结肠癌中CyclinD1蛋白的表达及临床意义

王大东 韦春回

530021广西医科大学附属民族医院消化内科(南宁)

结肠癌中CyclinD1蛋白的表达及临床意义

王大东 韦春回

530021广西医科大学附属民族医院消化内科(南宁)

目的：探讨细胞周期蛋白D1(CyclinD1)蛋白在结肠癌组织中的表达及临床意义。方法：选取结肠癌患者癌组织、癌旁组织及正常胃黏膜组织50例，采用免疫组化SP法检测各组标本中CyclinD1的表达。灰度值越高，表示CyclinD1表达越少。结果：CyclinD1在结肠癌组织、癌旁组织、正常黏膜组织中的表达呈逐渐降低趋势(P均＜0.05)，CyclinD1蛋白表达与结肠癌TNM分期、淋巴结转移及组织学类型相关(P均＜0.05)。结论：CyclinD1在结肠癌中过度表达，其表达与结肠癌的临床病理特征紧密相关，这对于结肠癌的早期诊断、治疗及预后判断具有重要意义。

结肠癌；细胞周期蛋白D1；免疫组织化学

目前，在全球常见的恶性肿瘤中，结肠癌的发病率排第3位[1]。而在我国全部恶性肿瘤死亡率中，结肠癌死亡率位于第5～6位[2]。在我国其发病率呈上升趋势。目前尚未发现结肠癌特异的肿瘤标志物。CyclinD1是目前公认的原癌基因，其在细胞周期进展中起重要作用，是在细胞周期G1期起主要作用的蛋白。CyclinD1是主要的G1期正调节因子，促进细胞G1-S期时相的转换，被认为是原癌基因[3]。过度表达的CyclinD1蛋白对G/S期的转换有促进作用，从而使肿瘤的发生进程加速[4]。本研究于2016年2月-2017年2月采用免疫组织化学方法检测CyclinD1在结肠癌中的表达，对CyclinD1与结肠癌的临床病例特征相关性进行探讨。

资料与方法

2016年2月-2017年2月收集结肠癌标本50例，均取材于广西医科大学附属民族医院结肠癌切除术后的组织，术前、术后结肠癌诊断明确，所有患者在术前均未接受放化疗。其中男31例，女19例，平均年龄(61.2±3.25)岁；其中低分化20例，中分化16例，高分化14例；浸润深度达黏膜层4例，达肌层17例，达浆膜层14例，侵及浆膜层以外15例；有淋巴结转移32例，其余18例无淋巴结转移。同时在相对应的位置取距癌缘4～6 cm癌旁组织共40例及正常胃黏膜组织40例作为对照组。

方法：采用免疫组化(S-P)法检测结肠癌、癌旁组织及正常黏膜组织中CyclinD1蛋白的含量。操作步骤：进行包埋，采用的是常规石蜡；对肿瘤、癌旁组织及正常黏膜组织标本进行连续切片，切片厚度4 μm；脱蜡，采用的是二甲苯；随后进行梯度酒精脱水；行抗原修复，采用的是高温高压的方法，DAB显色，苏木精复染，封片。替代一抗选用的是PBS，并做阴性对照。

判定标准：CyclinD1染色定位在细胞膜及细胞质，阳性信号的判定标准是浆棕黄色或黄色染色显现。分别取6个高倍视野(200倍)对每个标本进行检测，对阳性信号平均灰度值进行测定，采用的是病理图像分析仪，灰度值越高，表示CyclinD1表达越少。

统计学方法：采用SPSS 16.0软件进行分析，所有计数资料均采用χ2检验，计量资料采用(±s)表示；P＜0.05为差异有统计学意义。

结 果

CyclinD1在结肠癌组织、癌旁组织及正常结肠黏膜组织中的阳性灰度值分别 为(198.54±10.25)、 (268.49±11.19)、(450.44±12.42)，同时进行各组间两两比较，P＜0.05，差异有统计学意义。CyclinD1表达水平与患者性别及年龄无关(P＞0.05)，而其在低分化型组、有浆膜浸润组及有淋巴转移组的阳性灰度值明显低于中高分化组、无浆膜浸润组及无淋巴转移组水平(均P＜0.05)。见表1、图1。

