结肠癌组织中MCP-1与VEGF-C的表达及意义①

结肠癌组织中MCP-1与VEGF-C的表达及意义①

目的：探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)与血管内皮生长因子-C(VEGF-C)对结肠癌发生及发展的影响及临床意义。方法：通过免疫组化方法测定60例结肠癌病理标本中两种因子的表达。结果：MCP-1在癌旁正常组织组阳性表达率为21.7%，比结肠癌组显著降低(P<0.05)。VEGF-C在癌旁正常组织组阳性表达率为23.3%，比结肠癌组显著降低(P<0.05)。二者同时与结肠癌的TNM分期联系密切，与分化程度无关联。结论： MCP-1、VEGF-C在结肠癌的病情发展中起着显著作用，是促使癌肿浸润及转移的重要因素，对于结肠癌的诊疗有明显指导意义。

结肠癌;VEGF-C;MCP-1;病理分期;临床分析

MCP-1作为趋化因子众多亚家族中的成员之一，是起着关键作用的趋化因子，其表达程度与很多癌肿的演变、种植、扩散及炎性细胞浸润紧密相关。VEGF-C是一种血管通透性因子，可以强烈提高血管内皮细胞的再生，增加微血管壁的通透能力，并能刺激淋巴管内皮细胞增生。已有研究[1]发现血清VEGF-C水平增加可直接导致食管鳞癌的预后不良。研究表明肿瘤组织过度表达 MCP-1 引起的单核细胞浸润促进血管内皮生长因子的表达并促进肿瘤组织淋巴管上皮的增生、迁移和新的淋巴管形成, 促使肿瘤发生转移[2,3]。本题主要探索MCP-1、VEGF-C在结肠癌发病及进展过程中的作用及临床意义。

1 材料和方法

1.1 实验标本

选取佳木斯大学附属第一医院2015-03～2016-03行结肠癌切除手术后经病理学确诊为结肠癌的实验标本60例，年龄25～75岁，平均53.61岁。根据美国抗癌联合委员会(AJCC)/国际抗癌联盟(UICC)结直肠癌TNM分期系统(第七版)，其中Ⅰ～Ⅱ期24例，Ⅲ～Ⅳ 期36例。高分化腺癌38例，中低分化腺癌22例。选取60例距癌肿远端切缘>5cm并经病理学确定为断端无癌肿的结肠组织，即癌旁正常组织，作为对照组。

1.2 试剂

MCP-1、VEGF-C抗体为兔多克隆抗体，工作浓度为1:100，购自Abcam公司；SP免疫组化试剂盒(兔)及DAB显色试剂盒均选自上海研卉生物科技有限公司。

1.3 免疫组化方法

整个染色方法参照 SP 试剂盒产品说明书进行,抗体均以0.1M的磷酸盐缓冲液(Phosphate-Buffor silutlon,PBS,pH 7.4)稀释 , 浓度为1：100 , 以PBS替代一抗作阴性对照。0.01M枸橼酸盐缓冲液中微波处理进行抗原修复 ,DAB 显色, 苏木素复染, 中性树胶封片 , 显微镜观察。

1.4 结果判断及统计学方法

两种因子表达均出现于细胞浆中，棕黄色颗粒为阳性，采取半定量积分方法。用高倍镜查看所有切片，一张切片任意选取5个视野，按照胞浆染色程度划分为四个等级：阴性细胞(-)无显色(0)；弱阳性细胞(+)显色为浅黄色(1)；中度阳性细胞()显色为棕黄色(2)；强阳性细胞()显色为深棕黄色(3)。按照IS(intensity score)=Σ{(0×F0)+(1 ×F1)+(2×F2)+(3×F3)}，F=%×5 视野。计算所有切片的染色程度。使用 SPSS17.0 统计软件包,通过卡方检验(χ2)法检验，确定P<0.05为差异存在统计学意义，二者相关性用SPSS17.0等级相关分析。

2 结果

2.1结肠癌组MCP-1、VEGF-C与对照组的水平对比

结肠癌组MCP-1的阳性率为50%，比对照组显著升高，方差分析提示有统计学意义。结肠癌组VEGF-C的阳性率为48.3%，对比对照组显著升高，方差分析提示有统计学意义。

表1结肠癌组MCP-1、VEGF-C与对照组的水平对比(n=60)

MCP-1阳性(%)χ2值PVEGF-C阳性(%)χ2值P癌旁正常组织组13(21.7)10.4740.00114(23.3)8.1550.004结肠癌组30(50)29(48.3)

