法氏囊素对环磷酰胺诱导昆明小鼠免疫抑制的阻断试验

胡万荣 吕小婷 陈盛勇 刘楚楚 吴昌标 徐 磊＊ 刘友霖

（1.派生特（福州）生物科技有限公司 福州 350500；2.福建农业职业技术学院 福州 350119）

法氏囊素对环磷酰胺诱导昆明小鼠免疫抑制的阻断试验

胡万荣1吕小婷1陈盛勇1刘楚楚1吴昌标2徐 磊2＊刘友霖1

（1.派生特（福州）生物科技有限公司 福州 350500；2.福建农业职业技术学院 福州 350119）

本试验旨在探究法氏囊素（BS）对环磷酰胺（CP）诱导的昆明小鼠（KM小鼠）免疫抑制的阻断作用。选取24只3周龄KM小鼠随机分成对照组（Ⅰ）、环磷酰胺组（Ⅱ）和环磷酰胺+法氏囊素组（Ⅲ）三个组，在22日龄时，第Ⅲ组小鼠按体重腹腔注射BS 0.02 mL/g，同时第Ⅰ、Ⅱ组小鼠腹腔注射等量生理盐水；25日龄时，Ⅱ和Ⅲ组分别按体重注射CP 0.5 mg/g，同时第I组注射等量生理盐水，7 d后测定小鼠的生长及免疫指标。结果表明：Ⅱ组在试验期间死亡2只小鼠，其余两组未出现死亡；Ⅰ组、Ⅲ组小鼠的肝脏指数、肾脏指数均高于Ⅱ组，但差异不显著（P＞0.05）；Ⅰ组与Ⅲ组小鼠脾脏指数极显著高于Ⅱ组（P＜0.01）；Ⅰ组和Ⅲ组胸腺指数极显著高于Ⅱ组（P＜0.01）；白细胞计数显示，Ⅲ组白细胞数显著高于Ⅱ组（P＜0.05）。CP可明显抑制小鼠脾脏和胸腺的发育，损伤免疫器官的组织结构，造成白细胞明显减少或消失，而BS可有效阻断CP的抑制作用。

法氏囊素 环磷酰胺 小鼠免疫抑制 阻断

AbstractThe study investigates the inhibitory effect of Bursin (BS)on immunosuppression in kunming mice (KM)induced by cyclophosphamide(CP).Selected 3 weeks of KM mice were randomLy divided into control group(Ⅰ),cyclophosphamide group(Ⅱ)and cyclophosphamide+bursa of fabricius(Ⅲ),for three groups,in the age of 22,the groupⅢ mice by intraperitoneal injection of 0.02 mL/g weight BS,at the same time the groupsⅠandⅡ mice celiac injection amount of normal saline;The age of 25,groupsⅡand Ⅲwere injected with 0.5 mg/g weight CP,the group I amount of saline injection at the same time,7 days later,determination of growth indexes and immune indexes in mice.Results∶groupⅡ,2 mice died during test time,the rest of the two groups did not appear dead;the kidney index of groupsⅠand Ⅲ were higher than in Ⅱ group,but no significant difference(P＞0.05);the spleen index of groupsⅠand Ⅲwas significantly higher than that groupⅡ (P＜0.01);groupsⅠand Ⅲ thymus index was significantly higher than that of groupⅡ(P＜0.01);In the white blood cell count,according to Ⅲ group had a significantly higher number of white blood cell groupⅡ (P＜0.05).It is shown that CP can significantly inhibit the development of spleen and thymus of mice,and damage the tissue structure of immune organs,resulting in the obvious reduction or disappearance of white blood cells,while BS can effectively block the inhibition of CP.

Key wordsBursin Cyclophosphamide Immunosuppression of mouse Interdict

法氏囊素（Bursin）是禽类法氏囊组织产生的一种三肽（Lys-His-Gly-NH2）物质，主要存在于法氏囊组织的提取液中[1]，它在体外具有促进禽类和哺乳动物前体B淋巴细胞分化和增殖的作用，促进机体抗体的产生，对环磷酰胺引起的B细胞免疫抑制具有拮抗作用[2]。

环磷酰胺（Cyclosphamide，Cp）是人工合成的氮芥类烷化剂，其作用主要是破坏DNA的结构，从而阻断其复制，导致细胞死亡。而在免疫毒理学中，环磷酰胺是制备免疫抑制模型的常用药物[3]。

1 材料与方法

1.1 试验动物 24只3周龄KM小鼠，购自福州市闽侯县上街吴氏实验动物场，隔离饲养。

1.2 试验试剂 环磷酰胺，购自大连美仑生物科技有限公司；法氏囊素由派生特(福州)生物科技有限公司提供。

1.3 试验动物分组及处理 将24只3周龄KM小鼠随机分成3组：对照组（Ⅰ）、环磷酰胺组（Ⅱ）和环磷酰胺+法氏囊素组（Ⅲ）。22日龄时，第Ⅲ组小鼠按体重腹腔注射BS 0.02 mL/g，同时第Ⅰ、Ⅱ组小鼠腹腔注射等量生理盐水；第25日龄时，Ⅱ与Ⅲ组分别按体重注射CP 0.5 mg/g，同时第I组注射等量的生理盐水。见表1。

表1 KM小鼠分组设计

1.4 测定指标与方法

1.4.1 观察记录小鼠临床状态 试验期间，观察三组小鼠临床状况，包括小鼠饮水、采食、被毛和精神状态等，记录各组小鼠状死亡情况。对死亡小鼠记录、称重、心脏采血并进行剖解，收集脾脏、胸腺、肝脏、肾脏，称重。

