顶空固相微萃取结合气质联用分析树舌灵芝的化学成分

2017-11-14李田田花朋朋黄梓芮潘雨阳贾瑞博陈弘培

农产品加工 2017年19期

关键词：灵芝质谱实体

李田田，花朋朋，黄梓芮，潘雨阳，贾瑞博，陈弘培，刘斌，2

（1. 福建农林大学食品科学学院，海洋研究中心，福建福州 350002；2. 国家菌草工程技术研究中心，福建福州 350002）

顶空固相微萃取结合气质联用分析树舌灵芝的化学成分

李田田1，花朋朋1，黄梓芮1，潘雨阳1，贾瑞博1，陈弘培1，*刘斌1，2

（1. 福建农林大学食品科学学院，海洋研究中心，福建福州 350002；2. 国家菌草工程技术研究中心，福建福州 350002）

采用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用技术对树舌灵芝子实体进行化学成分的分析鉴定，经质谱计算机系统检索及核对Nist2008标准质谱图，用峰面积归一化法测定了各成分的相对百分含量，并对其主要成分进行分类和分析。结果表明，共鉴定出相对含量≥0.06的化学成分60种，占总量的93.4%，包括醇类12种（占76.834%）、醛酮类8种（占7.849%）、烃类及其衍生物18种（占4.775%）、酸类12种（占2.658%）、脂类6种（占1.154%）、其他类化合物2种（0.128%）。

树舌灵芝；子实体；顶空固相微萃取-气质联用；化学成分分析

（1. Marine Research Center， College of Food Science， Fujian Agriculture and Forestry University， Fuzhou， Fujian 350002，China； 2. National Engineering Technology Research Center of JUNCAO，Fuzhou， Fujian 350002， China）

树舌灵芝（Ganoderma applanatumn）别名树舌、树舌扁灵芝、扁目灵芝，属真菌门、担子菌亚门、层菌纲、多孔菌科、灵芝属[1]。树舌灵芝在我国分布十分广泛，主要在东北、西北、华东、华南、西南各个省区[2]。研究表明，树舌灵芝具有抗癌、抗肿瘤、抗氧化、防衰老、调节免疫力、消炎抗菌、降血糖和保肝等生物活性[3-4]。但目前研究主要围绕树舌灵芝的部分活性物质[5-7]，而关于树舌灵芝子实体化学成分分析的研究报道较少。试验以树舌灵芝子实体为研究对象，采用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用技术对树舌灵芝的化学成分进行研究，旨在为树舌灵芝在保健食品及生物医药等领域的进一步开发利用提供基础数据。固相微萃取技术与蒸馏萃取法[8]、超临界流体萃取[9]等传统的风味抽提技术[10]相比，操作简便、敏捷，能减少试剂消耗，可直接联用气质色谱，极大地提高萃取效率[11]。固相微萃取包括直接固相微萃取（DI-SPME）和顶空固相微萃取（HS-SPME），而应用最广的当属HS-SPME。HSSPME技术是将萃取头置供试品上方的蒸气相中萃取、吸附组分，较DI-SPME的优势在于[12]以下3点：①能消除静态水层对萃取的影响而使被测物的分散能力大大提高；②避免将水蒸气带入色谱柱，延长其使用寿命；③能使SPME技术应用到组成较为复杂的样本中去，更适于分析气态、液态和固态样品中的挥发性成分。

1 材料与方法

树舌灵芝子实体，华益灵芝生物科技开发有限公司提供，经福建农林大学国家菌草工程技术研究中心鉴定为树舌灵芝，在40 ℃条件下烘干，粉碎后得到树舌灵芝细粉，备用；酒石酸、无水乙醇为国药分析纯化学试剂；2 -辛醇（内标）、丁酸乙酯、乙酸异戊酯、异戊醇、辛酸乙酯、癸酸乙酯和乙酸苯乙酯7种标准物质为色谱纯化学标样，美国Sigma公司提供。

