较了乙腈和1%甲酸-乙腈对纺织品中孔雀石绿的提取效果，在本试验的考察范围内，乙腈对目标物的提取回收率仅为75.8%，而使用含1%甲酸的乙腈作为提取溶剂，目标物的回收率大幅提高，达97.5%。因此，试验确定采用1%甲酸-乙腈作为提取溶剂。

3.2 色谱柱的选择

本试验在其他条件相同的情况下，考察了ZORBAX SB-CN柱（4.6mm×250mm，5μm）和ZORBAX Eclipse Plus C18柱（4.6mm×250mm，5μm）对孔雀石绿的分析效果，结果见图1～图2。图中的结果表明，使用该两种色谱柱，目标物的峰形都很好。但考虑到使用ZORBAX Eclipse Plus C18柱时目标物峰宽会略窄些且保留时间适中，因此试验最终选用ZORBAX Eclipse Plus C18柱进行色谱分离。

3.3 检测波长的选择

在190nm～900nm波段对孔雀石绿的标准溶液进行DAD光谱扫描，光谱图见图3。如图所示，孔雀石绿在316nm、426nm和618nm三个波长处有吸收，其中618nm处的吸收最强，因此试验选择618nm作为孔雀石绿的检测波长。

3.4 流动相的选择

试验以乙腈-乙酸铵缓冲液体系为流动相，考察了乙腈与乙酸铵缓冲液的不同体积比例对孔雀石绿的分析效果，选择体积分数分别为40%、50%、60%、70%、80%的乙腈溶液进行试验，结果见表1。表中的结果表明，随着流动相乙腈的体积比例增大，分析物的保留时间逐渐缩短，峰宽逐渐变窄，峰面积也随之小幅增大。当乙腈体积分数为70%～80%时，分析物的峰宽较窄，但出峰时间太早，容易被杂质峰干扰；当乙腈体积比例小于60%时，峰形宽大拖尾，出峰时间太长；当乙腈的体积分数为60%时，峰形尖锐对称，保留时间适中，避开了杂质峰的干扰。因此，本试验选择体积比例为60%乙腈作为分析流动相。

3.5 线性关系与方法检出限

在优化的条件下，取1.1中的系列标准工作溶液进样分析，以目标物的质量浓度对峰面积进行线性回归，结果表明孔雀石綠在0.03mg/L～1.0mg/L范围内具有良好的线性关系，其相关系数R2为0.9998。以信噪比大于3确定方法的检出限，以信噪比大于10确定方法的定量限，孔雀石绿的方法检出限和定量限分别为0.01mg/kg和0.03mg/kg。endprint

3.6 方法的回收率和精密度

在1.0g的空白毛纺织贴衬布中添加不同量的孔雀石绿标准溶液，使水平分别为0.03mg/kg、0.25mg/kg、1.0mg/kg，按优化的条件进行加标回收试验，每个水平做7次平行试验，得到的回收率和相对标准偏差（RSD）见表2。由结果可知，孔雀石绿的平均回收率为93.4%～98.7%，RSD为1.3%～3.5%，符合日常检测的要求。

4 结论

采用高效液相色谱法测定纺织品中的孔雀石绿的方法为：选用1%甲酸-乙腈对纺织品中的孔雀石绿进行超声提取，选择ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱进行分离，以乙腈/0.1mol/L乙酸铵缓冲液（60/40，v/v）作为流动相，在618nm的DAD波長下进行检测。方法的平均回收率为93.4%～98.7%，RSD为1.3%～3.5%，方法检出限为0.01mg/kg，定量限为0.03mg/kg。该方法检出限低，准确度和精密度高，能够满足纺织品中孔雀石绿的检测要求。

参考文献：

[1]Culp S J，Beland F A.Malachite green： a toxicological review[J].Journal of the American College of Toxicology，1996，15（3）：219-238.

[2]何丽华，沈国顺，邹伟，等.孔雀石绿及其危害[J].特养与水产，2006（5）：45-48.

[3]杨金兰，陈培基，黎智广，等.高效液相色谱法测定水产品孔雀石绿残留量的优化研究[J].南方水产，2010，6（4）：43-48.

[4]吴仕辉，朱新平，郑光明，等.高效液相色谱法检测水产品中的孔雀石绿和结晶紫[J].广东海洋大学学报，2009，29（1）：54-57.

[5]李永夫，高华鹏，姚芳，等.高效液相色谱法检测鳗鱼中孔雀石绿及其代谢物残留[J].安徽农业科学，2009，37（1）：31-33.

[6]徐彦辉，顾亮，蒋俊树，等.液相色谱串联质谱法测定养殖水体中孔雀石绿及其代谢物[J].化学分析计量，2011，20（2）：49-51.

[7]孙言春，李池陶，杜宁宁，等.超高效液相色谱串联质谱法测定水体与底泥中孔雀石绿及隐色孔雀石绿残留[J].分析测试学报，2013，32（2）：205-210.

（作者单位：福建省纤维检验局）endprint