建立冻干粉针剂车间微生物地图

文/ 杨敏贤、黎敏婷、曹穗娴

建立冻干粉针剂车间微生物地图

文/ 杨敏贤、黎敏婷、曹穗娴

建立冻干粉针剂车间洁净区微生物数据库，绘制出冻干粉针剂车间微生物地图，其全面性、实用性、快捷性均符合公司要求——通过识别无菌洁净区微生物分布，采用特定的微生物鉴定方法，将洁净区环境监测过程中收集的所有微生物进行鉴定，在菌种来源的引入、生长条件、特性等方面进行分析，建立微生物数据库和冻干粉针剂车间洁净区微生物地图，并将分析结果用于指导消毒剂的选型。通过建立微生物地图，控制微生物负荷，为企业在药品生产过程中提供微生物污染溯源的分析方法及其有效的调查、监管手段。冻

干粉针剂车间生产的产品为非最终灭菌的无菌注射剂，产品生产过程中的微生物控制至关重要。随着国际药品法规对无菌保障要求的不断提升，同时2015年版《中国药典》中建议对洁净室和其他受控环境分离到的微生物进行鉴定，有助于污染调查，对无菌生产环境提供溯源依据[3]。国际上，建立微生物数据库和微生物地图是追溯产品微生物污染来源的有效方法，能够为无菌药品GMP 生产过程制定有效的控制措施提供依据。在质量管理上，要引入国际上先进的管理技术，建立冻干粉针剂车间洁净区微生物数据库，绘制出冻干粉针剂车间微生物地图，指导车间制定有效的微生物控制措施，降低微生物负荷，提高无菌保障水平。使企业的管理更加完善，更具国际化。现将结果报告如下。

冻干粉针剂车间环境监测点布点图

材料与方法

仪器设备主要包括：SW-CJ-2FD净化工作台、BSC-1000ⅡA2生物安全柜、SPX-400-Ⅱ培养箱、XG1.GWX-0.36B脉动真空灭菌器、YC-968AIC(GSP)医用冷藏箱、MAS-100NT浮游菌采样器、API细菌数值鉴定系统。用具包括培养皿、刻度吸管（1.0 mL，2.0 mL）、接种环、试管、试管架。培养基使用胰酪大豆胨琼脂培养基(3103726，广东环凯）

冻干粉针剂车间微生物分布地图

环境监测微生物的鉴定和分析

环境监测取样点的确定——根据车间的面积、房间数，考虑到可能影响到产品质量的关键区域及易于受到微生物污染的关键部位的分布，进行风险评估，设定了布点图。

数据的采集统计——每月对冻干粉针剂车间洁净区动、静态环境监测[1-2]及表面菌发现的微生物进行分离、鉴定并将数据进行统计。

微生物的鉴定包括以下步骤：

步骤1：菌株分离、纯化、培养。根据标准方法将环境中的菌株用平皿法分纯培养出单个菌落。

步骤2：定向试验。对细菌进行革兰氏染色镜检观察，根据革兰氏染色结果，进行氧化酶实验或触酶实验，再根据氧化酶实验或触酶实验选择对应型号的试剂条。例如：当镜检为革兰氏阳性杆菌，其菌为厌氧芽孢菌时应选用API 20A。

步骤3：试剂条判断。当试剂条培养基变为黄色，反应结果记为阳性，培养基仍保持均匀的紫色，反应结果记为阴性。

步骤4：最终结果。将试剂条的反应结果输入到软件中，自动进行数据处理，出最终的结果。

结果

微生物数据统计

对2015年06月～2016年06月车间A级、B级、C级洁净区环境及表面微生物监测数据进行统计与分析。

绘制出洁净区微生物地图

根据以上数据分析结果，按照菌属分析结果，葡萄球菌分为：藤黄球菌、里拉微球菌、表面葡萄球菌、头状葡萄球菌。将葡萄球菌、阳性杆菌、阳性芽孢杆菌以不同颜色打点的标记绘制出洁净区微生物地图。

微生物地图的全面性

统计2016年07月～2016年09月车间B级、C级洁净区环境及表面微生物监测鉴定数据，在已建立的冻干粉针剂微生物地图中的菌种进行一一比对，均能涵盖所有在车间洁净区出现的菌落种类。

微生物地图的实用性

从建立的冻干粉针剂车间微生物地图得知，B级、C级的微生物菌种主要为葡萄球菌属，洁净区更衣间的微生物菌种较多，而且葡萄球菌为人员及环境常见菌。据此，车间增加人员更衣后更衣间的表面消毒以及人员手部的消毒频次。

表1 洁净区微生物检定结果汇总表

表2 菌种来源分析表

表3 洁净区微生物的菌落种类溯源时间对比表

车间根据冻干粉针剂车间微生物地图的菌种类型和分布来源情况，拟选用0.02%次氯酸钠替代现有消毒剂0.2%苯扎溴铵。

微生物地图的快捷性

我们将建立冻干粉针剂车间微生物地图前后，洁净区微生物的菌落种类溯源时间进行对比，从表3可知，建立冻干粉针剂车间微生物地图后，洁净区微生物的菌落种类溯源时间从72.5 h缩短至24.5 h。

讨论

建立冻干粉针剂车间微生物地图能涵盖所有在车间洁净区出现的菌落种类，全面性达到目标；微生物地图显示的车间洁净区微生物的分布、来源等信息，能够为车间制定有效的控制措施提供依据，降低微生物负荷，实用性达到目标；可通过地图快速查找洁净区微生物的菌落种类，缩短微生物溯源时间，快捷性达到目标。

[1] 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会.GB/T 16293-2010，医药工业洁净室( 区) 浮游菌的测试方法［S］．北京:中国标准出版社，2010．

[2] 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会.GB/T 16294-2010，医药工业洁净室( 区) 沉降菌的测试方法［S］．北京:中国标准出版社，2010．

[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（2015版 四部）［S］．北京:中国医药科技出版社，2015：通则9205

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