H5N1亚型禽流感(Re-6+Re-7)疫苗在鸡群的免疫抗体消长规律

罗江华 吴朝芳 卢黎明 樊莉 徐弘 鲍伟华/浙江省宁波市畜牧兽医局

孙鹏烈/浙江省宁波市鄞州区畜牧兽医站

吴银丽/浙江省宁海县畜牧兽医局

H5N1亚型禽流感(Re-6+Re-7)疫苗在鸡群的免疫抗体消长规律

罗江华 吴朝芳 卢黎明 樊莉 徐弘 鲍伟华/浙江省宁波市畜牧兽医局

孙鹏烈/浙江省宁波市鄞州区畜牧兽医站

吴银丽/浙江省宁海县畜牧兽医局

高 致 病 性 禽 流 感(Highly pathogenic avianinfluenza，HPAI)是由正粘病毒科流感病毒属A型禽流感病毒(AIV)引起的禽类高度接触性、急性传染病。OIE将其列为应报告动物传染病。AIV分为若干亚型，其中H5、H7亚型多为高致病性强毒株，最近的研究表明，H5型禽流感病毒与以前相比已经更容易使哺乳动物致病，并更广泛的在鸟类中传染,到目前为止，已经发现了感染禽流感病毒的猫、老虎和雪豹，禽流感的宿主范围变得越来越广。HPAI不仅对家禽业造成重大经济损失，并可直接感染人，具有重要的公共卫生意义。世界不同国家采取扑杀或疫苗免疫进行有效防控HPAI，我国H5N1亚型禽流感灭活疫苗对鸡和水禽均具有良好的免疫效果。根据AIV株的变异趋势，2014年我国对H5N1亚型禽流感疫苗病毒株进行了调整，采用Re-7疫苗病毒株代替之前使用的Re-4疫苗株制备。本研究选择了某鸡场进行新H5N1亚型重组禽流感(Re-6+Re-7)灭活疫苗的临床免疫试验，通过跟踪检测疫苗免疫后抗体变化情况，了解该二价疫苗免疫后的抗体消长规律和特点，评估其对Re-6和Re-7毒株的防控效果。

一、材料和方法

1．主要实验材料及实验动物。

重组H5N1亚型AIV灭活疫苗 (Re-6+Re-7)(批 号：2014001)购自辽宁益康生物股份有限公司2012006)和H5N1亚型禽流感Re-6、Re-7、Re-4株灭活血凝抗原及阳性对照血清，购自哈尔滨维科生物技术开发公司。选取鄞州区集士港镇某鸡场的三黄鸡(1 500只)进行实验。

2.抗体检测方法及判定标准。

抗体检测采用国家标准《高致病性禽流感诊断技术》(GB／T 18936—2003)中血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验方法。通过log2的指数均值计算平均HI抗体效价，以每份样品的禽流感免疫抗体水平≥41og2为合格，并计算免疫合格率。

3.分组及实验设计。

在32日龄时随机抽取30只鸡采血，之后将鸡群在33日龄、63日龄2次重组H5N1亚型二价灭活疫苗(Re-6+Re-7)免疫(以下简称二价疫苗(Re-7+Re-6)。按照说明书规定剂量进行免疫。实验鸡群分别在48日龄、63日龄（二免前）、84日龄、115日龄、147日龄、205日龄时随机抽取30只鸡采血分离血清测抗体。实验鸡血清均采用HI试验检测H5N1亚型禽流感Re-7、Re-6、Re-4抗体。

二、结果

1.鸡免疫试验结果。

33日龄随机抽取30只鸡检测Re-6、Re-7母源抗体合格率分别为12.5%和0%，可见母源抗体对二价疫苗(Re-6+Re-7)的影响已经处于比较低的水平。从检测数据看，一免后15天Re-6和Re-7免疫抗体合格率分别为63.33%和60.00%，而且免疫抗体继续上升，到二免前分别达到了93.33%和90.00%，二面后直到第205日龄，免疫抗体都在96%以上（详细结果见表1、表2）。

同时本试验中还对Re-4毒株非免疫抗体进行了检测，显示该类型母源抗体在33日龄时仍处于比较高的水平，且二免前抗体合格率变化不大，二免后则快速上升并维持较高水平，最高时（二免后七周）90%以上（详情见表3）。

表1 鸡群Re-6免疫抗体检测结果（log2）

表2 鸡群Re-7免疫抗体检测结果（log2）

表3 鸡群Re-4免疫抗体检测结果（log2）

三、讨论

本研究采用H5N1亚型禽流感二价疫苗（Re-6+Re-7）对1500只鸡群进行免疫实验，通过分析免疫抗体水平检测评估表明，采用H5N1亚型禽流感二价疫苗（Re-6+Re-7），在试验中能诱导出较高的免疫抗体，表现出良好的抗原性和免疫效果。免疫抗体跟踪检测结果显示该二价苗在二免前Re-6和 Re-7抗体合格率都可以达到90%以上，且两种抗体90%以上保护率长达205 d。研究也发现，免疫抗体评价最好在首免三周以后采血检测，才能真实评价该疫苗的免疫效果，否则可能会出现免疫效果达不到标的现象。

鉴于实验中含有的Re-7毒株疫苗和之前使用的Re-4毒株疫苗同属一个分支，亲缘关系较近，因此本次实验中将Re-4抗体列入调查对象，结果显示，33日龄时，该批鸡群的Re-4母源抗体还处于比较高的水平，为31.25%，说明鸡群的父母代经过了Re-4毒株疫苗的良好免疫。实验过程中发现了一个奇怪的现象，二免前该抗体合格率变化不是很大，二免后合格率水平则大幅上升，并维持比较高的水平，最高时（二免后七周内）甚至在90%以上。因此对于Re-7和Re-4疫苗之间是否存在交叉免疫保护等现象，还有待于我们继续研究。

不过由于本次实验数据都是建立在对1 500只鸡群的免疫评估基层之上，每批抽样采血的都是随机抽取的，不排除存在鸡个体差异及其他因素在实验过程中造成的误差，因此实验数据都只是实验评估数据，但本法是基层工作中常用的免疫评估方法，通过本次实验可以得出，此种免疫评估方法在基层实际工作中具有一定的科学性和可行性，能够满足基层免疫效果评价的要求。

另外，通过实时检测鸡群母源抗体的方式，是一个行之有效的首免日龄确定方法，这样能有效减少免疫次数及免疫低效等问题，提高我们日常生产中防疫工作的效果。

（略）