讨 论

近年来我国结肠癌的发病率及死亡率都有所升高，且有年轻化趋势[5]。但结肠癌肿瘤标志物特异性及敏感性低，进行结肠癌筛查较为困难，需寻找特异性结肠癌标志物。CyclinD1是细胞周期调控过程中重要的正向调控因子，当激活CyclinD1基因时，CyclinD1处于持续高表达状态，这将造成G1期缩短，细胞会提前进入S期，打破正常调节，干扰细胞周期，使其进程加快、增殖失控，最终导致肿瘤的生成[6]。因此在肿瘤的发生、发展过程中发挥重要的作用。CyclinD1是已经确定的原癌基因之一，其痕量或低水平表达于正常细胞和增殖细胞中，而在许多肿瘤中存在过度表达。有研究表明，在结直肠癌的侵袭和转移等生物学行为中，CyclinD1蛋白表达起到了一定的作用[7]。亦有研究表明，PI3Kp110、I3Kp110与Bcl-2、CyclinD1在大肠癌原发灶及转移灶中的表达均高于正常黏膜[8]，在肿瘤的发生发展中发挥重要作用，并与肿瘤生长、分化程度及转移密切相关。本研究发现，在结肠癌中CyclinD1蛋白的表达与其在癌旁组织及正常黏膜组织中的表达相比，前者明显高于后者，且其阳性表达会随着癌组织分化程度的降低、浸润深度的加深、出现淋巴结及远处转移而升高，这说明在促进结肠癌发生过程中CyclinD1的表达呈逐渐增高趋势，结果表明在结肠癌发生、发展过程中CyclinD1蛋白的高表达起重要作用。本研究结果与曲福杰等研究结果一致[9]。因此，检测CyclinD1蛋白水平，在预测结肠癌发生、发展及评估其预后过程中起着重要作用。

表1 CyclinD1的表达与结肠癌临床病理特征的关系

图1 CyclinD1在不同分化程度结肠癌组织中的表达(SP×200)

[1]Chung HH,Jang BI.A perspective：role of targeted therapy in colon cancer[J].Korean J Gastroenterol,2013,61(3)：128-135.

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[5]代珍,郑荣寿,邹小农,等.中国结直肠癌发病趋势分析和预测[J].中华预防医学杂志,2012,(46)：598-603.

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[7]和常,邹美平,张仁华,等.KLF1、P21、CYCLIND1在结肠癌中的表达及意义[J].山东医药,2011(51)：28-29.

[8]姜涛,吴淑华,何双,等.大肠癌原发灶与淋巴结转移灶中PI3Kp110α、PI3Kp110β与Bcl-2、CyclinD1表达的相关性及其意义[J].世 界 华 人 消化杂 志,2015(20)：3226-3234.

[9]曲福杰,潘立明,孙抒.CyclinD1和CD15蛋白在结肠癌中的表达及其临床意义[J].延边大学医学学报,2014(37)：4-7.

Expression changes of cyclin-D1 protein in colon cancer and its clinical significance

Wang Dadong,Wei Chunhui
Department of Gastroenterology,the Affiliated Minzu Hospital of Guangxi Medical University(Nanning City)530001

Objective：To investigate the expression changes of cyclin-D1 protein in the colon cancer tissues and its clinical significance.Methods：50 cases of colon cancer tissues,paracancerous tissues and normal gastric mucosa tissues were selected,the expression of cyclin-D1 in each group was detected by immunohistochemical SP method.The higher the gray value,the less the cyclin-D1 expression.Results：The expression of cyclin-D1 protein level was gradual downward trend in colon cancer tissues,pericarcinomatous tissue and normal colon mucosa tissue(allP＜0.05),the expression of cyclin-D1 protein of colon cancer was significantly related with lymph node metastasis,TNM stage and the degree of differentiation and histological type(allP＜0.05).Conclusion：Cyclin-D1 may be participated the whole course of carcinogenesis of cyclin-D1 cancer,which might be valuable for the early diagnosis,treatment and prognosis.

Colon cancer;Cyclin-D1;Immunohistochemistry

10.3969/j.issn.1007-614x.2017.22.71