四黄止痢泡腾颗粒有效成分在鸡体内代谢动力学研究

梁群超，李引乾，宋志元，储 君，孙雪峰，张要齐*

（1.河南惠通天下动物药业有限公司，河南郑州450002；2.河南惠通天下生物工程有限公司，河南新郑451162；3.西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌712100）

四黄止痢泡腾颗粒有效成分在鸡体内代谢动力学研究

梁群超1，李引乾2，宋志元3，储 君3，孙雪峰1，张要齐1*

（1.河南惠通天下动物药业有限公司，河南郑州450002；2.河南惠通天下生物工程有限公司，河南新郑451162；3.西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌712100）

目的为了了解四黄止痢泡腾颗粒相对生物利用度，分别给鸡灌胃四黄止痢泡腾颗粒和普通颗粒，采用HPLC法测定血浆中黄芩苷含量，采用DASS2.1.1软件计算相关药动学参数。结果鸡血浆中黄芩苷浓度出现双峰现象。泡腾颗粒和普通颗粒 C1max分别为：1.03 μg·m l-1和 0.93 μg·ml-1；C2max为 0.95 μg·m l-1和 0.73 μg·m l-1；T1max为 0.47 h 和 0.39 h， T2max为 2.43 h和1.93 h；AUC为11.6μg·h·m l-1和10.63μg·h·m l-1；相对生物利用度为109.13%。 结论：四黄止痢泡腾颗粒相对生物利用度有所提高,值得推广。

四黄止痢泡腾颗粒；黄芩苷；相对生物利用度；药动学

四黄止痢泡腾颗粒以泡腾物料为崩解剂制成的颗粒制剂，有黄连、黄柏、大黄、黄芩、板蓝根和甘草组成。具有清热泻火、止痢功效。有研究报道泡腾颗粒吸收好，生物利用度高[1-4]。具有分散性好，释药速度快，充分保持有效成分的生理活性，促进有效成分的吸收，口感好等特点；黄芩苷在其它动物体内动力学报道较多[5-9]，在鸡体内动力学报道较少[10-12]。该药泡腾颗粒中黄芩苷在鸡体内代谢国内尚未报道，本实验利用高效液相测定法，芦丁为内标物，普通颗粒做参比试剂，测定鸡血浆中泡腾颗粒和普通颗有效成分黄芩苷的含量，计算四黄止痢泡腾颗粒相对生物利用度。为该药的临床应用提供理论依据。

1 材料

1.1 仪器与设备

Agilent1100高效液相色谱仪 （美国惠普公司）；AE240型电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；XK96-B快速混匀器 （新康医疗器械有限公司）；KQ-250E超声清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；TGL-16G台式高速离心机（上海医用分析仪器厂）。

1.2 药品与试剂

黄芩苷对照品（110715-201616）、芦丁对照品（100080-201610）购于中国食品药品检定研究院；肝素钠（郑州中原昕泰生物科技有限公司，批号10067）；四黄止痢泡腾颗粒和普通颗粒（河南惠通天下生物工程有限公司制备）；甲醇为色谱纯；其他均为分析纯；水为双蒸水。

1.3 实验动物

海兰褐雏鸡购于河南雏鹰农牧股份有限公司，1日龄购入，雌雄兼有，笼养，自由饮水、采食，饲料为全价日粮，常规饲养管理。

2 方法

2.1 动物分组

取120日龄海兰褐鸡12只，公母各半，平均体质量（1480±50）g，给药前禁食 12h，随机分成四黄止痢泡腾颗粒组和普通颗粒组，灌服四黄止痢颗粒普通颗粒及泡腾颗粒（30 g/kg·W），

2.2 血样的采集

于给药后0.16h,0.5h,1h,2h,3h,4h,6h,8h,12h,24h,翅静脉取血0.5ml，置含有肝素抗凝的EP管内，离心10min（4000r·min-1）分离血浆，置 -20℃冰箱保存待测。

2.3 分析方法的建立

2.3.1 色谱条件

分析柱：DiamonsilTMC18 （4.6mm×250mm，5 μm）；流动相：甲醇 - 水 - 磷酸（43：57：0.2）；内标物：芦丁（500 μg·ml-1）；检测波长：278 nm；流速：1.0ml·min-1，柱温：35 ℃，进样量：50 μl。

2.3.2 对照品及内标溶液的配制

精密称取黄芩苷对照品2.65mg，用甲醇溶解并定溶10ml量瓶，即得浓度为265μg·ml-1黄芩苷对照品溶液，4℃冰箱保存。精密称取芦丁对照品12.5mg，用双蒸水溶解并定溶25ml量瓶，即得芦丁浓度为0.5mg·ml-1内标溶液，4℃冰箱保存。

