鸡李氏杆菌病的诊断与治疗

陈 铭

（泰兴市根思乡畜牧兽医站，江苏泰兴 225433）

鸡李氏杆菌病的诊断与治疗

陈 铭

（泰兴市根思乡畜牧兽医站，江苏泰兴 225433）

针对泰州市某鸡场出现产蛋鸡2天内有2.5%发病致死亡的情况，采用临床检查、剖检观察、实验室检验等方法诊断，观察到发病鸡鸡冠肉髯发绀并伴有神经症状，且采食量、产蛋率均下降，剖检可见脑膜充血、心冠脂肪有出血点、肝脏有黄白色坏死点、腺胃黏膜出血等症状，染色镜检可见两端钝圆的蓝紫色短小杆菌，部分呈V形排列，诊断为鸡李氏杆菌病。经阿米卡星、庆大霉素、诺氟沙星、头孢曲松等10种常用抗生素药敏实验，结果显示阿米卡星、头孢氨苄、头孢唑啉、头孢曲松、头孢拉啶的敏感度较强；庆大霉素、青霉素的敏感度中等；多西环素、诺氟沙星、氯霉素几乎不敏感。根据药敏结果用头孢拉定对鸡群进行治疗，一周后鸡群基本恢复正常。

李氏杆菌 诊断 细菌形态 药敏实验 预防 鉴别诊断

近年来，随着养鸡行业的迅速发展，越来越多的人转向养鸡行业，其中包括很多非专业的人员。在部分鸡场内出现的由于饲养密度、环境卫生、饲养管理上存在的问题导致的各种致病菌与日俱增。李氏杆菌病是由李斯特菌引起的一种散发性的人畜共患传染病。该菌与某些大肠杆菌有共同抗原，由于交叉反应的普遍存在，故血清学诊断难度较大。目前，国内对该病的诊断与检测尚处在传统病原体的分离鉴定上，包括病料的病原的分离、生化反应、动物实验。本文介绍1个典型病例的诊断治疗情况。

1 发病情况

2015年1月19日泰州市高港区某鸡场共养殖2000多只蛋鸡，主诉一天内死亡20多只，发病2d内，共死亡50多只蛋鸡。发病鸡鸡冠干缩，肉髯发绀，羽毛蓬松，两翅下垂，喜卧或兴奋，尖叫、仰头、全身抽搐，严重脱水，皮肤暗紫色，短期内死亡。病程较长的出现共济失调，仰头、斜颈、跳跃等神经症状。发病过程中鸡群的整体采食量下降5%左右，产蛋率下降10%左右。该段发病时间天气变幻无常，温差较大。

2 临床症状

病鸡精神沉郁，食欲不振，下痢，尾部羽毛脱落严重等症状。部分病鸡鸡冠肉髯发绀，腿部发生阵发性抽搐，行走不便，呈跳跃状，双翅下垂，神志不清；部分鸡腿部皮肤干燥，鳞片粗糙，脱水严重，眼睛干涩流泪、怕光；个别病鸡眼眶周围略微肿胀，眼眶周边皮肤呈蓝色或暗紫色。

3 病理变化

病死鸡出现脑膜明显充血，心肌有坏死灶，心包内有少量积液，心冠脂肪有出血点。几乎所有病死鸡均出现肝脏肿大呈土黄色，有黄白色针尖大坏死点和深褐色瘀斑，质脆易碎。脾脏肿大，呈红黑色，有出血点。腺胃黏膜出血，有卡他性炎症。肠道黏膜脱落，十二指肠有弥漫性出血，少量病死鸡肠道内有线虫。腿部肌肉有少量出血点。

4 实验室诊断

4.1 细菌分离培养

取两只病死鸡的肝脏，在无菌环境下将其切面在普通琼脂培养基上轻轻涂擦，将两个培养皿标记好A、B并放入37℃恒温培养箱中培养24h。24h后培养皿中长出光滑、透明、边缘整齐的小菌落。分别选取A、B中的单个菌落在巧克力培养基上分区划线，进行分离培养，再次放入37℃恒温培养箱中培养24h。24h后巧克力培养基上几乎无菌落生长，怀疑巧克力培养基不适合该菌生长。再利用犊牛血清培养基对该菌进行分离培养，同时利用巧克力培养基做同样的分区划线进行分离培养，巧克力培养基作为对照组。24h后该菌在犊牛血清培养基生长良好，分离出单个菌落，而巧克力培养基上仍然无菌落生长迹象。

4.2 染色镜检

取两张载玻片，分别标记A、B。以滴管取一滴生理盐水放到载玻片上，再用灭菌的接种环取一颗菌落混合于水滴中，混合均匀，铺开到硬币大小的面积。将载玻片涂有菌液的一面向上，背面在火焰上缓缓来回通过，以不烫手背为度。在已干燥，固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液覆盖整个菌层，1min后水洗甩干；加革兰氏碘液于抹片上，1min后水洗甩干；加95%的酒精脱色，过程中使抹片倾斜，直到流下的液体无色，水洗甩干；加苯酚复红染色液复染1～3min，水洗，干燥；镜检。

