撒瓦那柏芽诱导增殖试验

周余华　金文浩　邹迎子

摘要：以撒瓦那柏1年生茎尖作为外植体，研究氯化汞对外植体的影响，并筛选合适的初代和继代培养激素添加。结果发现，对撒瓦那柏茎尖用01%氯化汞处理7～8 min灭菌效果最好，用MS作为初代培养基，添加1 mgL 6-BA 诱导率达60%，添加005 mgLNAA诱导率达80%；以MS+6-BA 05 mgL+NAA 005 mgL为继代培养基，诱导率达795%。

关键词：撒瓦那柏；灭菌；芽诱导；增殖培养

中图分类号： S68704+3文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2017）21-0039-03[

收稿日期：2016-06-02

基金项目：江苏农林职业技术学院乡土树种种质资源创新团队项目（编号：2013td04）。

作者简介：周余华（1964—），男，江苏泰兴人，博士，副教授，主要从事园林植物生理生态研究及教学生产。E-mail：uua16hot@126com。

撒瓦那柏（Chamaecyparis pisifera cv aurea）别称金色海岸线、金叶日本花柏、金叶撒瓦那扁柏，为柏科扁柏属植物，属于常绿彩化针叶树中的黄化品种。树皮呈薄片红褐色。鳞叶紧贴，小枝下垂，细长。3月开花，雌球花单生枝顶，雄球花椭圆形，雌雄同株，球果11月成熟，种子有棱角微扁卵圆形，种鳞盾形木质。温带及亚热带树种，性喜温暖湿润气候，喜光，抗寒耐旱耐半阴，喜深厚沙壤土，能适应平原环境。幼苗期每年的生长量较小，到郁闭后才会进入旺盛生长阶段，耐修剪。生长高度和蓬径均可达12 m。原产日本，我国北京、南京、青岛、庐山、上海、杭州等地均有栽培，上海市绿化管理局推荐的新优植物品种名录中就有该种植物[1]。撒瓦纳柏姿态婆娑，枝黄纤弱，观赏价值良好，可用于多种场合，如在园林中可丛植、群植、孤植于供庭园、门边、屋隅；花园里可以将其布置成小土丘状，新叶呈现明亮金黄色，垂下的枝条好似一个小瀑布姿态优雅，尽显品味，可以给人带来惬意舒畅的感觉。因此，撒瓦纳柏是园林中色块运用、模纹镶拼、彩篱构建的绝佳材料，是稀少的色彩稳定的柏科植物[2-3]。然而，由于其繁殖速度缓慢，市场上还没有销售。

撒瓦那柏可以进行播种、扦插和压条繁殖，但是都存在一定的不足，因此通过组织培养加快撒瓦纳柏的繁殖速度就成为一条很重要的快繁捷径。本研究对撒瓦纳柏采用不同的氯化汞消毒时间，启动培养和继代培养的培养基和激素添加，确立最佳氯化汞消毒时间、最佳培养基及激素配比浓度，为撒瓦那柏组织培养的进一步研究奠定良好基础，为撒瓦那柏规模化生产和工厂化育苗提供技术支撑。

1材料与方法

11试验材料

本试验所采用的材料来自江苏农林职业技术学院苗圃，在连续放晴4 d后于2015年3月7日采集撒瓦那柏健壮1年生茎段的无病虫害外植体。

12试验设计及方法

121外植体的整理

摘取撒瓦那柏1年生枝条的茎尖，剪切成长约25 cm的茎段，放入白瓷缸中用加了少量洗衣粉的水搓洗2 min，将泡沫淘洗干净后于自来水下流水冲洗12 h，待进行消毒处理试验。

122消毒处理

先用75%乙醇处理30 s，再用01%氯化汞（HgCl2）进行消毒处理，时间分别设置为4、5、6、7、8、9 min 6个处理，最后用无菌水冲洗4次，残留的水分用无菌滤纸吸取。将消毒完毕的茎尖置于无菌纸上，用剪刀、镊子剪去茎尖的下端02 cm，以免影响其从培养基中吸收养分，接种于MS[HJ14mm]培养基上，每处理接种20瓶，每个试管型组培瓶放1个外植体。培养基为MS+30 gL蔗糖+7 gL琼脂。每隔1 d觀察1次外植体的污染情况，8 d后对外植体的死亡率、污染率和成活率进行统计。

13启动培养

筛选不同的培养基MS、12MS、WPM，选用不同的6-BA[HJ]和NAA的浓度：6-BA浓度分别为05、10、15 mgL，NAA的浓度分别是005、010、020 mgL，共计18种处理，每种处理20瓶，每试管瓶置1个外植体（表1）。研究不同激素不同浓度下外植体萌芽情况。萌发率=萌发数接种数×100%。

14继代增殖培养技术研究

将启动培养中的撒瓦纳柏茎段枯黄部分剪去，将诱导的芽体接入6-BA和NAA混合激素的MS培养基中，诱导其产生丛生芽并使其扩繁。继代增殖培养采用3种激素浓度的方法进行梯度试验，共计9种处理，每种处理20瓶，培养基 20 mL瓶（表2）。诱导率=新芽发生数接种数×100%（接种30 d后统计成苗数）。

15培养条件

培养基内均添加7 gL琼脂和30 gL蔗糖，调节pH值为58～60，在121 ℃高压下灭菌25 min。将接种后的植物体置于培养室内，光照16 hd，光照度约为2 000 lx，温度控制在（25±2） ℃。

2结果与分析

21不同消毒时间对撒瓦那柏茎尖污染的影响

不同氯化汞消毒时间对撒瓦那柏茎尖污染率、死亡率有明显影响（表3）。对外植体处理效果最好的是处理4和处理5，成活率达到570%和572%，污染率最高的也是处理1，达 525%，而死亡率最高的是处理6，达412%，毫无疑问死亡率随氯化汞处理时间的延长而升高，污染率反而下降，这表明随着氯化汞处理时间越长，对外植体的伤害也就越大，使植物的细胞失去活力。从表3中各项指标综合起来可以看出，处理4和处理5是最好的处理条件，也就是在75%的乙醇处理30 s后，用01%氯化汞处理7～8 min外植体的成活率最大。

启动培养中污染多为真菌污染和细菌污染。其中细菌污染占25%，其菌落较小，嗅一下有臭味，表面呈乳脂状光泽。真菌污染占172%，其菌落大，颜色多样，多为黄、白、灰、黑等颜色，表面呈毛绒状，嗅之一般有霉味。造成污染的来源有很多，有外植体、培养基pH值、激素浓度、操作人员的不恰当操作、培养瓶、接种工具等多方面因素。endprint