天山假狼毒根的化学成分研究

赵丹　吴桐宇　关永强　马国需　张晶　石磊岭

[摘要] 采用柱色谱方法对天山假狼毒Stelleropsis tianschanica根的95%乙醇提取物进行分离纯化，利用波谱技术对分得到的化合物进行结构鉴定。从天山假狼毒中分离得到了17个化合物，分别鉴定为5′甲氧基落叶松脂醇（1）、松脂素（2）、双白瑞香素（3）、acutissimalignan B（4）、（+）开环异落叶松树脂酚（5）、（+）表松脂酚（6）、7甲氧基西瑞香素（7）、thero8S7methoxysyringylglycerol（8）、1Omethylguaiacylglycerol（9）、2R22′阿魏酸酯2，3二羟基丙基酯（10）、vesiculosin（11）、4β，5βHguai9，7（11）dien12，8olide1α，8αdiol（12）、（-）nortrachelogenin（13）、4α，5βHguai9，7（11）dien12，8olide1α，8αdiol（14）、罗汉松脂素（15）、落叶松树脂素（16）和异落叶松树脂醇（17）。其中化合物1～13为首次从该属植物中分离得到。采用免疫荧光检测技术化合物3，7，10～14对孤儿核受体TR3的激活作用进行了考察，结果表明在50 μmol·L-1下， 化合物10的TR3激活率高达76.38%，化合物3，7，11～14的能力较弱，均在50.0%左右。

[关键词] 天山假狼毒； 化学成分； 松脂素； 双白瑞香素； TR3

Chemical constituents from roots of Stelleropsis tianschanica

ZHAO Dan1，2， WU Tongyu3， GUAN Yongqiang2， MA Guoxu2， ZHANG Jing1*， SHI Leiling2*

（1. College of Chinese Medicine Material， Jilin Agricultural University， Changchun 130118， China；

2. XinJiang Institute of Chinese and Ethnic Medicine， Urumqi 830002， China；

3. Center of Research and Development on Life Sciences and Environment Sciences， Harbin University of

Commerce， Harbin 150076， China）

[Abstract] The constituents from 95% ethanol extract of the roots of Stelleropsis tianschanica were purified by column chromatography techniques， leading to the isolation of 17 compounds. Their structures were elucidated by spectroscopic dataas 5′methoxy lariciresinol（1）， pinoresinol（2）， daphnoretin（3）， acutissimalignan B（4），（+）secoisolariciresinol（5），（+）epipinoresinol（6）， 7methyidaphnoretin（7）， thero8S7methoxysyringylglycerol（8）， 1Omethylguaiacylglycerol（9）， 2R22′ferulic acid ester2，3dihydroxypropyl ester（10）， vesiculosin（11）， 4β，5βHguai9，7（11）dien12，8olide1α，8αdiol（12），（-）nortrachelogenin（13）， 4α，5βHguai9，7（11）dien12，8olide1α，8αdiol（14）， matairesinol（15）， lariciresinol（16）and isolariciresinol（17）. Among them， compounds 113 wereobtained for the first time fromthe genus Stelleropsis. Compounds 3， 7， 1014 were tested for their activation of orphan nuclear receptor TR3 with the immunofluorescence technology in 50 μmol·L-1. The results showed that compound 10 displayed moderate activity with the activity ratio of 76.38%， and the others were only about 50.0%.

[Key words] Stelleropsis tianschanica； chemical constituents； pinoresinol； daphnoretin； TR3