镜检观察到两端钝圆蓝紫色的短小杆菌，单在或组成短链，也有的呈V形或按长轴平行并列排列（见图1，2），且A、B的形态结构都相似。

图1 （A菌显微镜下的形态）

图2 （B菌显微镜下的形态）

4.3 生化实验

4.3.1 制备糖发酵培养基

将1.0g蛋白胨、0.5g氯化钠加热溶解于100ml蒸馏水中，测定矫正pH为7.6，过滤后加入0.1ml1.0%溴甲酚紫酒精溶液和0.5g水杨苷，然后分装于小试管内113℃高压蒸汽灭菌20min。

4.3.2 实验方法

将纯培养的A、B分别接种到水杨苷发酵培养基内，倒置放入37℃恒温培养箱内培养。

4.3.3 实验结果

培养24h后A、B培养基均变为黄色，无气泡产生。

5 鉴别诊断

5.1 新城疫

类似处：精神委顿，食欲减少或丧失，羽毛松乱，不愿走动，缩颈，翅翼下垂，鸡冠和肉髯呈紫色，眼半闭或全闭，状似昏睡。双腿麻痹、跛行或站立不稳，下痢。剖检可见：腺胃乳头肿胀、出血或溃疡，十二指肠黏膜及小肠黏膜出血或溃疡。

不同处：鸡的新城疫往往以呼吸道症状开始，继而下痢。呼吸道黏液增多，为排除黏液，常甩头或吞咽。倒提时常从口角流出大量酸臭的暗灰色液体。排黄绿色或黄白色水样稀便，有时混有少量血液，死亡率达90%以上。剖检可见：产蛋鸡常有卵黄泄漏到腹腔形成卵黄性腹膜炎，十二指肠黏膜及小肠黏膜有时可见到“岛屿状或枣核状溃疡灶”。

5.2 神经型马立克氏病

类似处：病鸡低头或斜颈，站立不稳，两腿前后伸展，呈“劈叉”姿势，翅膀下垂。剖检可见：坐骨神经纹路模糊，水肿。

不同处：神经型马立克氏病一般精神尚好，并且有食欲，但往往由于迷走神经受损鸡嗉囊麻痹或膨大，食物不能下行。饮不到水而脱水，吃不到饲料而衰竭，或被其他鸡只践踏，最后均以死亡而告终。

5.3 鸡链球菌病

类似处：有传染性，突发精神委顿，羽毛粗乱，冠髯发紫，头颈弯曲，仰头，腿部痉挛或两腿软弱无力。剖检可见：心冠脂肪有出血点，肝肿大及肝有紫色瘀血斑和坏死灶，肾肿大。细菌培养时，在血清培养基上生长较好，而在麦康凯培养基上均不生长。糖酵解实验中均能产酸。

不同处：鸡链球菌病的病原为链球菌，部分病鸡冠髯苍白，腿部轻瘫，跗跖关节肿大、跛行。足底皮肤组织坏死。部分病鸡羽翅发炎、流分泌物，结膜发炎，流泪。剖检可见：肝呈暗紫色，脾有出血性坏死，肺瘀血、水肿，喉干酪样坏死，气管和支气管充满黏液。无菌采取肝、脾血液涂片，革兰氏染色后镜检，可见革兰氏阳性的单个或短链状排列的球菌。且鸡链球菌可酵解甘露醇。

5.4 肉毒梭菌毒素中毒症

类似处：群发，突然发病，精神萎靡，羽毛松乱，双翅下垂，腿软弱无力，下痢。剖检可见肠道出血。细菌培养时，对营养要求不高，普通琼脂培养基上均能生长。

不同处：肉毒梭菌毒素中毒症的病因是采食含毒素的高蛋白腐败性饲料而发病。病鸡自腿向翅、颈、头发生麻痹，头颈无力，不能抬起，粪中含有大量的尿酸盐。肉毒梭菌生化性状不规律，不分解乳糖。

5.5 鸡弓形虫病

类似处：有传染性，下痢，行动不稳，弯颈仰头，腿部抽搐。

不同处：病原为弓形虫，患病鸡鸡冠苍白，贫血，排白色稀粪，歪头失明，后期麻痹。剖检可见：心膜有圆形结节，腺胃壁增厚，小肠有结节且明显增厚，脾有坏死灶。用腹腔液或组织涂片后镜检可见虫体。

根据临床症状，实验室细菌分离，生化实验，镜检结果并结合上述鉴别诊断的理论依据，本病例被确诊为李氏杆菌感染。

6 治疗

6.1 药敏实验

6.1.1 接种菌落

将A、B菌种分别涂满犊牛血清培养基，每种菌需要涂满两个培养皿。每种菌均用10种常用抗生素（阿米卡星、头孢氨苄、庆大霉素、青霉素、头孢唑啉、多西环素、头孢曲松、诺氟沙星、头孢拉啶、氯霉素）进行药敏实验。

