microRNA-376a在结直肠癌中的表达及其临床意义

王金艳，张志勇，张学明，冯俊伟，李雪梅，甄晓月，徐晋珩，胡月明，张 林，吴晨鹏

(唐山市工人医院 1.肛肠科；2.病理科；3.肿瘤外科，河北 唐山063000)

microRNA-376a在结直肠癌中的表达及其临床意义

王金艳1，张志勇2*，张学明1，冯俊伟3，李雪梅2，甄晓月1，徐晋珩2，胡月明2，张 林2，吴晨鹏2

(唐山市工人医院 1.肛肠科；2.病理科；3.肿瘤外科，河北 唐山063000)

目的检测microRNA-376a(miR-376a)在肿瘤组织和对应的切缘无瘤黏膜组织中的表达，并分析其与结直肠癌临床病理特征之间的关系。方法收集28例结直肠癌患者组织标本，应用实时定量PCR法，检测miR-376a在肿瘤组织和与其相邻的无瘤切缘黏膜组织中的表达；并分析miR-376a的相对表达水平与患者的不同病理特征之间的关系。结果miR-376a在结直肠癌组织和切缘无瘤组织中的相对表达水平中位数分别为1.164和1.685，四分位数间距分别为(0.326，1.966)和(1.079，2.332)；与无瘤黏膜组织比较，结直肠癌组织中miR-376a表达显著下调，差异具有统计学意义。miR-376a的表达水平与患者的肿瘤淋巴结转移、远处转移和肿瘤标志物CEA密切相关。结论miR-376a可能作为抑癌因子在结直肠癌中发挥抑制肿瘤生成的作用，并抑制了结直肠癌的侵袭、转移过程。

结直肠癌；Micro RNA-376a；临床病理特征

(ChinJLabDiagn,2017,21:1305)

近年研究显示，microRNA-376a(miR-376a)在食管癌[1]组织、肺癌组织[2]中表达上调，在乳腺癌[3]、卵巢癌患者血浆中表达增高[4,5]，在氧化偶氮甲烷诱导的大鼠CRC中，miR-376a的表达水平与CRC的发生发展密切相关。miR-376a与结直肠癌发生发展关系的研究较少。本研究主要分析miR-376a在结直肠癌组织中的表达水平与结直肠癌的发生发展、淋巴结浸润、远处转移及肿瘤标志物表达之间的关系，为结直肠腺癌的诊断、治疗及预后判断提供重要依据。

1 材料与方法

1.1 材料

本研究选取2015年1月到2016年1月的28例新鲜组织标本，取自唐山工人医院。选取患者结直肠肿瘤组织和切缘无瘤黏膜组织，离体后迅速置于液氮，存于-80℃备用。28例患者年龄35岁-84岁，平均63.64±10.77岁；男性15例，女性13例；结肠10例，直肠18例；未侵及浆膜16例，侵及浆(外)膜及以外12例；中高分化24例，低分化4例；无淋巴结转移13例，有淋巴结转移15例；无远处转移19例，发生包括肝转移、脉管瘤栓、大网膜、腹膜、神经及卵巢转移共计9例；CEA<20 ng/ml共20例，CEA≥20 ng/ml共8例；CA199<40 U/ml共23例，CA199≥40 U/ml共5例；CA724<5 U/ml共25例，CA724≥5 U/ml共3例。所有患者术前未接受任何放化疗，术后经两位副主任病理医师证实符合WHO结直肠腺癌诊断标准。

1.2 试剂与仪器

逆转录试剂盒、Real-Time PCR试剂盒等购买于Takara宝生物工程大连有限公司，U6、miR-376a引物合成、实时荧光定量PCR仪购买于美国Thermo Fisher Scientific；PCR基因扩增仪T100购买于美国BIO-RAD。

1.3 组织总RNA提取、反转录成cDNA，以U6为内参进行实时定量PCR反应测定miR-376a CT值，利用公式计算ΔΔCt值,计算2-△△Ct值，即为实验组目的基因的表达相对于对照组的变化倍数。

1.4 统计学方法

使用GraphPad Prism 5软件进行统计学分析，部分数据呈非正态分布，数据均以中位数(四分位数间距)表示，配对数据采用Wilcoxon检验方法，非配对数据采用Manny-Whitney检验方法，结果以P<0.05具有统计学意义。

2 结果

2.1 miR-376a在结直肠癌组织中表达

miR-376a在结直肠癌组织和切缘处无瘤组织中的相对表达水平中位数和四分位数间距见表1。与无瘤黏膜组织比较，结直肠癌组织中miR-376a表达显著下调，差异具有统计学意义。

