顶空气相色谱法同时测定醒脑静注射液中6种有机溶剂的残留量

2017-10-13黄卫娟杨丽玲王淑芬黄肖梅何秀云东莞市第五人民医院广东东莞523900

中国药房 2017年27期

黄卫娟，杨丽玲，王淑芬，黄肖梅，何秀云，姜松，林绘（东莞市第五人民医院，广东东莞 523900）

黄卫娟＊，杨丽玲，王淑芬，黄肖梅，何秀云，姜松，林绘（东莞市第五人民医院，广东东莞 523900）

目的：建立同时测定醒脑静注射液中甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、乙酸乙酯、乙腈6种有机溶剂残留量的的方法。方法：采用顶空气相色谱法。色谱柱为DB-624毛细管柱，程序升温，进样口温度为200℃，检测器为氢火焰离子化检测器，检测器温度为250℃，载气为氮气，氮气流速为25 mL/min，分流比为35∶1，顶空进样量为1 mL，顶空加热温度为80℃，平衡时间为15 min。结果：甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、乙酸乙酯、乙腈检测质量浓度线性范围分别为15.00～240.00 μg/mL（r＝0.999 9）、25.00～400.00 μg/mL（r＝0.999 9）、25.00～400.00 μg/mL（r＝0.999 9）、25.00～399.99 μg/mL（r＝0.999 9）、25.00～399.99 μg/mL（r＝0.999 8）、5.00～80.00 μg/mL（r＝0.999 9）；定量限分别为5.98、3.94、2.05、2.13、1.39、1.24 μg/mL，检测限分别为2.01、2.11、1.18、1.56、1.15、0.01 μg/mL；精密度试验的RSD均＜2.0%，稳定性、重复性试验只检出乙酸乙酯，其RSD＜2.0%；回收率分别为93.59%～99.02%（RSD＝2.62%，n＝6）、92.42%～98.40%（RSD＝2.43%，n＝6）、94.81%～104.64%（RSD＝3.47%，n＝6）、94.56%～106.73%（RSD＝4.21%，n＝6）、97.04%～106.33%（RSD＝3.50%，n＝6）、98.40%～107.97%（RSD＝3.37%，n＝6）。结论：该方法专属性强，操作简便快速，结果准确，可用于醒脑静注射液中6种有机溶剂残留量的同时测定。

顶空气相色谱法；醒脑静；有机溶剂；残留量；甲醇；乙醇；异丙醇；正丁醇；乙酸乙酯；乙腈

ABSTRACTOBJECTIVE：To establish the method for simultaneous determination of 6 residual organic solvents in Xingnaojing injection，such as methanol，ethanol，isopropanol，n-butanol，ethyl acetate and acetonitrile.METHODS：Headspace GC method was adopted.The determination was performed on DB-624 capillary column by temperature programming with the injector temperature of 200℃；flame ionization detector was adopted with the temperature of 250℃；carrier gas was nitrogen with flow rate of 25 mL/min and split ratio of 35∶1；headspace sampling size was 1 mL，and heating temperature of headspace sampling was 80℃；equilibrium time was 15 min.RESULTS：The linear ranges of methanol，ethanol，isopropanol，n-butanol，ethyl acetate and acetonitrile were 15.00-240.00 μg/mL（r＝0.999 9），25.00-400.00 μg/mL（r＝0.999 9），25.00-400.00 μg/mL（r＝0.999 9），25.00-399.99 μg/mL（r＝0.999 9），25.00-399.99 μg/mL（r＝0.999 8）and 5.00-80.00 μg/mL（r＝0.999 9）.The LOQ were 5.98，3.94，2.05，2.13，1.39，1.24 μg/mL，and the LOD were 2.01，2.11，1.18，1.56，1.15，0.01 μg/mL，respectively.RSDs of precision tests were all less than 2.0%，stability and repetitive tests only ethyl acetate was detected，RSD＜2.0%；the recoveries were 93.59%-99.02%（RSD＝2.62%，n＝6），92.42%-98.40%（RSD＝2.43%，n＝6），94.81%-104.64%（RSD＝3.47%，n＝6），94.56%-106.73%（RSD＝4.21%，n＝6），97.04%-106.33%（RSD＝3.50%，n＝6）and 98.40%-107.97%（RSD＝3.37%，n＝6）.CONCLUSIONS：The method is specific，rapid，simple and accurate，and can be used for simultaneous determination of 6 residual organic solvents in Xingnaojing injection.

