第三、第四代抗-HCV检测试剂对122份可疑标本检测结果分析

朱荣华 朱碧姝 黄苏金

678000保山市中心血站

第三、第四代抗-HCV检测试剂对122份可疑标本检测结果分析

朱荣华 朱碧姝 黄苏金

678000保山市中心血站

目的：探讨第三代、第四代抗-HCV检测试剂对无偿献血者筛检的应用价值。方法：用国产第三代、第四代抗-HCV检测试剂对2011-2013年无偿献血者筛检的抗-HCV初检、复检不合格的122份标本在同等条件下进行检测。结果：第三代与第四代试剂检测可疑结果差异有统计学意义(P＜0.05)。结论：第三代与第四代抗-HCV检测试剂间的灵敏度、特异性存在一定的差异。

双抗原夹心；抗-HCV；试剂

丙肝是一种“沉默”的疾病。据统计，全球约有2亿人感染HCV[1]，在中国HCV感染者大约4 000万人，感染率3.2%[2]。目前，有多种HCV抗体检测试剂可供临床选择，血站都要求用不同厂家的试剂对抗-HCV进行初检和复检，初检和复检均合格，此份标本才算合格。为评估万泰第三代、第四代抗-HCV试剂的检测性能，对122份可疑标本进行同步检测，现将结果报告如下。

资料与方法

材料来源：保山市中心血站2011-2013年对无偿献血者抗-HCV初检(北京万泰)或(和)复检(厦门新创)不合格标本122份，常温下复融待检；阳性对照为康彻思坦厂家生产质控血清；阴性对照为试剂盒阴性对照血清。

试剂：国产第三代丙型肝炎病毒抗体酶联免疫诊断试剂盒；第四代丙型肝炎病毒抗体酶联免疫诊断试剂盒。以上试剂均通过中国药品生物制品批批检验合格，均在有效期内使用，实验操作严格按试剂说明书操作。

结果判定：S/CO≥1判定为阳性，0.5≤S/CO＜1判定为可疑，S/CO＜0.5判定为阴性。

仪器：全自动酶免分析系统一体机(Uranus AE150)。

统计学方法：采用统计软件SPSS 17.0分析，检验水准P＜0.05。

结 果

两试剂检测结果：在检测的122份标本中，国产第三代间接法抗-HCV检测试剂检测阳性28份，可疑15份，阴性79份；国产第四代双抗原夹心法抗-HCV检测试剂检测阳性17份，可疑0份，阴性105份。第三代与第四代试剂检测阳性数经χ2检验(Pearson)，两者之间差异无统计学意义(P＞0.05)；但第三代与第四代试剂检测可疑结果数经χ2检验，两者之间差异有统计学意义(χ2=15.98，P＜0.05)，见表1。

表1 国产第三代、第四代抗-HCV检测结果分析

两试剂精密性比较：通过20孔阳性对照检测，第三代试剂阳性对照S/CO值均值3.026，标准差0.497，变异系数16.24%；第四代试剂阳性对照S/CO值均值24.051，标准差0.874，变异系数3.63%。第四代的试剂S/CO在第三代的基础上放大大约8倍，第三代试剂变异系数是第四代试剂的4.5倍。

