高效液相色谱—紫外检测法测定糕点中纳他霉素的含量

朱聿元　李红梅　周露

摘要：建立了高效液相色谱-紫外检测法测定糕点中纳他霉素含量的实验方法。色谱柱采用Waters C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇+乙酸水溶液（10%） =60∶40为流动相，采用紫外检测器测定了糕点中纳他霉素的含量。纳他霉素的线性范围分别为5～100 μg/mL，检出限为0.5 μg/mL，加标回收率为97.2%～100.3%，相对标准偏差0.98%。结果表明：该方法简单、快速、准确、重现性好，适用于糕点中纳他霉素的定量分析。

关键词：纳他霉素；糕点；高效液相色谱；紫外检测器

中图分类号：TS207.4

文献标识码：A文章编号：16749944（2017）20019602

1引言

纳他霉素[1，2]分子式为C33H47NO13，分子量为665.73。微溶于水、甲醇，溶于稀酸、冰醋酸及二甲苯甲酰胺，难溶于大部分有机溶剂，纳他霉素是很好的真菌抑制剂，既能抑制真菌，又能抑制真菌毒素的产生。纳他霉素安全性能好，因为其难以被人体消化道吸收，微生物不容易产生抗体，通常喷雾方式用于食品表面的防霉变防腐。1997年我国卫生部正式批准纳他霉素作为食品防腐剂。在GB 2760-2014《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》中规定糕点中纳他霉素的限量值为0.5 g/kg。目前，纳他霉素在文献中报道的分析方法有导数光谱法[3]、紫外分光光度法[4，5]、生物检测法[6]、液相色谱法[7～13]、液质联用法[14～16]等。笔者应用高效液相色谱-紫外检测器检测方法对糕点中纳他霉素含量的测定进行了研究。

2材料与方法

2.1材料和仪器

实验材料：纳他霉素（Dr.Ehrenstorfer）、糕点（市场购买）；甲醇（色谱纯），aladdin公司。

实验仪器：E2695/2489液相色谱-紫外检测器，Waters公司；超纯水机，美国MILLIPORE公司；BSA224S电子天平，瑞士万通公司。

2.2实验方法

2.2.1色谱条件选择

色谱柱： Waters C8柱（250 mm×4.6 mm ，5 μm）， Waters C18柱（250 mm×4.6 mm ，5 μm）；流动相：甲醇+乙酸水溶液（10%） =60∶40；紫外检测器：305 nm；进样量10 μL；流速1.0 mL/min。

选择流动相，甲醇+乙酸水溶液（10%）选择了20∶40；40∶60；60∶40三种比例，慢慢增加甲醇的比例，发现在甲醇+乙酸水溶液（10%）=60∶40时候，标准品达到很好的基线分离。

2.2.2标准溶液配制

称取纳他霉素标准品1 mg，用甲醇溶解后定容至10 mL 容量瓶中，摇匀，该溶液作为标准储备溶液。准确移取上述溶液0.5、1、2.5、5、10 mL 分别置于10 mL 容量瓶中，用流动相定容，摇匀，经0.45 μm 滤膜过滤，取滤液备用，配成5、10、25、50、100 μg/mL标准品溶液。

2.2.3样品溶液配制

准确称取5 g左右制备样，加入甲醇30 mL超声30 min，加水10 mL，通过离心机4000 r/min离心10 min，取上清液过0.22 μm滤膜后供液相色谱测定用。

3结果与讨论

3.1线性关系的考察

精密吸取纳他霉素标准溶液10μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。纳他霉素标准品的回归方程为：y=1.33E+005x-1.24E+005，R2=0.999002。结果表明纳他霉素在5～100 μg/mL之间线性关系良好。信噪比等于3为标准，计算纳他霉素的检出限为0.5 μg/mL。见图1。

3.2精密度试验

精密吸取标准品溶液10 μL重复进样6次，记录色谱图峰面积，并测定峰面积的平均值和相对标准偏差，测定结果见表1。结果显示相对标准偏差为0.76%，本检测方法具有良好的准确度。

3.3重复性实验

取同一糕点样品，按照供试样品溶液制备方法重复测定6次，记录色谱图，测定结果见表2。结果表明，重复性实验相对标准偏差为0.61%。

3.4回收率实验

在上述优化好的条件下，分别在糕点样品中添加纳他霉素标样，进行加标回收率和精密度实验。由表3中可知回收率在97.2%～100.3%之间，表明高效液相色谱-紫外检测法检测糕点中纳他霉素含量具有良好的准确性。

3.5样品测定

取6批糕点按2.2.3方法制备样品溶液，样品溶液与标准品溶液分别注入高效液相色谱仪，外标法定量，见表4，样品中纳他霉素平均含量为0.547 μg/mL，相对标准偏差为1.31%。纳他霉素标准品及样品色谱图见图2，图3，纳他霉素的出峰时间5.3 min左右，结果令人满意。

4结论

本文采用高效液相色谱-紫外检测法来测定糕点中纳他霉素含量，对实验条件进行了优化，色谱柱采用Waters C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇+乙酸水溶液（10%） =60∶40为流动相分离效果好，本试验方法适用于糕点中纳他霉素的含量测定。

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Separation and Identification of Pimaricin in Cakes by High Performance Liquid Chromatography- Ultraviolet Absorption Detector

Zhu Yuyuan， Li Hongmei， Zhou Lu

（Baoying Organic Food Quality Supervision and Inspection Institute， Baoying， Jiangsu， 225800， China）

Abstract： This paper established ahigh performance liquid chromatography method for separation and determination of Pimaricin in cakes. The analytical column was Waters C18 （ 250mm×4.6mm， 5μm）. The mobile phase was methanol-acetic acid solution （10%） =（60：40， V/V）. The samples were determined by an ultraviolet absorption detector. The calibration curves had good linearity in the range of 5～100μg/mL for Pimaricin； the detection limit for Pimaricin was0.5 μg/Ml； the average recoveries of Pimaricin were 97.2%～100.3% and RSD is 0.98%（n=6）. The method was a convenient， rapid and effective method for qualitatively analysis of Pimaricin in cakes.

Key words： Pimaricin； cakes； HPLC； ultraviolet absorption detectorendprint