6.1.2 贴纸片

用镊子取纸片一张，贴在培养基表面，用镊尖轻压，使其贴平，纸片一旦贴上就不能再拿起，因为纸片中的药物已经扩散到琼脂中。纸片间距不小于24mm，纸片中心距平皿边缘不小于15mm。贴好后，须在15min内置35℃培养箱培养。

6.1.3 培养

平板需在35℃培养箱内单独放置，不超过两个叠放在一起，否则中间的平板达不到培养箱温度而产生预扩散作用，平板培养18～24h，读取结果。（见图3～6）

图3 （A菌药敏实验）

图4 （A菌药敏实验）

图5 （B菌药敏实验）

图6 （B菌药敏实验）

6.1.4 药敏结果

依据抑菌圈直径≤5mm视为不敏感；6mm≤抑菌圈直径≤10mm为低度敏感；11mm≤抑菌圈直径≤20mm为中度敏感；抑菌圈直径≥21mm为高度敏感的药物敏感度判定标准，详细结果见表1

表1 选用的抗生素的抑菌圈直径及敏感度

6.2 治疗用药

根据药敏试验的结果（见表1）建议鸡场按以下方案进行治疗：对整个鸡场用头孢拉啶150mg/kg拌料，浓缩鱼肝油粉按推荐量加倍，拌料喂服，病情严重者可酌情加量使用；连续用药一周。

6.3 治疗结果

用药后定期通过电话回访畜主，了解鸡群治疗效果，情况如下：

用药2～3d后：鸡群的死亡率有所下降，鸡群整体采食量有所提升。

用药4～5d后：鸡群采食量几乎恢复正常，只有个别弱鸡死亡（适量增加鸡群的饮水量，以加快药物排泄）。

用药6～7d后：鸡群无死亡，整体精神状态较好，产蛋率基本恢复。

7 小结与讨论

（1）在细菌分离培养的实验中，我们发现鸡李氏杆菌可在普通琼脂培养基中生长，犊牛血清培养基能更好地促进其生长，而巧克力培养基不适合其生长，甚至抑制其生长。

（2）药敏实验中我们可以得出的结论是：该菌对阿米卡星、头孢氨苄、头孢唑啉、头孢曲松、头孢拉啶的敏感度较强，其中头孢唑啉对其作用最强。而对庆大霉素、青霉素的敏感度中等。对多西环素、诺氟沙星、氯霉素几乎不敏感。

（3）由于当前养殖过程中抗生素的滥用和长期使用，大部分细菌都有较强的耐药谱，治疗药物的选择必须通过药敏试验来选择。

（4）本病一般为散发或呈地方性流行，一般很少见典型发病和流行，临床症状、病理变化易与马立克氏病（神经型）、新城疫、鸡链球菌病等混淆，不易确诊，必须通过临床诊断和实验室检测才能确诊。

（5）本病主要发生在冬季和早春，劣质、腐败的饲料可成为该病的传染源，被污染的水和土壤均可成为该病的传染媒介，体内寄生虫或沙门氏菌感染亦可成为该病发生的诱因[8]。故加强饲养管理、搞好环境卫生，有效消毒是预防本病的关键。

①饲料、饮水的管理

购买饲料成品或原料时应注意检查霉变情况，必要时可通过化验进行检验，运输、保存的过程中应注意防潮、防鼠、防鸟措施。水源周围50m内不得设置贮粪场，渗漏厕所。水井设在地势高燥处，防止雨水、污水倒流引起污染。定期进行水质检测和微生物及寄生虫学检查，发现问题及时处理。

②环境卫生方面

冬季和早春，缺乏青饲料，天气骤变均可成为该病发生的诱因。所以冬季、早春要注意畜舍的防寒保暖工作，尤其注意门窗角落，防止贼风侵袭。病畜、死畜需及时隔离、处理，在处理死畜尸体时，不论采用何种方法，都必须将病畜、死畜的排泄物，各种废弃物等一并进行处理，以免健康畜禽接触感染。畜禽舍内需定期更换垫料。

③有效消毒

场地、用具可用3%碳酸，3%来苏水，2%火碱，5%漂白粉等严格消毒。粪便可焚烧或消毒，需要消毒的粪便量较少时，可用2%～5%的有效氯的漂白粉溶液，20%石灰乳等。将污染的粪便与漂白粉或新鲜的生石灰混合，然后深埋于地下，埋的深度应达2m左右。

④定期驱虫

鸡场内的鸡要定期做好驱虫工作，争取做到自繁自养、全进全出的养殖模式。

该病目前尚无疫苗预防[6]

[1]黄青云.畜牧微生物学（第五版）[M].北京：中国农业出版社，2009：223.

[2]马兴树.禽传染病实验诊断技术[M].北京：化学工业出版社，2005：111.

[3]黄银云，胡新岗.禽病防治[M].北京：中国农业科学技术出版社，2012：4-7.

[4]羊建平，张君胜.动物病原体检测技术[M].北京：中国农业大学出版社，2013：72-73.

[5]丘晓花，冯明英，李燕.柑橘皮提取物体外抑菌活性的研究[J].中国民族民间医药，2011，24（10）：5-6.