中药狼毒类药材始载于神农本草经，其后历代本草均有记载，其性味苦平，有逐水祛痰，破疾杀虫之功效[1]，主治水肿腹胀，痰、食、虫积，心腹疼痛，慢性气管炎，咳嗽气喘，淋结、皮肤、骨、附睾等结核，疥癣，痔缕等症[26]。目前，国内外学者对狼毒进行过一些化学成分的研究，主要报道的化合物有木脂素类、香豆素类、酚类等[79]。临床上使用的狼毒科属十分混乱，伪品较多，正品为瑞香狼毒[1011]。天山假狼毒Stelleropsis tianschanica作为狼毒的伪品一直在新疆地区使用，该植物属于瑞香科假狼毒属Stelleropsis，生于海拔1 700～2 000 m的山坡草地，在我国分布于新疆昭苏县境内，国外吉尔吉斯斯坦也有分布[12]，然而有关该植物的化学成分及药理方面的研究报道尚属空白。针对这一现状，本课题组选取天山假狼毒为研究对象，采用系统溶剂提取法提取，对天山假狼毒根二氯甲烷提取部位的化学成分进行了分离研究，從中分离得到了17个化合物，分别鉴定为5′甲氧基落叶松脂醇（1），松脂素（2），双白瑞香素（3），acutissimalignan B（4），（+）开环异落叶松树脂酚（5），（+）表松脂酚（6），7甲氧基西瑞香素（7），thero8S7methoxysyringylglycerol（8），1Omethylguaiacylglycerol（9），2R22′阿魏酸酯2，3二羟基丙基酯（10），vesiculosin（11），4β，5β Hguai9，7（11）dien12，8olide1α，8αdiol（12），（-）nortrachelogenin（13），4α，5βHguai9，7（11）dien12，8olide1α，8αdiol（14），罗汉松脂素（15），落叶松树脂素（16）和异落叶松树脂醇（17），其中化合物1～13首次从该属植物中分离得到。为了进一步全面深入了解其有效成分，本实验研究了6个化合物对孤儿核受体TR3的激活作用，结果显示，化合物10对孤儿核受体TR3的激活率最强，达到76.38%。endprint

1 材料

BrukerAvance Ⅲ 600型核磁共振波谱仪，赛默飞世（Thermofisher）LTQObitrap XL液质联用仪，柱色谱硅胶（青岛海洋化工有限公司），柱色谱薄层色谱用硅胶GF254。HW40C凝胶（Toyopearl公司）MCI（日本三菱化学公司），常规试剂均为分析纯。

天山假狼毒采于新疆昭苏县，经新疆中药民族药研究所贾晓光研究员鉴定为天山假狼毒S. tianschanica的根。

2 提取分离

取天山假狼毒根部10 kg，阴干，粉粹，用10倍量95%乙醇加热回流提取3 次，每次2 h，合并提取液，回收溶剂，浓缩后得总浸膏2 189 g。总浸膏用水分散后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇各萃取3 次，萃取液减压浓缩至干。最终得到石油醚部位浸膏108 g、氯仿部位浸膏455 g、乙酸乙酯部位浸膏347 g、正丁醇部位浸膏276 g。取氯仿部位455 g经硅胶（100～200目）柱色谱，氯仿甲醇（1∶0～0∶1）梯度洗脱得到10个流分Fr.1～Fr.10。

Fr.1（5.0 g）进行硅胶柱色谱分离得到4个组分Fr.11～Fr.14。Fr.12（55mg）经HPLC半制备色谱分离（YMCPack ODSA，10 mm×250 mm，5 μm，60%甲醇）得到化合物1（2.3 mg），2（3.5 mg）。Fr.2（4.2 g）用反相材料Lichroprep Rp18（40～63 μm）柱色谱分离，薄层色谱检测，合并相似洗脱液得到5个组分Fr.21～Fr.25。Fr.21（0.1 g）经HPLC半制备色谱分离（YMCPack ODSA，10 mm×250 mm，5 μm，75%甲醇）得到化合物3（3.8 mg），4（2.9 mg）。Fr.23（80.0 mg），经HPLC半制备色谱分离（YMCPack ODSA，10 mm×250 mm，5 μm，53%甲醇）得到化合物5（3.4 mg），6（4.7 mg）。Fr.3（4.5 g）先后经HW40C凝胶柱色谱分离，得到3个组分Fr.31～Fr.33。Fr.32（0.4 g）经HPLC半制备色谱分离（YMCPack ODSA，10 mm×250 mm，5 μm，80%甲醇）得到化合物7（4.1 mg），8（3.6 mg），9（2.3 mg）。Fr.4（10.0 g）经硅胶（300～400目）柱色谱，得到5个组分Fr.41～Fr.45。Fr.42（0.2 g）析出得到化合物10（15 mg），Fr.43（0.15 g）经HPLC半制备色谱分离（YMCPack ODSA，10 mm×250 mm，5 μm，80%甲醇）得到化合物11（4.2 mg），12（2.2 mg），13（3.6 mg），14（3.9 mg）。Fr.45（72.0 mg）经HPLC半制备色谱分离（YMCPack ODSA，10 mm×250 mm，5 μm，45%甲醇），得到化合物15（2.6 mg），16（3.5 mg）。Fr.5（0.3 g）經MCI中压柱色谱，得到5个组分Fr.51～Fr.55。Fr.53（92.0 mg）经HPLC半制备色谱分离（YMCPack ODSA，10 mm×250 mm，5 μm，84%甲醇）得到化合物17（2.4 mg）。

