半枝莲乙醇提取物对顺铂抗肝癌的增效作用研究

孙叙秋 鲁朔焱 张羽丰

（贵州省松桃县人民医院消化内科 松桃554100）

半枝莲乙醇提取物对顺铂抗肝癌的增效作用研究

孙叙秋 鲁朔焱 张羽丰

（贵州省松桃县人民医院消化内科 松桃554100）

目的：探讨半枝莲乙醇提取物对顺铂抗肝癌的增效作用。方法：采用MTS/PMS法检测半枝莲乙醇提取物与顺铂单独及联合用药时对肝癌细胞增殖的影响，金正均法计算Q值判断两药相互作用关系。结果：半枝莲乙醇提取物与顺铂单独用药时可呈时间和浓度依赖性地抑制肝癌细胞增殖率；半枝莲乙醇提取物与低剂量顺铂联合应用后对两种肝癌细胞的抑制作用大于单独用药（P＜0.05），且可产生协同抗癌作用（Q＞1.15）。结论：半枝莲乙醇提取物与低剂量的顺铂联合应用时可显著增强顺铂对肝癌细胞增殖的抑制作用，产生协同抗肝癌作用。

肝癌；半枝莲乙醇提取物；顺铂

肝癌是临床常见、多发恶性肿瘤，发病初期隐匿性较强，且病程进展快，病死率极高，严重威胁人类生命健康。目前临床治疗主要根据肝癌的不同阶段进行个体化综合，主要包括手术、放化疗等[1]。顺铂是临床应用较广泛的抗肿瘤药物，但由于其毒性，临床治疗效果并不十分理想。随着现代中医学对肿瘤研究的深入，中药联合化疗药物抗肿瘤的优势日益凸显，不仅能够提高化疗药物的疗效，还可通过降低化疗药物的剂量减轻不良反应。半枝莲是临床常用的抗肿瘤组方药物，具有清热解毒、散瘀止血、利尿消肿的作用[2]。本研究探讨半枝莲乙醇提取物对顺铂抗肝癌的增效作用。现报告如下：

1 方法

1.1 试验方法 （1）HepG2和Bel7402细胞由中国医学科学院国家药物筛选中心购买。HepG2细胞采用含10%灭活小牛血清DMEM完全培养基，于37℃、5%CO2培养箱中传代培养。Bel7402细胞采用含10%灭活小牛血清的RPMI1640完全培养基，于37℃、5%CO2培养箱中传代培养，收集对数生长期细胞待用。（2）采用MTS/PMS法检测单独及联用药对细胞增殖的影响，将对数生长期的HepG2和Bel7402细胞接种于96孔培养板，每孔浓度100 μL，约含3 000个细胞，分别加入阴性对照（正常细胞）、不同浓度的顺铂（10、5、2.5、1.25、0.5 μg/ml），半枝莲乙醇提取物（100、75、50、25、5 μg/ml） 单药作用 24 h、48 h 及联合（0.5 μg/ml顺铂 +100、50、25 μg/ml的半枝莲乙醇提取物）作用48 h。培养结束后，按20∶1比例将MTS和PMS混合加入至稀释培养基。继续培养3 h后用酶联免疫检测仪检测各孔吸光度（OD）值，波长490 nm，抑制率 =（1－OD实验组/OD对照组）[3～4]。（3）采用金正均法计算可知两种药物相互作用时Q值，Q＞1.15为协同作用。

1.2 统计学方法 数据处理采用SPSS 14.0统计学软件，计量资料以（±s）表示，采用t检验，计数资料用%表示，采用χ2检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 半枝莲乙醇提取物与顺铂单独用药对肝癌细胞的影响 半枝莲乙醇提取物在0～100 μg/ml浓度范围内呈浓度和时间依赖性地抑制HepG2、Bel7402细胞增殖；顺铂在0～10 μg/ml定的浓度范围内亦呈浓度范围内浓度和时间依赖性地抑制HepG2、Bel7402细胞增殖。见表1。

