慢性阻塞性肺疾病急性加重期外周血淋巴细胞免疫分型变化的相关因素分析

刘培培,程培培,侯松萍*

(1.吉林大学中日联谊医院 呼吸科，吉林 长春130033； 2.承德医学院附属医院 小儿内科)

慢性阻塞性肺疾病急性加重期外周血淋巴细胞免疫分型变化的相关因素分析

刘培培1,程培培2,侯松萍1*

(1.吉林大学中日联谊医院 呼吸科，吉林 长春130033； 2.承德医学院附属医院 小儿内科)

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一种严重危害人类健康的疾病，目前研究结果初步显示细胞免疫参与了COPD的病因、发病机制、恢复及预后整个过程。本文通过检测COPD患者外周血淋巴细胞的免疫分型变化，探讨COPD患者急性加重期的肺功能、血气分析、呼吸困难量表评分、病程长短等各项指标与其免疫功能变化的相关性，为临床综合诊治COPD提供一定的参考价值。

1 材料与方法

1.1 临床资料

选取吉林大学中日联谊医院2014年12月至2015年9月慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者137例，纳入标准：均符合中华医学会呼吸病学会2013年修订版慢性阻塞性肺疾病诊治指南[1]。排除标准：不能配合完成支气管舒张实验者，合并其它心肝肾等疾病者，近期使用激素、免疫抑制剂等影响免疫功能的患者，伴有其他部位慢性炎症的患者。确诊137例COPD患者，年龄35-78岁，平均66.01±10.78岁，其中男57例，女80例。测定所有患者外周血淋巴细胞免疫分型CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD19+、CD56+，并计算CD4+/CD8+比值。以COPD急性加重期患者淋巴细胞免疫分型的各项指标作为应变量，MMRC评分、FEV1Pred%、PaO2、PaCO2、病程、吸烟作为自变量，进行相关性分析。

1.2 方法

1.2.1 仪器和试剂 CD45-FITC/CD4-PE/CD8-ECD/CD3- PC5(货号：6607013)；细胞裂解液：OptiLyse○RNO-lysing Solution(货号：A11894)；流式细胞仪：Beckman Coulter FC500；以上所有试剂均购自美国Beckmen Coulter公司。肺功能测定采用MasterScreenPneumo型肺功能仪 (德国康尔福盛CareFusion公司)，技术标准参考2005年美国胸科学会和欧洲呼吸协会共同制定的肺功能测试标准[2]；血气分析测定采用GEMpremier3500分析检测仪(美国Instrumentation Laboratory公司)。

1.2.2 血液样本制备 采集患者外周血2 ml，加入到EDTA抗凝的真空管中混匀。取两只流式细胞仪上样管，分别命名为同型对照管和实验管，每管中均加入100 μl抗凝全血，然后分别加入20 μl同型对照抗体、CD45-FITC/CD4-PE/CD8-ECD/CD3-PC5抗体和CD45-FITC/CD56-PE/CD19-ECD/CD3-PC5，充分混匀，避光室温孵育15 min；然后向每管中加入红细胞裂解液500 μl，充分混匀，避光孵育10 min后加入500 μl PBS，1 000 r/min离心5 min，弃上清，每管加入500 μl鞘液，混匀，等待上机检测。血气分析动脉血由专业人员采集，采用一次性威世德动脉血气针，型号3302通用性动脉血气针，由全自动血液细胞分析仪读取结果。

1.2.3 指标测定 外周血淋巴细胞亚群及NK细胞检测均采用流式细胞检测技术，由我院中心实验室专人操作检测。每管获取细胞1×104个，以荧光抗体染色阳性细胞所占百分比记录结果。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 COPD急性加重期患者病程、MMRC评分、FEV1Pred%、血气分析结果等临床资料详见表1。

表1 COPD急性加重期患者临床资料

2.2 COPD急性加重期患者淋巴细胞免疫分型的各项指标与MMRC评分、FEV1Pred%、PaO2、PaCO2、病程、吸烟相关性分析显示： CD3+CD4+与PaO2呈显著正相关(P<0.05)；CD3+CD8+与PaCO2呈显著正相关(P<0.05)，但是CD4+/ CD8+比值与PaCO2呈显著负相关(P<0.05)；CD56+与mMRC评分呈显著正相关(P<0.01)，CD3+与mMRC评分呈显著负相关(P<0.05)，详见表2、表3。