KEYWORDSHeadspace GC；Xingnaojing；Organic solvent；Residual；Methanol；Ethanol；Isopropanol；n-butanol；Ethyl acetate；Acetonitrile

醒脑静注射液由麝香、郁金、冰片、栀子等4味中药材组成，具有清热解毒、凉血活血、开窍醒脑的功效[1-3]，临床常用于中风昏迷、颅脑外伤、脑梗死等脑部疾病的治疗[4-6]，其联合纳洛酮可改善肝性脑病患者的认知功能，降低外周血神经毒性物质及炎症因子水平[7]。醒脑静注射液生产工艺中主要使用的有机溶剂是乙醇[8-9]，而在工业发酵生产乙醇时可产生甲醇、异丙醇、正丁醇、乙酸乙酯、乙腈等有机溶剂[10-12]，因此在醒脑静注射液生产过程中可能会带入这些有机溶剂。为保证该制剂的质量和用药安全，必须严格控制其有机溶剂的残留量。但目前有关醒脑静注射液中有机溶剂残留量的测定尚未见文献报道。鉴于此，笔者参考2015年版《中国药典》（四部）中关于有机溶剂残留量测定法的指导原则[13]和文献[14]采用顶空气相色谱法建立了同时测定醒脑静注射液中甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、乙酸乙酯和乙腈6种有机溶剂残留量的方法，以期为完善该制剂的质量标准提供参考。

1 材料

1.1 仪器

7890B型气相色谱仪，包括氢火焰离子化检测器、工作站、自动顶空进样器（美国Agilent公司）；PURELAB Ultra型超纯水仪[威立雅水处理技术（上海）有限公司]；BS124S型万分之一电子分析天平（德国Sartorius公司）。

1.2 药品与试剂

醒脑静注射液（厂家A，批号：1604112、1603052，规格：5 mL；厂家B，批号：1510132，规格：10 mL）；甲醇对照品（河北四友卓越科技有限公司，批号：110616，纯度：＞99.9%）；乙醇对照品（批号：20160601，纯度：＞99.7%）、异丙醇对照品（批号：20130726，纯度：＞99.7%）、正丁醇对照品（批号：20151228，纯度：＞99.5%）、乙酸乙酯对照品（批号：20160316，纯度：＞99.5%）均购自天津天泰精细化学品有限公司；乙腈对照品[赛默飞世尔科技（中国）有限公司，批号：135525，纯度：＞99.9%]；水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：DB-624毛细管柱（30 m×0.32 mm，1.80 μm）；升温程序：起始温度为60℃，保持8 min，以30℃/min升温至120℃，保持1 min，最后以60℃/min升温至220℃，保持1 min；进样口温度：200℃；检测器：氢火焰离子化检测器；检测器温度：250℃；载气：氮气；氮气流速：25 mL/min；分流比：35∶1；顶空进样量：1 mL；顶空加热温度：80℃；平衡时间：15 min。

2.2 溶液的制备

2.2.1 混合对照品溶液精密称取甲醇对照品0.300 3 g、乙醇对照品0.501 5 g、异丙醇对照品0.501 5 g、正丁醇对照品0.502 5 g、乙酸乙酯对照品0.502 5 g、乙腈对照品0.100 1 g，分别置于10 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得单一对照品贮备液。精密量取上述单一对照品贮备液各1 mL，置于同一100 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、乙酸乙酯、乙腈的质量浓度分别为300.3、501.5、501.5、502.5、502.5、100.1 μg/mL的混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液取样品适量，置于5 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 空白溶液以水为空白溶液。

2.3 专属性试验

精密量取“2.2”项下混合对照品溶液、供试品溶液、空白溶液各适量，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱，详见图1。由图1可知，在该色谱条件下，各有机溶剂均能达到基线分离，分离度＞1.5；理论板数以乙酸乙酯峰计＞5 000，保留时间约为7.25 min。结果表明，其他成分对测定无干扰。

图1 气相色谱图Fig 1 GC chromatograms

2.4 线性关系考察

分别精密量取“2.2.1”项下混合对照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mL，分别置于10 mL 量瓶中，加水定容，摇匀，即得系列混合对照品溶液。取上述系列混合对照品溶液各适量，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以各待测有机溶剂质量浓度（x，μg/mL）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，回归方程与线性范围见表1。

表1 回归方程与线性范围Tab 1 Regressive equations and linear ranges

2.5 定量限（LOQ）与检测限（LOD）

取“2.2.1”项下混合对照品溶液适量，倍比稀释，按“2.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。当信噪比为10∶1时，得LOQ；当信噪比为3∶1时，得LOD。结果，甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、乙酸乙酯、乙腈的LOQ分别为5.98、3.94、2.05、2.13、1.39、1.24 μg/mL，LOD分别为2.01、2.11、1.18、1.56、1.15、0.01 μg/mL。

