食品中阪崎肠杆菌能力验证结果分析与探讨

周露　马蓉

摘要：指出了为提升实验室食品中阪崎肠杆菌检测能力，增强实验室竞争能力，实验参与了食药总局组织的阪崎肠杆菌检测能力验证活动。利用BAX Q7对能力验证中的10个样品进行了快速筛查，根据GB 4789.40-2010《食品安全国家标准 食品微生物学检验 阪崎肠杆菌检验》，对疑似菌进行了鉴定。结果显示：编号CODE 2、CODE 6、CODE 9样品检出阪崎肠杆菌，其余7个样品均未检出阪崎肠杆菌。实验室顺利完成能力验证，结果为满意。

关键词：能力验证；阪崎肠杆菌；自动病源微生物检测系统

中图分类号：TS252.7

文献标识码：A文章编号：16749944（2017）18022403

1引言

阪崎肠杆菌（又称阪崎氏肠杆菌）是肠杆菌科的一种。它能引起严重的新生儿脑膜炎、小肠结肠炎和菌血症，死亡率高达50% 以上。目前，微生物学家尚不清楚阪崎肠杆菌的污染来源，但许多病例报告表明婴儿配方粉是目前发现的主要感染渠道。所以加强婴儿配方粉中的阪崎肠杆菌检验十分有必要，笔者所在的实验室参加了中国食药总局组织的食品安全抽检监测承检机构微生物检验盲样考核。

对于实验室而言，能力驗证是利用实验室间比对来判定实验室能力的活动。中国合格评定国家认可委员会（CNAS）利用能力验证结果评价实验室的技术能力，作为与现场评审构成互为补充的能力评价的重要方式。能力验证结果是CNAS判定申请认可和获准认可实验室是否维持其技术能力的重要依据之一＼[1＼]。

BAX Q7以DNA 为基础用于病原微生物检测和食品质量控制，使用实时荧光定量PCR 技术检测病原微生物，采用杜邦开发的高特异性引物，目标病原微生物独特的基因信号可以快速被检测。

2实验部分

2.1检验依据

GB 4789.40-2010《食品安全国家标准 食品微生物学检验 阪崎肠杆菌检验》＼[2＼]和食药总局能力验证作业指导书。

2.2仪器和试剂

仪器：电热恒温培养箱（上海精宏实验设备有限公司）；高压灭菌锅（日本RAYAMAHI）；电子天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；均质器（天津市恒奥科技发展有限公司）；超纯水机（美国Millipore）；数显恒温水浴锅（金坛市荣华仪器制造有限公司）；BAX Q7（美国 DUPONT）。

试剂：缓冲蛋白胨水（BPW）、改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素（mLST-Vm）、阪崎肠杆菌显色培养基、胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）、生化鉴定试剂盒均购自广州环凯微生物科技有限公司。BAX Q7试剂盒购自DUPONT。

2.3样品

样品：阪崎肠杆菌能力验证样品共10瓶，瓶号为CODE 1～10。共10袋奶粉样品，编号为CODE1～10。每个相同编号的阪崎肠杆菌样品和奶粉样品作为1件样品进行检测。样品由中国食品药品检定研究院提供。

2.4检测过程

2.4.1前增菌和增菌

根据组织方作业指导书要求，样品前处理按照作业指导书进行，在生物安全柜内将阪崎肠杆菌样品的西林瓶打开，取900mL灭菌BPW增菌液加入到无菌均质袋中，并将西林瓶内小球加入到BPW增菌液中，充分溶解。然后再将与西林瓶相同编码的奶粉样品加入到上述BPW增菌液中，充分匀质混匀。依此方法，分别对10件样品进行处理。同时按照GB 4789.40-2010《食品安全国家标准 食品微生物学检验 阪崎肠杆菌检验》做阳性对照实验。上述增菌液36℃培养18 h。用培养过后的增菌液上BAX Q7初筛，系统内部质控峰会在75～80 ℃之间出现一个峰值证明实验有效，阪崎肠杆菌则会在85～90 ℃之间出现峰值，峰值越大，说明样品阳性越强。仪器系统界面显示CODE 2、CODE 6、CODE 9为阳性，其余样品为阴性。结果见图1～11。从增菌液中移取1 mL转种于10 mL改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素（mLST-Vm），44 ℃培养24 h。

