糖尿病性心肌病患者血清sFas与外周血淋巴细胞凋亡

卢寅辉 陈早芳 唐琼珍 雷 波

作者单位：江西省人民医院 老年医学科 330006

糖尿病性心肌病患者血清sFas与外周血淋巴细胞凋亡

卢寅辉※陈早芳 唐琼珍 雷 波

作者单位：江西省人民医院 老年医学科 330006

目的探讨细胞凋亡在糖尿病性心肌病发病过程中是否发挥作用。方法选取30例糖尿病性心肌病患者和30例体检健康的正常对照组。采用流式细胞仪测定PBMC凋亡。采用ELISA法测定血清sFas水平。结果糖尿病性心肌病组患者PBMC凋亡百分率为(31.8±6.1)%较正常对照组的(21.2±4.1)%明显增高(P<0.05)，血清sFas水平(6.6±1.1μg/ml)较正常对照组(3.4±0.6μg/ml)明显升高(P<0.05)。糖尿病性心肌病患者PBMC凋亡百分率与血清sFas均随心衰程度的加重而升高,两者呈正相关(r=0.64)。结论心肌细胞凋亡在糖尿病性心肌病的发生、发展中发挥着作用。血清sFas有助于判断糖尿病性心肌病心衰程度。

糖尿病性心肌病 细胞凋亡 血清sFas

糖尿病性心肌病是糖尿病患者较常见的慢性并发症之一，其主要临床表现为心肌收缩和舒张功能障碍。糖尿病性心肌病确切的发病机制尚不明了，可能涉及能量代谢紊乱、肌球蛋白同工酶变化、心肌电生理改变等多个方面[1]。而心肌细胞凋亡在糖尿病性心肌病的发生、发展中是否发挥作用，尚未见详细报道。Fas是调控凋亡信号途径的重要基因，与心衰的严重程度相关。本研究拟通过对糖尿病性心肌病患者外周血淋巴细胞凋亡的观察及血浆可溶性sFas的检测，探讨细胞凋亡在糖尿病性心肌病发病过程中是否发挥作用。

1.资料与方法

1.1 一般资料 选择我院老年科病房2015年1月1日至2016年12月31日的住院的糖尿性心肌病患者30例和体检健康的正常对照组30例。其中，糖尿病性心肌病组男性23例，女性7例，年龄60～75岁，平均年龄68.1±6.3岁；健康的正常对照组男性21例，女性9例，年龄61～75岁，平均年龄66.1±7.8岁。两组在年龄、性别等基线资料分布上差异无统计学意义，具有可比性。

1.2 诊断标准 ①根据《中国2型糖尿病防治指南(2013年版)》的诊断标准确诊为2型糖尿病；②临床症状有糖尿病伴胸闷、心悸、气短、呼吸困难，心功能NYHA分级2级及以上；③超声心动图证实存在左心室扩大、室壁运动减弱，LVEF≤50%；④冠状动脉CTA显示冠状动脉狭窄≤50%。⑤除外原发性心肌病和糖尿病以外原因引起的继发性心肌病。

1.3 排除标准 冠状动脉粥样硬化性心脏病、肺源性心脏病、严重肝肾功能不全、感染性疾病、风湿免疫性疾病、肿瘤性疾病等。

1.4 观察指标与方法

1.4.1 采用己糖激酶法测定静脉血空腹血糖、餐后2小时血糖。

1.4.2 心脏彩超测定：主要指标有左心室内径(LVD)、左室射血分数(LVEF)等。检查时受试者取左侧卧位或平卧位，常规标准切面，记录各瓣口的血流频谱，录像测量各指标。利用简化Simpson法计算EF，根据二尖瓣舒张血流频谱测量舒张功能指标。

1.4.3 细胞分离与培养：常规分离外周静脉血的单个核细胞(PBMC)，用含10%小牛血清的RPMI-1640培养液调整PBMC浓度至1×106/ml，置24孔培养板，加anti-CD3单抗刺激T淋巴细胞，于37℃，5%CO2孵箱分别培养24h。