2.3.3 血浆样品预处理

取200μl血浆样品，加入0.5mg·ml-1芦丁内标液20μl及高氯酸溶液50μl，涡旋1min；加入甲醇200μl、旋涡振荡10min沉淀蛋白，离心 10min（14000 r·min-1），取上清液，进样分析。

2.3.4 方法专属性

分别取空白血浆、空白血浆加黄芩苷对照、空白血浆加内标物及黄芩苷对照、含药血浆样品，按2.3 项下色谱条件测定。

2.3.5 标准曲线和线性范围

精密量取空白血浆0.2ml，精密加入适量黄芩苷对照品，配制成 0.0375、0.075、0.15、0.3、0.6、1.2μg·ml-1浓度标准血浆。按照样品预处理血浆方法进行操作，依次进样50μl。以黄芩苷浓度为横坐标，黄芩苷峰面积与芦丁峰面积比值为纵坐标，绘制标准曲线。求得直线回归方程

2.3.6 精密度考察

配制 0.05 μg·ml-1，0.10 μg·ml-1，0.53 μg·ml-1浓度的标准血浆样品各5份，按血浆样品处理方法平行操作后进行，得到3个浓度样品的RSD。连续测定5天，得到3个浓度样品RSD。

2.3.7 稳定性考察

配制标准黄芩苷浓度为0.53μg·ml-1的浓度的血浆样品，分别室温放置24 h、冻融3次、按血浆处理后冷冻，按2.3项下方法测定黄芩苷含量。

2.3.8 数据处理

HPLC法测定黄芩苷的血药浓度数据，将平均血药浓度数据输入DAS2.2.1版软件计算相应参数。所得参数用SPSS19.0软件进行统计学处理。

3 结果

3.1 方法专属性

按2.3项下色谱条件测定，结果芦丁在11.03 min出峰，黄芩苷19.69min出峰，于血浆中的内源性物质能完全区分开，专属性好，HPLC图结果见图1。

图1 HPLC法测定鸡血浆中黄芩苷药物浓度的色谱图

3.2 标准曲线和线性范围

绘制标准曲线如图2，求得直线回归方程Y=0.7141x+0.0728，R2=0.9995。 结 果 表 明 在0.0375-1.2μg·m l-1范围内线性关系良好。

图2 黄芩苷与芦丁峰面积比值和黄芩苷浓度标准曲线图

3.3 最低检测限

信噪比S/N为3时的质量浓度为最低检测质量浓度，得黄芩苷的最低检测限为3.495 ng·ml-1。

3.4 精密度考察

配制三个浓度的标准血浆样品日内、日间平均回收率大于89%；RSD均小于5%，结果见表1。

3.5 稳定性考察

分别室温放置24 h、冻融3次、按血浆预处理后冻存，计算回收率结果分别为93.5%（RSD=3.24,n=5）；96.7% （RSD=2.81，n=3）；94.2%（RSD=4.35,n=5），表明黄芩苷在室温、冷冻及反复冻融条件下稳定。

3.6 药-时曲线拟合及药动学参数计算

泡腾颗粒组与普通颗粒组的平均血药浓度-时间曲线见图3。达峰时间（Tmax）和达峰浓度（Cmax）均采用实测值，AUC面积采用梯形法计算，组间药动学参数用SPSS19.0软件进行统计分析，药动学主要参数见表2。

表1 鸡血浆中黄芩苷含量精密度实验结果

表2 灌胃鸡四黄止痢泡腾颗粒和普通颗粒黄芩苷主要药动学参数

图3 灌胃鸡四黄止痢泡腾颗粒和普通颗粒黄芩苷药-时曲线

4 讨论

4.1 四黄止痢泡腾颗粒和普通颗粒药-时曲线出现双峰，有文献报道，大鼠灌服黄芩水煎剂后，黄芩苷等在体内过程有明显的双峰现象，高海[11]报道复方连翘中黄芩苷浓度也有类似的结果，本实验结果与其一致，其原因可能是由于给药存在肝肠循环；也可能是双部位吸收所致[13-16]，存在胃肠循环引起双峰现象，但需要进一步证实。双峰增大了药-时曲线下面积，同时也延长了半衰期，为临床制定合理的给药方案提供科学依据。

4.2 四黄止痢泡腾颗粒组与普通颗粒组比较，T1max、T2max虽然延迟，差异不显著；C2max显著增加，泡腾型颗粒组AUC显著增大；表明四黄止痢泡腾颗粒生物利用度有所提高。