2.2 miR-376a与结直肠癌组织临床病理特征之间的关系

miR-376a的相对表达量的中位数和四分位数间距与临床病理特征之间的关系见表2。提示，miR-376a在有淋巴结转移和远处转移的结直肠癌组织中表达低于无淋巴结转移和远处转移的组织，在肿瘤标志物CEA高于20的患者中表达低，差异具有统计学意义。miR-376a的表达与患者的性别、年龄、肿瘤部位、浸润深度、分化程度、病理类型、肿瘤标志物(CA199 、CA724)无明显关联。

表1 miR-376a在结直肠癌和切缘无瘤黏膜组织中的相对表达水平

注：miR-376a表达量为中位数(四分位数间距)，下同。

表2 miR-376a相对表达量与结直肠癌临床病理特征之间的关系

3 讨论

MicroRNA(miRNA)是一段有18-25个核苷酸的短链非编码RNA，它代表了一类内源性表达的小RNA,能够通过结合靶标mRNA的3’非转录区域在转录后水平抑制基因表达[6-8]。目前关于miR-376a表达及其与临床病理特征之间的关系尚无研究，因此，本论文分析结直肠癌患者肿瘤组织和其切缘无癌黏膜组织中miR-376a的表达水平及其与结直肠癌的不同病理特征之间的关系。

miR-376a是miR-376家族成员之一，miR-376家族在肿瘤的形成和进展过程中发挥作用。结直肠癌组织中miR-376a的表达水平与无瘤黏膜组织比较，显示结直肠癌组织中miR-376a表达显著下调，提示miR-376a作为抑癌基因在结直肠癌中起重要作用。虽然大部分的研究显示miR-376a是促癌miRNA，但是也有报道提出miR-376a表达增高抑制前列腺癌的进程和抑制肝癌细胞增殖并诱导其凋亡，而神经胶质瘤患者血清miR-376a表达水平明显低于健康对照者，说明miR-376a在肿瘤发生发展过程中的作用非常复杂。

Yang Liu等[5]人的研究显示，miR-376a在卵巢癌组织中表达增高，与正常对照比较，晚期卵巢癌患者血清中miR-376a表达水平明显高于未患卵巢癌的正常人，进一步研究发现，miR-376a通过调控Krueppel样因子15和Caspase-8影响卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭等生物学行为。结直肠癌组织中miR-376a与KLF15和Caspase-8及凋亡相关蛋白之间的联系值得深入研究。本文研究发现miR-376a在有淋巴结转移和远处转移的结直肠癌组织中表达低于无淋巴结转移和远处转移的组织，在肿瘤标志物CEA高于20 ng/ml的患者中表达低，差异具有统计学意义。miR-376a的表达与患者的性别、年龄、肿瘤部位、浸润深度、分化程度、病理类型、肿瘤标志物(CA199、CA724)无明显关联。因此推测miR-376a可能作为抑癌因子在结直肠癌中发挥抑制肿瘤生成的作用，并抑制了结直肠癌的侵袭、转移过程。鉴于miR-376a在肿瘤患者的肿瘤组织及血清中表达明显异常，深入研究miR-376a的表达变化对于结直肠癌的诊断、治疗及预后判断起到重要作用。

综上，miR-376a作为抑癌因子在结直肠癌的发生发展过程中密切相关，需收集更多的标本深入验证miR-376a与结直肠癌临床病理特征之间的关系。同时，我们也将分析血清中miR-376a表达水平与结直肠癌诊断、分型、治疗、预后等临床病理特征之间的关系，为开发miR-376a成为结直肠癌无创诊断及治疗的靶标提供依据。

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ExpressionofmicroRNA376aincolorectalcanceranditsconnectionwithclinicalsignificance

WANGJin-yan,ZHANGZhi-yong,ZHANGXue-ming,etal.

(TangshanGongrenHospital,Tangshan063000,China)

ObjectiveTo explores the expression of microRNA376a in colorectal cancer and the adjacent tumor free normal mucosa tissues,and analyze the relationship between expression of miR376a and clinic pathological features.Methods28 colorectal cancers and the adjacent tumor free normal mucosa tissues were obtained.Real time PCR was used to detect the expression of miR-376a;Relationship between relative expression of miR-376a and clinic pathological features of patient was analyzed.ResultsThere was a significant increase in miR-376a expression in colorectal cancers.The expressions of miR-376a were lower in with lymph node metastasis ,with distant metastasis and patients with CEA more than 20.ConclusionAs a cancer inhibitor,miR-376a inhibits formation of colorectal cancers and the invasion of colorectal cancer.

Colorectal cancer;Micro RNA-376a;clinic pathological features

河北省科技支撑计划项目(142777101D)；唐山市科技创新团队培养计划项目(16130207B)

*通讯作者

1007-4287(2017)09-1305-03

R735.3+5 R735.3+7

：A

王金艳(1982-),女,硕士,主治医师，主要从事肛肠疾病的诊治。

2017-07-19)