齐墩果酸滴丸的质量标准研究

2017-08-14杨新建天津市中医药研究院附属医院天津300120

中国药房 2017年21期

李祥，梁颖，杨新建（天津市中医药研究院附属医院，天津 300120）

齐墩果酸滴丸的质量标准研究

李祥＊，梁颖#，杨新建（天津市中医药研究院附属医院，天津 300120）

目的：建立齐墩果酸滴丸的质量标准。方法：鉴别制剂性状，检测制剂重量差异、溶散时限；采用超高效液相色谱法测定制剂中齐墩果酸的含量：色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18，流动相为乙腈-水（70∶30，V/V），流速为0.30 mL/min，检测波长为206 nm，柱温为30℃，进样量为5 μL。结果：制剂鉴别特征明显，丸重差异为37.62%～46.56%，溶散时间均为24 min。齐墩果酸检测质量浓度线性范围为0.006～0.06 mg/mL（r＝0.999 8）；精密度、稳定性、重复性试验的RSD＜2.0%；加样回收率为99.34%～100.40%（RSD＝0.4%，n＝6）。结论：该研究所建标准可用于齐墩果酸滴丸的质量控制。

齐墩果酸滴丸；超高效液相色谱法；齐墩果酸；质量标准

ABSTRACTOBJECTIVE：To establish the quality standard of Oleanolic acid dripping pills.METHODS：The property of the preparation was identified，and weight difference and dissolution time limit were detected.UPLC method was adopted to determine the content of oleanolic acid in the preparation.The determination was performed on ACQUITY UPLC BEH C18column with mobile phase consisted of acetonitrile-water（70∶30，V/V）at the flow rate of 0.30 mL/min.The detection wavelength was set at 206 nm，the column temperature was 30℃，and the sample was 5 μL.RESULTS：The characteristics of the preparation was significant；weight difference ranged 37.62%-46.56%；dissolution time limit was 24 min.Linear range of oleanolic acid ranged 0.006-0.06 mg/mL（r＝0.999 8）.RSDs of precision，stability and reproducibility tests were all lower than 2.0%.The recoveries were 99.34%-100.40%（RSD＝0.4%，n＝6）.CONCLUSIONS：Established standard can be used for quality control of Oleanolic acid dripping pills.

KEYWORDSOleanolic acid dripping pills；UPLC；Oleanolic acid；Quality standard

齐墩果酸是一种五环三萜类化合物，以游离或糖苷形式广泛存在于世界各地的植物中[1]。经检测，山茱萸、山楂、女贞子、木瓜、乌梅、连翘、石榴皮、柿蒂、夏枯草等119种植物中均含有齐墩果酸[2]；该成分常用检测方法为薄层扫描法、高效液相色谱法（HPLC）、超高效液相色谱法（UPLC）等[3-8]。我院自行研制了齐墩果酸滴丸，并按照2015年版《中国药典》要求制定了质量标准，以期为齐墩果酸滴丸的质量控制提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器

ACQUITYⅠ型UPLC仪，包括紫外检测器（美国Waters公司）；AG285型电子分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）；KE-100E型超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司，功率：250 W，频率：40 kHz）；WD08-1型全自动滴丸机（天津市昂大科技发展有限公司）。

1.2 药品与试剂

齐墩果酸滴丸（天津市中医药研究院附属医院制剂室自制，批号：20151211、20151225、20160105，规格：3 mg/丸）；齐墩果酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号：20140406，纯度：≥98.5%）；聚乙二醇-4000、二甲基硅油均为药用规格，甲醇、乙睛为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 定性鉴别（齐墩果酸）

取样品10丸，加醋酐2 mL，水浴加热使溶解，振摇，加硫酸3滴，即显紫红色；取样品10丸，加三氯甲烷5 mL，水浴加热使溶解，加硫酸5滴，即显橙红黄色至橙红色；取样品5丸，加香草醛冰醋酸液（取香草醛0.5 g，加冰醋酸10 mL使溶解，即得）0.5 mL，加高氯酸1 mL，水浴加热使溶解，溶液显紫色。

2.2 检查

2.2.1 重量差异按2015年版《中国药典》（四部）“通则0108”项下[9]要求检查3批样品（每批20丸）重量差异，详见表1。结果表明，3批样品重量差异在±10%范围内，符合规定。