2.4.2分离

轻轻混匀mLST-Vm肉汤培养物，各取增菌培养物1环，分别划线接种于两个阪崎肠杆菌显色培养基平板，36℃培养24 h。结果见表1。挑取1～5个可疑菌落，划线接种于TSA平板。25 ℃培养48 h。

2.4.3鉴定

自TSA平板上直接挑取黄色可疑菌落，进行生化鉴定。结果见表2。

3结果

通过以上实验得到编号CODE 2、CODE 6、CODE 9样品检出阪崎肠杆菌，其余7个样品均未检出阪崎肠杆菌。

4讨论

能力验证结果可用于实验室内部质量管理、检测人员的技术能力考核、建立新的检测方法、检测仪器设备的验证和核查、有助于提高实验室技术能力。同时参加能力验证也有助于提升客户对实验室出具准确可靠的检测结果能力的可信程度，利于实验室提升市场影响力＼[3＼]。该实验室参加的此次能力验证结果为满意。

目前，国际上对食品安全检测技术呈现两个方向：一是传统实验室检测向着设备日趋精密、检测限量逐步降低方向发展；二是现场检测技术向着技术速测化、装备便携化的方向发展＼[4＼]。对实验的检测技术要求更快、更准确。本次实验采用了BAX Q7快速筛选和传统的手工操作两种方法，检测结果一致。但应用BAX Q7时应该注意可能出现的假阳性结果，因为样品可能在储藏、运输和再加工等环节中由于环节的变化导致菌体死亡，而菌体的核酸仍存在样品中，所以人工培育为阴性，而应用BAX Q7检测时出现阳性结果＼[5＼]。这时传统的手工操作也同样不可或缺。

通过此次能力验证笔者认为实验过程中应注意培养基的配置，因为阪崎肠杆菌培养的增菌液需要900 mL，普通的250 mL三角瓶不能适用，而采用了1000 mL的大容量三角瓶，所以要注意培养基配制过程中的灭菌效果。操作过程中由于样品多，注意避免样品之间交叉污染，在整个实验过程中要注意生物安全，防止操作人员被污染，实验结束后也应尽快对培养物进行无害化处理，避免污染环境＼[6＼]。endprint

此次通过两种方式检测的比对，BAX Q7操作简单，所需时间短，在大批量的检测任务中初筛，结合传统手工操作，能够更快更好地完成检测任务。

参考文献：

[1]

唐中奎.论实验室管理与能力验证活动＼[J＼].现代测量与实验室管理，2012，13（6） ：39～41.

＼[2＼]国家质检局.食品安全国家标准 食品微生物学检验 阪崎肠杆菌检验：GB 4789.40-2010＼[S＼].北京：国家质检局，2010.

＼[3＼]席静，张思群，刘静宇，等. 论能力验证活动对实验室能力建设的作用和意义＼[J＼]. 中国卫生检验杂志，2011，21（6）：1576～1578.

＼[4＼]陳蓓蓓，谢锋，谭红. 食品安全快速检测技术平台的建立＼[J＼]. 贵州科学，2014，32（2）：69～73.

＼[5＼]邓晓丽，许航，遇婷. 杜邦BAX Q7在食品检测中应用效果的验证＼[J＼]. 中国卫生检验杂志，2014，24（4）：956～964.

＼[6＼]颜瑛，罗玉彬，王文娟，等.食品能力验证中沙门氏菌的分离和鉴定＼[J＼]. 食品安全质量检测学报，2015，6（9）：3497～3503.

Proficiency Testing Results and Analysis of Enterobacter sakazakii in food

Zhou Lu， Ma Rong

（Baoying Quality Supervision and Testing Center for Organic Food， Baoying 225800， China）

Abstract： ＼[Objective＼] To strengthen the detection capability of Enterobacter sakazakii in food and improve the competition ability of laboratory，the laboratory participated in proficiency testing on Enterobacter sakazakii detection in food by China food and Drug Administration.＼[Method＼] BAX Q7 was used for 10 samples rapid screening.The isolated suspicious colonies were identified by the method of GB 4789.40-2010 National Food Safety Standard Microbiological Examination： Enterobacter sakazakii. ＼[Result＼] Enterobacter sakazakii was detected in sample CODE 2， CODE 6 and CODE 9 while the remaining 7 samples were not detected Enterobacter sakazakii.＼[Conclusion＼] The proficiency testing was successfully completed with satisfactory results.

Key words： proficiency testing； Enterobacter sakazakii； BAX Q7endprint