讨 论

HCV所致的丙型肝炎是一种危害严重的传染病。由于目前没有HCV疫苗和特效的抗病毒药物，对相关人群进行筛查和早期诊断成为控制丙型肝炎发生和传播的重要手段，第三代抗-HCV抗体的检测主要是用间接ELISA方法检测血清或血浆样品中丙肝病毒(HCV)抗体，在微孔条上预包被基因重组HCV结构和非结构区抗原，可与样品中抗HCV抗体反应，再加入HRP标记的抗人IgG抗体与之结合，然后用TMB底物作用显色。通过酶标仪检测吸光度(OD值)判断样品中HCV抗体的存在与否，主要检测的是血清或血浆中的抗HCV IgG抗体。由于IgG抗体出现时间较晚，感染早期采集的标本容易被漏检；另外，血清中非特异性IgG的吸附以及类风湿因子的干扰，易产生假阳性反应[3]。第四代HCV抗体检测试剂主要是双抗原夹心法，是利用酶标记抗原代替间接法中的酶标记二抗，检测的抗体主要包括IgG、IgM等在内的总抗体[3]。从122份的检测结果看，第三代与第四代试剂检测阳性数经卡方检验(Pearson)，两者之间差异无统计学意义(P＞0.05)，但第三代与第四代试剂检测可疑结果经卡方检验，两者之间的差异存在着统计学意义(χ2=15.98，P＜0.05)。这可能与相关文献所报告[3]的第三代检测试剂易产生假阳性反应有关。第三代抗-HCV间接法试剂盒窗口期长(约70 d)，漏检率高[4]，在无偿献血者血液筛检中可造成血液浪费，增加了献血者及受血者的心理负担，同时也无形中加大了无偿献血者的流失，进一步加重血源紧张。

从两试剂精密性比较看，第三代、第四代试剂阳性对照S/CO值均值分别为3.026和24.051，第四代的试剂S/CO在第三代的基础上放大大约8倍，这主要是因为第四代试剂采用生物素-亲和素级联放大系统提高了灵敏度，同时检测IgM和IgG，缩短了窗口期(约30 d)[4]。第三代试剂变异系数16.24%，第四代试剂变异系数3.63%，第三代试剂变异系数是第四代试剂的4.5倍，说明第四代试剂的加样量由第三代试剂盒的10μL变为第四代的50μL，加样量增大，少了加样误差。

检测结果显示第三代试剂抗-HCV检测淘汰率35.25%，第四代试剂抗-HCV检测淘汰率13.93%，其中第三代、第四代两种试剂均为阳性符合率13.93%，说明两代抗-HCV检测试剂阳性检出率仍有较大差别。122份标本均为初检或(和)复检不合格标本，第三代的检测淘汰率35.25%，由于目前制造丙肝试剂的抗原主要用基因工程表达和多肽合成方法得到，用什么区段的丙肝病毒抗原蛋白，如何选择各种抗原合适的比例，各试剂厂家有所不同，导致试剂间的灵敏度、特异性存在一定的差异[5]。

[1]Bostan N,Mahmood T.An overview about hepatitis C:a devastating virus[J].Crit Rev Microbiol,2010,36(2):91-133.

[2]Lau GKK,Zhuang H.Top hepatology issue in china[J].JGastroentHepatol,2003,17(l):9.

[3]韩振格,孟继鸿.双抗原夹心ELISA法检测抗HCV总抗体[J].临床检验杂志,2008,26(4):246-248.

[4]白广红,张玲玲.第四代抗-HCV试剂盒对无偿献血者筛检价值评价[J].现代检验医学杂志,2012,27(6):116-117.

[5]徐树良,谈维,孙启俊,等.抗-HCV分片段试剂对抗-HCV阳性标本的确认价值探讨[J].中国输血杂志,2004,17(2):94-95.

122 suspicious samples results were analyzed by using third and fourth generation anti-HCV reagents

Zhu Ronghua,Zhu Bishu,Huang Sujin
Central Blood Station of Baoshan City 678000

Objective:To investigate the application value of third generation and fourth generation anti-HCV test reagents in voluntary blood donors screening.Methods:We used the third generation and fourth generation anti-HCV test reagents to test the 122 samples of anti-HCV and 2011-2013 unqualified samples which were screened by the unpaid blood donors for the past two years under the same conditions.Results:The difference between the third and fourth generations of reagents was statistically significant(P＜0.05).Conclusion:There were some differences in sensitivity and specificity between the third generation and the fourth generation of anti-HCV detection agents.

Double antigen sandwich;Anti-HCV;Reagent

10.3969/j.issn.1007-614x.2017.33.69