3 结构鉴定

化合物1 无定形粉末，ESIMS m/z 413[M+Na]+。1HNMR（DMSOd6，600 MHz）δ：6.74（1H，s，H2），6.67（1H，d，J=8.4 Hz，H5），6.57（1H，d，J=8.4 Hz，H6），6.52（2H，s，H2′，6′），4.65（1H，dd，J=11.4，6.0 Hz，H7′），3.88（1H，m，H9a）， 3.74（3H，s，3OCH3），3.73（6H，s，3′，5′OCH3），3.68（1H，m，H9′a），3.56（1H，m，H9b），3.47（1H，m，H9′b）。13CNMR（DMSOd6，150 MHz）δ：32.1（C7），42.0（C8），52.4（C8′），55.5（3′，5′OCH3），55.9（3OCH3），58.7（C9′），71.8（C9），81.9（C7′），103.1（C2′，6′），112.7（C2），115.4（C5），120.6（C6），131.7（C1），134.4（C4′），134.7（C1′），144.6（C4），147.1（C3），147.4（C3′，5′）。以上数据与文献[11]对比，鉴定化合物1为5′甲氧基落叶松脂醇。

4 化合物对孤儿核受体TR3的激活作用的研究

4.1 化合物对TR3激活活性测定 报告基因分析（reporter gene assay）：293T细胞铺48孔板贴壁生长24 h后，利用PEI转染，PG5 50 ng/孔，pBindTR3LBD 50 ng/孔。转染24 h后加药，每个处理做3个复孔。加药12 h后，收样。用预冷1×PBS洗3次，每孔加60 μL裂解液，冰上裂解30 min。取30 μL裂解液用试剂盒测luciferase，renilla吸光度。对luciferase（荧光素酶）与renilla（海肾荧光素酶）吸光度比值作图，报告基因分析用于检测药物对TR3的转录激活活性。实验以TPA（phorobol ester 12Otetradecanoyl13phorbol acetate，十四烷酰佛波醋酸酯）作为阳性对照。

4.2 化合物对TR3的激活作用 实验以10 μmol·L-1浓度的TPA为阳性对照，考察6个化合物对孤儿核受体TR3的激活作用，结果表明待测化合物在50 μmol·L-1浓度下，化合物10对核受体TR3的激活作用较强，达到76.38%，化合物3，7，10～14的能力较弱，均为50.0%左右，见表1。endprint

5 讨论

本研究报道了从天山假狼毒根的二氯甲烷部位分离得到的17个化合物，其中13个化合物为首次从天山假狼毒植物中分离得到。本实验测试了其中6个化合物对孤儿核受体TR3的激活作用，结果表明化合物10有较强的激活核受体TR3促进细胞凋亡的潜能，该类化合物可能为天山假狼毒促进细胞凋亡活性的物质基础，为进一步开发利用天山假狼毒提供了科学依据。

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[责任编辑 丁广治]endprint