固相微萃取装置、50/30 μm DVB/CAR/PDMS（二乙烯基苯/碳分子筛/聚二甲基硅氧烷）萃取头、20 mL顶空钳口样品瓶，美国SUPELCO公司产品；电热磁力搅拌器，日本岛津公司产品；7890A/5975MSD型气质联用仪、DB-5MS型弹性石英毛细管管柱（30 m×0.25 mm，膜厚度0.25 μm），美国Agilent公司产品；EO2140型电子分析天平，赛多利斯科学仪器北京有限公司产品；电热恒温鼓风干燥箱，苏州德瑞普烘箱制造有限公司产品；台式高速冷冻离心机，凯特试验仪器有限公司产品；KQ-500VDE型超声波清洗仪，昆山舒美超声仪器有限公司产品；TYPEFDU-1000型冷冻干燥机，上海亿培实业有限公司产品。

1.2.1 树舌灵芝子实体的提取

取树舌灵芝子实体磨粉，称30 g加入到20倍体积的生理盐水溶液中，超声（时间30 min，温度60 ℃，功率300 W）提取，经离心、抽滤、浓缩和冻干制备，待用[13]。

1.2.2 顶空固相微萃取方法

取样前先将固相微萃取头在气相色谱进样口老化1 h，老化温度250 ℃。取1.5 g用无菌水定容至6 mL，迅速将其装入20 mL的钳口样品瓶中，2.0 g NaCl，5 μL内标溶液（2 -辛醇浓度为1 mg/L）上部留有约2.5 cm 左右的空间，用封盖器封好。于40 ℃磁力搅拌器上加热平衡15 min后，将老化好的萃取头插入样品瓶顶空部分，于40 ℃条件下萃取40 min[14-17]。

1.2.3 GC-MS分析

将萃取头抽出插入气相色谱仪进样口，于240 ℃解析2 min，进行GC-MS检测分析。气相色谱-质谱条件：采用载气为高纯氦气，流速为1 mL/min；程序升温：起始温度为40 ℃，以每分钟5 ℃升温到150 ℃，保持3 min，再以每分钟5 ℃升温到250 ℃，进样口温度250 ℃。质谱条件：EI离子源，电子能量70 eV，质量范围35～350 amu。由GC-MS得到的谱图，经计算机在NIST 2005标准谱库的检索，并结合人工图谱解析及保留指数资料的查询，对树舌灵芝的主要化学成分进行鉴定，同时采用内标法进行定量，得到各组分的质量浓度。

2 结果与分析

按照上述条件对树舌灵芝提取样品进行分析，获得其树舌灵芝子实体提取物总离子图。总离子流图中每一个峰表示样品的一个组分，由每个峰可以得到相应化合物的质谱图，对图1中各峰经质谱计算机系统检索及核对Nist 2008标准质谱图，结合保留时间和MS分别对各峰加以确认，鉴定出其中的60种化合物，用峰面积归一化法测定了各化学成分相对的百分含量（组分峰面积占总峰面积的百分比），鉴定的化合物占总成分的93.4%。

树舌灵芝子实体样品总离子流色谱见图1，树舌灵芝子实体的化学成分见表1。

图1 树舌灵芝子实体样品总离子流色谱

由表1和表2可知，该样品化合物类型涉及醇类、醛酮类、烃类及其衍生物、酸类、脂类和其他类等多种化合物。其中，醇类化合物有12种（占76.834%），醛酮类、烃类及其衍生物、酸类、脂类和其他类化合物分别有8种（占7.849%）、18种（占4.775%）、 12种（占2.658%）、 6种（占1.154%）、 2种（0.128%）。

树舌灵芝子实体的主要成分分析见表2。

3 结论

采用峰面积归一化法测定了各化学成分相对的百分含量（组分峰面积占总峰面积的百分比）后，在树舌灵芝子实体中鉴定出主要的60种化合物，总量占树舌灵芝子实体总化学成分的93.4%。经分类得，该60种化合物类型涉及醇类、醛酮类、烃类及其衍生物、酸类、脂类和其他类等多种化合物，其含量占总量的比例分别为76.834%，7.849%，4.775%，2.658%，1.154%，0.128%，说明树舌灵芝是极具开发潜力的宝贵资源，为进一步研究树舌灵芝提供了根据。

表1 树舌灵芝子实体的化学成分

表2 树舌灵芝子实体的主要成分分析

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