1.4.4 流式细胞仪(FCM)测定PBMC凋亡[2]：采用碘化丙啶(PI)染色法。

1.4.5 血清sFas水平的测定：采用ELISA法。抗人Fas单抗由德国宝灵曼公司生产。

1.5 统计学方法 采用SPSS 11.0统计软件包进行统计学分析，计量资料用均数±标准差表示，采用t检验及相关分析。

2.结果

结果如表1所示，PI染色后，经FCM检测，糖尿病性心肌病患者PBMC凋亡百分率为(31.8±6.1)%较正常对照(21.2±4.1)%明显增高，两组比较差异有显著意义(P<0.05)。糖尿病性心肌病患者血清sFas水平(6.6±1.1μg/ml)较正常对照组(3.4±0.6μg/ml)明显升高，两组比较差异有显著性意义(P<0.05)。

PBMC凋亡百分率与血清sFas的关系：糖尿病性心肌病患者PBMC凋亡百分率与血清sFas均随心衰程度的加重而升高，两者呈正相关(r=0.64)。

表1 PBMC凋亡百分率及血清sFas水平比较

注：*表示和健康对照组比较，P<0.05。

3.讨论

糖尿病性心肌病是糖尿病常见的慢性并发症之一，也是导致糖尿病患者死亡的主要原因之一[3]。糖尿病性心肌病其病变是原发性的，主要表现为心肌收缩和舒张功能障碍，容易发生充血性心力衰竭。细胞凋亡是受基因控制的细胞主动死亡过程。众多的实验证明细胞凋亡可能在心力衰竭的发病中起着重要的作用[2，4]。糖尿病性心肌病确切的发病机制尚未阐明，细胞凋亡机制是否参与糖尿病性心肌病的进展呢?本实验通过流式细胞仪检测发现糖尿病性心肌病PBMC凋亡较正常对照组增多，且可能与心衰程度相关。间接证实细胞凋亡机制参与糖尿病性心肌病的病理生理过程。Anti-CD3单抗主要刺激T淋巴细胞，心衰程度越重其凋亡百分率升高越明显，推测糖尿病性心肌病时PBMC凋亡百分率的增多可能系机体的一种保护性机制。

Fas/APC11抗原系统是机体维持自身稳定的一条重要调控途径。而Fas是调控凋亡信号途径的重要基因。Nishigaki等[5]初次发现严重心力衰竭时sFas水平增高，但sFas L却无明显增加。Yamaguchi等[6]却发现sFas L也随心衰的严重程度而增高。本研究结果也显示糖尿病性心肌病血清sFas水平升高,提示Fas系统的改变可能是糖尿病性心肌病的一个较敏感的指标。

综上所述，心肌细胞凋亡在糖尿病性心肌病的发生、发展中发挥着作用，可能与糖尿病性心肌病心衰程度相关，运用ELISA法测定血清sFas有助于判断糖尿病性心肌病心衰程度。

1 KAJSTURA J，FIORDALISO F，ANDREOLI AM，et al.IGF-1 overexpression inhibits the development of diabetic cardiomyopathy and angiotensin II-mediated oxidative stress[J].Diabetes，2001，50(6):1414-1424.DOI：10.2337/diabetes.50.6.1414.

2 HAUNSTETTER A，IZUMO S.Apoptosis:basic mechanisms and implications for cardiovascular disease[J].Circ Res，1998，82(11):1111-1129.DOI：10.1161/01.res.82.11.1111.

3 LAAKSO M.Hyperglycemia and cardiovascular disease in type 2 diabetes[J].Diabetes，1999，48(5):937-942.DOI：10.2337/diabetes.48.5.937.

4 王希良，朱锡.FasL与TNF引起凋亡的研究进展[J].国外医学(免疫学分册)，1999(5):241-245.

5 NISHIGAKI K，MINATOGUCHI S，SEISHIMA M，et al.Plasma Fas ligand，an inducer of apoptosis，and plasma soluble Fas，an inhibitor of apoptosis，in patients with chronic congestive heart failure[J].J Am Coll Cardiol，1997，29(6):1214-1220.

6 YAMAGUCHI S，YAMAOKA M，OKUYAMA M，et al.Elevated circulating levels and cardiac secretion of soluble Fas ligand in patients with congestive heart failure[J].Am J Cardiol，1999，83(10):1500-1503.DOI：10.1016/s0002-9149(99)00133-2.

江西省卫计委普通课题(课题编号：20143004)

※为通讯作者

10.3969/j.issn.1672-4860.2017.05.007

2017-7-30