2.2.2 溶散时限按2015年版《中国药典》（四部）“通则0108”项下[9]要求检查3批样品（每批6丸）的溶散时限，详见表2。结果表明，3批样品溶散时限均为24 min（＜30 min），符合规定。

表1 重量差异测定结果Tab 1 Results of weight difference determination

表2 溶散时限检查结果Tab 2 Results of dissolution time limit

2.3 含量测定

2.3.1 色谱条件色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18（50 mm×2.1 mm，1.7 μm）；流动相：乙腈-水（70∶30，V/V）；流速：0.30 mL/min；检测波长：206 nm；柱温：30℃；进样量：5 μL。在上述色谱条件下，理论板数以齐墩果酸峰计＞14 900；各成分基线分离良好，分离度＞1.5，详见图1。

图1 超高效液相色谱图Fig 1 UPLC chromatorgams

2.3.2 对照品溶液的制备精密称取齐墩果酸对照品12 mg，置于l00 mL量瓶中，加甲醇50 mL，超声处理30 min，加甲醇定容，经0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.3.3 供试品溶液的制备取样品10丸，研细，准确称取约含齐墩果酸12 mg的细粉，置于100 mL三角瓶中，加甲醇50 mL，超声处理30 min，滤过，滤液移至100 mL量瓶中，加甲醇定容，即得。

2.3.4 线性关系考察准确量取“2.3.2”项下齐墩果酸对照品溶液0.5、1、2、3、4、5 mL，分别置于10 mL量瓶中，加甲醇定容，制成质量浓度分别为0.006、0.012、0.024、0.036、0.048、0.06 mg/mL的系列对照品溶液。精密量取上述系列对照品溶液各5 μL，按“2.3.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以齐墩果酸质量浓度（x，mg/mL）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，得齐墩果酸回归方程y＝23 906x+1 953（r＝0.999 8）。结果表明，齐墩果酸检测质量浓度线性范围为0.006～0.06 mg/mL。

2.3.5 精密度试验取“2.3.2”项下对照品溶液适量，按“2.3.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。结果，齐墩果酸峰面积的RSD为0.56%（n＝6），表明仪器精密度良好。

2.3.6 稳定性试验取“2.3.3”项下供试品溶液（批号：20151211）适量，分别于室温下放置0、5、10、15、24 h时按“2.3.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，齐墩果酸峰面积的RSD为1.09%（n＝5），表明供试品溶液室温放置24 h内基本稳定。

2.3.7 重复性试验精密称取同一批样品（批号：20151211）适量，按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，共6份，再按“2.3.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，齐墩果酸峰面积的RSD为0.58%（n＝6），表明本方法重复性良好。

2.3.8 回收率试验取已知含量样品（批号：20151211）适量，共6份，按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.3.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算回收率，结果见表3。

表3 回收率试验结果（n＝6）Tab 3 Results of recovery tests（n＝6）

2.3.9 样品含量测定取3批样品各适量，分别按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.3.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算样品含量。结果，3批样品（批号：20151211、20151225、20160105）齐墩果酸的平均含量分别为3.029、3.002、2.927 mg/丸。

4 讨论

本研究在建立UPLC法测定齐墩果酸滴丸中齐墩果酸含量的方法时，参考文献[10]，以甲醇-0.1%磷酸-三乙胺为流动相，其吸收峰有拖尾，分离效果不能满足标准制定要求。最终确定以乙腈和水作为流动相，能够在较短时间内测定，且峰形良好，无拖尾现象。同时本试验发现，UPLC的溶剂洗脱强度稍弱于HPLC。由于UPLC色谱柱填料粒径较小，流路管线较细，因此流动相和供试品溶液需经0.22 μm微孔滤膜滤过。

综上所述，本研究建立的UPLC法特异性强、重复性好，与传统的HPLC分离方法比较，分析时间短，操作简便，灵敏度高，精密度及稳定性良好，所建标准可用于齐墩果酸滴丸的质量控制。

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[10] 田燕，高萌，蒋妮，等.齐墩果酸滴丸的制备及质量评价[J].大连医科大学学报，2010，32（5）：521-523、538.

（编辑：张静）