表1 半枝莲乙醇提取物与顺铂单独用药对肝癌细胞的影响（±s）

表1 半枝莲乙醇提取物与顺铂单独用药对肝癌细胞的影响（±s）

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2.2 半枝莲乙醇提取物与低剂量顺铂联用对肝癌细胞增殖的影响 100、50、25 μg/ml浓度的半枝莲乙醇提取物与低剂量顺铂联合应用后对两种肝癌细胞的抑制作用大于单独用药，P＜0.05，差异具有统计学意义。见表2。

表2 半枝莲乙醇提取物与低剂量顺铂联用对肝癌细胞增殖的影响（%）

2.3 不同浓度半枝莲乙醇提取物与低剂量顺铂相互作用分析 HepG2细胞在50 μg/ml半枝莲乙醇提取物与低剂量顺铂（0.5 μg/ml）联用时可产生协同抗肿瘤效果 （Q＞1.15）；Bel7402 细胞在 50、100 μg/ml半枝莲乙醇提取物与低剂量顺铂（0.5 μg/ml）联用时可产生协同抗肿瘤作用（Q＞1.15）。见表3。

表3 不同浓度半枝莲乙醇提取物与低剂量顺铂相互作用分析（±s）

表3 不同浓度半枝莲乙醇提取物与低剂量顺铂相互作用分析（±s）

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3 讨论

化学治疗是目前肿瘤综合治疗的重要手段，但化疗引起的不良反应会对患者身心健康带来严重影响，从而抵触化疗，甚至放弃生命。因此，选择合适的化疗药物，制定完善的治疗方案，最大程度减轻化疗过程中的不良反应是肿瘤患者治疗的关键。顺铂属于细胞周期的非特异性药物，具有细胞毒性，可抑制癌细胞DNA复制，损伤其细胞膜结构，具有较强的广谱抗癌作用，是目前临床常用的抗肿瘤药之一[5]。随着但该药具有细胞毒性，副作用较多。研究发现[6]，顺铂与中药联合应用可缓解其副作用，效果显著。因此，以中药类联合铂类为主化疗成为现阶段抗癌的主要手段。

本研究结果显示，半枝莲乙醇提取物与顺铂单独用药时均可呈时间和浓度依赖性地抑制肝癌细胞增殖率；半枝莲乙醇提取物与低剂量顺铂联合应用后对两种肝癌细胞的抑制作用大于单独用药（P＜0.05），且可产生协同抗癌作用（Q＞1.15）。说明半枝莲乙醇提取物与低剂量的顺铂联合应用时可显著增强顺铂对肝癌细胞增殖的抑制作用，产生协同抗肝癌作用，具有较高的临床应用价值。

[1]张燕,王琪鸿,牛素生,等.片仔癀与阿霉素联用对骨肉瘤耐药细胞增殖和凋亡的影响[J].中华中医药杂志,2015,32(3):705-708

[2]谭建福,赵云,周军.半枝莲在治疗肿瘤中的临床应用及研究进展[J].医学综述,2013,19(24):4442-4444

[3]林敬明,刘煜,罗荣城.半枝莲提取物抗人肝癌Hep-G2细胞增殖及其机制研究[J].南方医科大学学报,2006,26(7):975-977

[4]牟卫伟,许焕丽.半枝莲乙醇提取物对顺铂抗肝癌的增效作用研究[J].中华中医药杂志,2017,32(1):306-309

[5]刘一,杨玉飞,白玉,等.铂类抗癌药物及其作用机理的分析技术进展[J].化学通报,2013,76(10):867-869

[6]代志军,王西京,纪宗正,等.半枝莲提取物对H22肝癌荷瘤小鼠化疗的增效减毒作用[J].中西医结合学报,2008,6(7):720-724

R735.7

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10.13638/j.issn.1671-4040.2017.10.102

2017-09-11）