表2 慢性阻塞性肺疾病急性发作期患者淋巴细胞免疫分型的多因素相关性分析

表3 慢性阻塞性肺疾病急性发作期患者淋巴细胞免疫分型的多因素相关性分析

*P<0.05，**P<0.01

3 讨论

Saetta 等研究结果提示发展为COPD的吸烟者与肺功能正常、无临床症状的吸烟者相比，CD3+CD8+T淋巴细胞数目明显增加，提示CD3+CD8+T淋巴细胞在气道的重塑方面起到了重要作用[3]。本研究结果显示外周血CD3+CD8+T淋巴细胞与PaCO2呈显著正相关(P<0.05)，说明气道阻塞性通气功能障碍越严重，CD3+CD8+T淋巴细胞也随着气道阻塞程度加重而造成的PaCO2增高而升高。Saetta等研究结果和本实验结果均提示CD3+CD8+T淋巴细胞在COPD患者气道炎症反应过程中起重要作用。

Won-Dong Kim等研究表明弥散功能正常的COPD患者与健康吸烟者或COPD伴有弥散功能减低的患者相比，其CD3+CD8+T淋巴细胞比例升高，CD4+/CD8+比值下降，且在这组患者中FEV1/FVC与CD4+/CD8+比值具有显著正相关性，推测CD3+CD8+T淋巴细胞可能参与部分COPD病人小气道病变及气流受限的炎症反应过程[4]。本研究结果显示COPD急性加重期患者，CD4+/CD8+比值与PaCO2呈显著负相关(P<0.05)，Won-Dong Kim等研究结果和本实验结果均提示CD4+/CD8+比值与气道阻塞程度密切相关。

表2、表3显示外周血CD3+CD4+与PaO2呈显著正相关(P<0.05)；CD3+CD8+与PaCO2呈显著正相关(P<0.05)，但是CD4+/CD8+与PaCO2呈显著负相关(P<0.05)，说明动脉血PaO2、PaCO2与外周血CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞、CD4+/CD8+比值密切相关。表2还显示CD3+T淋巴细胞与MMRC评分呈显著负相关(P<0.05)。这些结果说明COPD患者出现Ⅱ型呼吸衰竭和呼吸困难时能引起机体内CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+T淋巴细胞参与的细胞免疫功能紊乱，临床上应给予高度重视。

CD56分子是自然杀伤细胞 (NK细胞)主要的表面标志，本研究结果显示CD56+与MMRC评分呈显著正相关(P<0.01)，说明NK细胞参与了COPD患者的疾病进展过程，可能随着患者病情加重，NK细胞逐渐被激活，进一步发挥其免疫调控作用和抗感染作用。本研究结果显示CD19+B淋巴细胞及CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞与COPD急性加重期患者的肺功能、血气分析、呼吸困难量表评分、病程长短、吸烟等各项指标均无明显相关性；Jong JWD等研究表明吸烟的COPD患者中，FEV1占预计值百分比与CD19+B淋巴细胞具有正相关性[5]，Zhu X等研究结果显示在COPD患者中，吸烟可能对CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞功能产生抑制作用[6]，这两项研究结果与本实验不一致，因此，吸烟对COPD急性加重期患者外周血淋巴细胞亚群是否产生影响，还需进一步研究。

[1]慢性阻塞性肺疾病诊治指南(2013年修订版)，中华医学会呼吸病学分会慢性阻塞性肺疾病学组[J].中华结核和呼吸杂志，2013,36(4)：255.

[2]Pellegrino R,Viegi G,Brusasco V，et al.Interpretative strategies for lung function tests[J].European Respiratory Journal,2005,26(5):948.

[3]Saetta M ，Stefano AD，Turato G ，et al.CD8+T-lymphocytes in peripheral airways of smokers with chronic obstructive pulmonary disease[J].American Journal of Respiratory & Critical Care Medicine,1998,157(1):822.

[4]Won-Dong K,Woo-Sung K,Younsuck K,et al.Abnormal peripheral blood T- lymphocyte subsets in a subgroup of patients with COPD[J].Chest,2002,122(2):437.

[5]Jong JWD,Belt-Gritter BVD,Koeter GH,et al.Peripheral blood lymphocyte cell subsets in subjects with chronic obstructive pulmonary disease:association with smoking,IgE and lung function[J].Respiratory Medicine,1997,91(2):67.

[6]Zhu X,Gadgil AR,George M,et al.Peripheral T cell functions correlate with the severity of chronic obstructive pulmonary disease[J].Journal of Immunology,2009,182(5):3270.

*通讯作者

1007-4287(2017)09-1364-03

2016-10-17)