4.3 泡腾颗粒剂是近年来国外开发应用的一种新型制剂工艺，以泡腾物料为崩解剂制成的一种颗粒剂，投入水中会产生大量的气泡（CO2），使颗粒迅速崩解和融化、起效迅速、生物利用度高；经过调味后的泡腾颗粒，口味更佳，适口性好；同时泡腾颗粒，工艺稳定、贮存、运输、携带方便。本实验将普通颗粒做参照，对泡腾型颗粒进行血浆黄芩苷含量测定，计算四黄止痢泡腾颗粒相对生物利用度109.13%。中药组分复杂，化学成分多，加上药材品种、产地、加工等因素的影响，其有效成分一直是中药分析的难点和重点。大多数的中药有效成分和药理作用机制尚未明确，其药效一般是多成分共同作用的结果。针对某种化学结构明确且能用定量分析法测定的以其血药浓度为研究对象。对成分复杂或不明的以生物效应为研究对象[17-19]。本研究采用化学测定法对有效成分黄芩苷作为研究对象，制剂中的其它成分的药动学还需进一步研究。

[1]王长虹,邢建国,程雪梅,等.双扑伪麻泡腾颗粒剂兔体内药物动力学及其相对生物利用度研究[J].新疆医科大学学报,2000,23(3)∶250-252.

[2]张学农,陶亮,王新玲.复方碳酸钙泡腾颗粒剂人体相对生物利用度研究[J].中国现代应用药学杂志,2001,2(18)∶34-37.

[3]欧树凡.氯化钾泡腾颗粒的药代动力学研究[J].中国药房,1994,5(1)∶30-31.

[4]李会林,高素英.盐酸雷尼替丁泡腾颗粒剂的生物等效性研究[J].药物分析杂志,2001,21(6)∶434-436.

[5]邱枫,徐静华,肇丽梅,等.HPLC测定大鼠血浆中黄芩苷的浓度[J].实用药物与临床,2009,12(5)∶334-336.

[6]龚明涛,虞丽芳,陈庆华,等.大鼠灌胃黄芩苷及苷元黄芩素的药动学研究[J].中草药,2009,40(3)∶392-394.

[7]袁立,刘韶,袁铁流,等.黄连解毒汤传统饮片汤剂与配方颗粒汤剂中黄芩苷的药动学的比较[J].中国药师,2016,19(4)∶689-691.

[8]刘钢,张平,夏泉,等.茵栀黄分散片在健康Beagle犬体内的药动学研究[J].时珍国医国药,2011,22(8)∶1902-1903.

[9]李朝霞,倪健,尹兴斌,等.黄芩苷对连翘苷在家兔体内药动学的影响[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(4)∶196-198.

[10]高海,刘开永,李秀岚.复方黄芩有效成分在鸡体内血液浓度的测定[J].山西农业大学学报,2009,29(3)∶223-227.

[11]高海,曾振灵,刘开永,等.复方连翘有效成分在鸡体内的药代动力学研究[J].畜牧兽医学报,2008,39(8)∶1116-1121.

[12]孙博.口服慢呼康口服液黄芩苷和绿原酸在鸡体内药动学研究[D].哈尔滨∶东北农业大学,2013.

[13]邓远雄,俞森,陈天焱,等.黄芩提取物中有效成分黄芩苷和汉黄芩苷在糖尿病大鼠中的药动学研究[J].中国新药杂志,2007,16(19)∶1573-1577.

[14]LiZ,Ge L,QiC,etal.Roleof Intestinal First-Pass Metabolism ofBaicalein in its Absorption Process[J].PharmaceuticalResearch,2005,22(7)∶1050-1058.

[15]ZengMF,Pan LM,Zhu HX,etal.Comparative pharmacokineticsofbaicalin in plasma afteroral administration ofHuang-Lian-Jie-Du-Tangor pure baicalin in MCAO and sham-operated rats[J].Fitoterapia,2010,81(6)∶490-496.

[16]Tian S,He GR,Song JK.Phrmacokinetic study of baicalein afteroraladministration inmonkeys[J].Fitoterapia,2012,83(3)∶532-540.

[17]张永祥中药药理学新论[M].北京∶人民卫生出版社,2004.

[18]万海同,郭莹.中药药物代谢动力学[M].北京∶化学工业出版社,2009.

[19]黄志坚,杨丽英,陈强,等.复方茵芩制剂中黄芩苷的药代动力学研究[J].福建农林大学学报（自然科学版）,2007,36(5)∶506-509.

S853.74

B

1003-8655（2017）05-0012-03

梁群超（1979--），兽医师，从事兽药研究与开发

＊通讯作者：张要齐，硕士，研究方向为农业推广，E-mail∶httx0371@126.com