2.2 MCP-1及VEGF-C与结肠癌临床病理参数的关系

MCP-1、VEGF-C的表达与癌肿的TNM分期关系密切，与分化差异无关联。TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期组中MCP-1阳性率(33.3%)显著低于Ⅲ～Ⅳ期组(61.1%)，差异均有统计学意义(P<0.05)。TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期组中VEGF-C阳性率(29.2%)显著低于Ⅲ～Ⅳ期组(61.1%)，差异均有统计学意义(P<0.05)。高分化组中MCP-1阳性率(55.3%)与中-低分化组阳性率(40.9%)之间无明显差异，无统计学意义(P>0.05)。高分化组中VEGF-C阳性率(42.9%)与中-低分化组阳性率(61.1%)之间无明显差异，无统计学意义(P>0.05)。

表2 MCP-1及VEGF-C与结肠癌临床病理参数的关系

临床病理类型nMCP-1阳性(%)χ2值P值VEGF-C阳性(%)χ2值P值临床分期 Ⅰ～Ⅱ期248(33.3)4.4440.0357(29.2)5.8840.015 Ⅲ～Ⅳ期3621(61.1)22(61.1)分化程度 高分化3821(55.3)1.1480.28418(42.9)1.6810.195 中-低分化229(40.9)11(61.1)

2.3 MCP-1与VEGF-C在结肠癌表达中的相关性分析

本研究显示，在50例结肠癌组织中MCP-1和VEGF-C同时阳性表达20例；MCP-1(+)而VEGF-C(-)8例；MCP-1(-)而VEGF-C(+)5例；两者同时阴性表达17例。经SPSS17.0等级相关性分析显示，MCP-1与VEGF-C表达呈正相关(r=0.5，P=0.001)。

表5 MCP-1、VEGF-C在结肠癌中的相关性分析

注：r=0.5，P=0.001

3 讨论

结肠癌(colon cancer)是全球范围内发病率较高的恶性疾病之一，以41～65岁发病率高。从病因学角度分析多半以上来自腺瘤病变，从形态学角度分析可分为增生、腺瘤及癌变各阶段。尽管结肠癌根治性手术及术后的综合治疗已经逐渐成熟，但结肠癌术后生存期仍不乐观，控制均布扩散及远处移行是改善结肠癌预后的重要因素。 已有的相关实验研究[4，5]表明，结肠癌肿瘤细胞生长以及癌细胞的转移，与趋化因子的调控有密切关系。趋化因子是一种可以趋动细胞定向挪动的小分子分泌蛋白，通过增加癌细胞数量及远处扩散, 提高各种活化因子的分泌和血管形成，从而促使了肿瘤的进展。MCP-l作为趋化因子众多亚家族成员之一，可被多种恶性肿瘤所合成和分泌，拥有极为重要的生物学功能，主要通过驱动位于血管的单核细胞转变为位于肿瘤的巨噬细胞来发挥主要作用，参与肿瘤组织炎症细胞的浸润，直接调控肿瘤细胞生存的内环境。张哲[6]等研究指出MCP-1通过促使单核细胞转变为巨噬细胞(TAM),分泌VEGF-C等血管生成因子。VEGF-C在肿瘤发生发展中的作用主要有两个方面，一是：VEGF-C与其特异性受体VEGFR-2结合促进肿瘤血管的发生；二是：VEGF-C通过与VEGFR-3的结合可促进淋巴管的生成[7,8]。本实验研究显示：MCP-1与VEGF-C的阳性率在实验组明显高于对照组，说明MCP-1和VEGF-C在结肠癌的发病进程中有着明显的意义。深入探索MCP-1、VEGF-C与结肠癌TNM分期、分化差异的关联中得知，二者共同影响着结肠癌的病理进展过程，两种因子的表达升高提示结肠癌TNM分期不良，说明MCP-1与VEGF-C是影响结肠癌出现局部扩散及远处移行的重要条件，对于结肠癌的整个演变过程起显著作用。已有研究[9～11]结果证实MCP-1与VEGF-C协同促进胃癌、膀胱癌、卵巢癌的浸润与转移。本次实验在对于二者共同作用于结肠癌的相关性分析结果得到相同论证，更好的证明了两种因子在肿瘤演变过程中的协同关系，为深入了解他们的相互作用机理提供理论依据。

综上所述，该实验通过临床分析与SP免疫组化测定，初步阐明了VEGF-C与MCP-1在结肠癌病理组织中的一般水平，充分证实VEGF-C、MCP-1的表达与结肠癌的TNM分期之间有着密切联系，提示MCP-1与VEGF-C的水平可为结肠癌的诊疗及预后提供参考意义。

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王长龙(1990～)男，黑龙江绥化人，在读硕士研究生。

刘振平(1962～)男，黑龙江佳木斯人，主任医师，硕士研究生导师。E-mail：liuzhenping1962@163.com。

王长龙,孙盛洋,刘振平

(佳木斯大学附属第一医院普外三科，黑龙江 佳木斯 154003)

R446.8

B

1008-0104(2017)05-0034-02

2016-09-12)