1.4.2 脏器指数测定 死亡小鼠记录、称重、心脏采血并进行剖解，收集脾脏、胸腺、肝脏、肾脏并称重。未死亡小鼠于试验第7 d全部处死，处死前称重、心脏采血，处死后进行剖解，收集脾脏、胸腺、肝脏、肾脏并称重，计算脏器指数比值。脏器指数比值计算公式：

1.4.3 白细胞计数 取小鼠血液0.02 mL，加入3%乙酸溶液0.38 mL稀释血液，用小滴管从摇匀的稀释液中吸取少量液体加入血细胞计数池内，静置1～2 min，在显微镜下用低倍镜计数4个大方格的白细胞总数，然后将该值乘以50，即得每立方毫米的白细胞数。

1.5 数据处理 采用Excel与SPSS统计软件对试验数据记录、统计、分析。

2 结 果

2.1 小鼠临床情况 试验期间，Ⅰ组和Ⅲ组状态良好，Ⅱ组小鼠被毛逆立、饮水采食及精神状态较差，见表2。

2.2 各组小鼠脏器指数比值 由表3可知，Ⅲ组肝脏指数比与肾脏指数比均大于Ⅱ组，但差异不显著（P＞0.05）；Ⅲ组脾脏指数比值高于Ⅱ组，且差异极显著（P＜0.01）；胸腺指数比值中，Ⅲ组与Ⅱ组比值高2.14，差异极显著（P＜0.01）。

2.3 白细胞计数 由表4可知，在小鼠白细胞数比较中，Ⅲ组与Ⅱ组比值高1.81×109，差异显著 （P＜0.05）。

表2 各组小鼠7 d内临床情况

表3 小鼠脏器指数比值（均值±标准误）

表4 小鼠白细胞计数情况（均值±标准误）

3 讨 论

小鼠脏器指数比值关乎小鼠生长、免疫等情况，肝脏、脾脏与体重的比值可以反映该小鼠生长性能，脾脏、胸腺与体重的比值可以得出小鼠免疫系统情况，白细胞数目可直观表明小鼠免疫能力的强弱。环磷酰胺作为一种免疫抑制剂，已有大量研究表明其能抑制动物的体液免疫和细胞免疫应答，造成动物的免疫抑制[4-5]。表3-表4表明，一次性大剂量小鼠腹腔注射环磷酰胺，可引起小鼠严重免疫抑制，注射法氏囊素组小鼠，能够有效缓解由环磷酰胺造成的机体免疫抑制，这与计慧琴等[6]研究结果法氏囊素可以有效阻断环磷酰胺造成机体免疫抑制相一致。

4 结 论

环磷酰胺可明显抑制小鼠脾脏和胸腺的发育，损伤免疫器官的组织结构，造成白细胞明显减少或消失，而法氏囊素可有效阻断环磷酰胺的抑制作用，一定程度上恢复小鼠自身免疫功能。

[1]Audhya T,Kroon D,Heavner G,et al.Tripeptide Structure of Bursin,a Selective B-Cell-Differentiating Hormone of the Bursa of Fabricius[J].Science,1986,231(4741):997-999.

[2]姜秀丽.囊素三肽的定量测定及其体外生物学活性检测模型的建立[D].南京农业大学,2000.

[3]Peláez B,Campillo J A,López-Asenjo J A,et al.Cyclophosphamide induces the development of early myeloid cells suppressing tumor cell growth by a nitric oxide-dependent mechanism[J].Journal of Immunology,2001,166(11):6608-6615.

[4]Harrington C F.The speciation of mercury and organomercury compounds by using high-performance liquid chromatography[J].Trac Trends in Analytical Chemistry,2000,19(2):167-179.

[5]Vallant B,Kadnar R,Goessler W.Development of a new HPLC method for the determination of inorganic and methylmercury in biological samples with ICP-MS detection[J].Journal of Analytical Atomic Spectrometry,2007,22(3):322-325.

[6]计慧琴,王丙云,江青艳.三肽囊素对环磷酰胺诱导的鸡红细胞免疫功能低下的阻断作用 [J].中国家禽,2004,8(z1):38-40.

Blocking test of the effect of Fabricius on immunosuppression induced by cyclophosphamide in Kunming mice

Hu Wanrong1Lv Xiaoting1Chen Shengyong1Liu Chuchu1Wu Changbiao2Xu Lei2*Liu Youlin1
(1.Present(Fuzhou)Biotech Company Limited,Fuzhou 350500;2.Fujian Agricultural Vocational Technical College,Fuzhou 350119)

A

1003-4331（2017）05-0008-03

福建农业职业技术学院-福建省动物保健与食品安全应用技术协同创新中心项目、2015年度 “福建省高校杰出青年科研人才培育计划”（闽教科[2015]54号）、2015年福建省中青年教师教育科研项目计划 （JA15760）、2016年度福建省科技计划项目 （2016S0002）、2017年度福建省科技计划项目（2017N0009）、2015年福州市科技计划项目（2015-G-71）、2016 年福州市科技计划项目（2016-G-64）资助。

胡万荣（1990-），男，福建上杭人，硕士研究生，主要从事动物疾病与保健研究。E-mail:hwr009@163.com。

＊通信作者：E-mail:xulei0328@163.com。