2.6 精密度试验

精密量取“2.2.1”项下混合对照品溶液适量，用水稀释5倍，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、乙酸乙酯、乙腈峰面积的RSD分别为1.02%、0.81%、0.97%、1.38%、1.65%、1.00%（n＝6），表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验

精密量取“2.2.2”项下供试品溶液（批号：1604112）适量，分别于室温下放置0、2、4、6、8、10 h时按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，只检出乙酸乙酯，其峰面积的RSD＝1.32%（n＝6），表明供试品溶液在室温下放置10 h内稳定性良好。

2.8 重复性试验

精密量取“2.2.2”项下供试品溶液（批号：1604112）适量，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，只检出乙酸乙酯，其峰面积的RSD＝1.32%（n＝6），表明本方法重复性良好。

2.9 回收率试验

取空白辅料适量，共6份，精密称定，分别置于5 mL量瓶中，各加入一定质量的待测有机溶剂对照品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算回收率，结果见表2。

表2 回收率试验结果（n＝6）Tab 2 Results of recovery tests（n＝6）

2.10 样品中有机溶剂残留量的测定

取3批样品（批号：1604112、1603052、1510132）各适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，以外标法计算待测有机溶剂残留量。结果，3批样品中有2批（批号：1604112、1603052），只检出乙酸乙酯，其残留量均为0.01%（n＝3）。

3 讨论

3.1 溶剂的选择

由于醒脑静注射液中可能存在的有机溶剂在水中均有较好溶解性，且纯化水的安全性强、经济环保，故选择纯化水作为本研究的溶剂。

3.2 色谱柱的选择

本试验曾考察了HP-INNOWAX和DB-624两种型号的毛细管柱，发现使用HP-INNOWAX测定6种有机溶剂残留时，待测有机溶剂不能达到基线分离；而选用DB-624毛细管柱，可使待测有机溶剂完全分离且峰型尖锐美观，无杂质峰干扰。

综上所述，本方法专属性强，操作简便快速，结果准确，可用于醒脑静注射液中6种有机溶剂残留量的同时测定。

[1]汪秀月.气相色谱法测定醒脑静注射液中麝香酮含量[J].海峡药学，2011，23（11）：66-67.

[2]方颖，赵希贤，赵鸣舒，等.气相色谱法同时测定醒脑静注射液中麝香酮、龙脑、樟脑、异龙脑的含量[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（8）：96-99.

[3]杨立新，冯伟红，夏伯候，等.醒脑静注射液HPLC特征图谱研究[J].中国中药杂志，2016，41（9）：1640-1645.

[4]Peng W，Yang J，Wang Y，et al.Systematic review and Meta-analysis of randomized controlled trials of Xingnaojing treatment for stroke[J].Evid Based Complement Alternat Med，2014，doi：10.1155/2014/210851.

[5]华承磊，叶建新.醒脑静注射液的临床治疗现状[J].中国中医急症，2011，20（4）：626-627.

[6]于广石，陈军，周小荣.醒脑静治疗脑梗死急性期的临床效果初步研究[J].当代医学，2017，23（10）：40-42.

[7]邓磊，李依.醒脑静联合纳洛酮对肝性脑病患者相关指标的影响[J].中国药房，2017，28（12）：1630-1632.

[8]朱华桥.醒脑静注射乳剂的研究[D].沈阳：沈阳药科大学，2005.

[9]张琼丹.精制醒脑静注射液工艺与质量标准研究[D].广州：广州中医药大学，2012.

[11]沈怡方.白酒中四大乙酯在酿造发酵中形成的探讨[J].酿酒科技，2003，doi：：10.13746/j.njkj.2003.05.006.

[12]徐立，刘正丹，曹美龄.氢火焰-气相色谱法测定水中乙腈和丙烯腈的应用[J].中国卫生检验杂志，2010，20（12）：3530-3531.

[13]国家药典委员会.中华人民共和国药典：四部[S].2015年版.北京：中国医药科技出版社，2015：105.

[14]谢颖，戴丹，谢春燕.气相色谱法测定丹参酮ⅡA原料药中有机溶剂残留量[J].华西药学杂志，2014，29（1）：84.

Simultaneous Determination of 6 Residual Organic Solvents in Xingnaojing Injection by Headspace GC

HUANG Weijuan，YANG Liling，WANG Shufen，HUANG Xiaomei，HE Xiuyun，JIANG Song，LIN Hui（Dongguan Fifth People’s Hospital，Guangdong Dongguan 523900，China）

R917