白细胞介素17及23在慢性放射性肠炎中的表达及临床意义*

吴长亮，姚莉，蔡福庆，彭鹏，黄杰安

（广西医科大学第二附属医院 消化内科，广西 南宁 530021）

临床研究·论著

白细胞介素17及23在慢性放射性肠炎中的表达及临床意义*

吴长亮，姚莉，蔡福庆，彭鹏，黄杰安

（广西医科大学第二附属医院 消化内科，广西 南宁 530021）

目的检测白细胞介素17（IL-17）和白细胞介素23（IL-23）在慢性放射性肠炎患者肠黏膜组织中的表达，并分析其表达与疾病的关系。方法纳入31例慢性放射性肠炎为研究对象，选取健康对照30例。对病情的评估采取临床症状和内镜下表现结合的形式。用免疫组织化学法测定IL-17及IL-23的蛋白表达，并分析其与临床特征的关系。结果慢性放射性肠炎中IL-17及IL-23的阳性表达高于正常肠黏膜组织（均P=0.000）。IL-17及IL-23在慢性放射性肠炎患者肠黏膜中的表达与症状积分及内镜评分呈正相关（均P=0.000）。慢性放射性肠炎患者肠黏膜中IL-17与IL-23的表达相关（r=0.731，P=0.000）。结论IL-17及IL-23在慢性放射性肠炎组织中高表达，且与疾病严重程度呈正相关，提示IL-17/IL-23免疫轴可能参与慢性放射性肠炎的发生、发展。

慢性放射性肠炎；白细胞介素17；白细胞介素23

Abstract:ObjectiveTo investigate the expression of the IL-17 and IL-23 in chronic radiation proctitis(CRP).MethodsImmunohistochemistry was used to detect the expression of IL-17 and IL-23 in 31 CRP patients and 30 normal colonic mucosal tissues.ResultsThe positive expression of IL-17 and IL-23 in CRP was higher than that in normal colonic mucosal tissues (P=0.000).The expression of IL-17 and IL-23 in CRP significantly correlated with the parameters of symptoms and endoscopic scores (P=0.000).There was a significant correlation between the expression of IL-17 and IL-23 in the intestinal mucosa of patients with CRP (rs=0.731,P=0.000).ConclusionsIL-17/IL-23 axis may play an important role in the development and progression of CRP.

Keywords:chronic radiation proctitis;interleukin 17;interleukin 23

放射性肠炎是腹盆腔恶性肿瘤放射治疗引起的常见并发症，根据起病的缓急和病程的长短，一般分为急性和慢性。急性放射性肠炎多出现在放疗期间，病情较轻，多数可自愈。但仍有部分可进一步发展，持续≥3个月的称为慢性放射性肠炎。慢性放射性肠炎临床上以反复发作的腹痛、腹泻、便血及里急后重等为特点，内镜主要表现为慢性溃疡、出血、穿孔、肠梗阻及瘘管形成，病情常迁延不愈，严重影响患者的生活质量[1]。目前，慢性放射性肠炎的发病机制尚未完全明确，可能与放射剂量大小、肠道屏障破坏、肠壁血管损伤及菌群失调等因素相关[2]。近年来，随着对放射性损伤的深入研究，人们逐渐认识到其发病机制与免疫细胞因子存在密切关系[3]。白细胞介素17（interleukin-17，IL-17）及白细胞介素23（interleukin-23，IL-23）免疫轴是近年来研究的热点，其在多种自身免疫性疾病包括炎症性肠病及肠道慢性炎症中有重要作用[4]。本课题旨在通过测定IL-17/IL-23免疫轴中的重要生物分子IL-17及IL-23在慢性放射性肠炎组织中的表达，初步探讨IL-17/IL-23免疫轴对慢性放射性肠炎发生、发展的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2011年1月-2015年1月本院诊断为慢性放射性肠炎的患者31例纳入研究。所有患者均经病理证实。诊断标准参考中华人民共和国国家职业卫生标准《放射性直肠炎诊断标准》GBZ111-2002。纳入标准：①有明确的腹盆腔恶性肿瘤放射治疗病史；②于放射治疗结束3个月以后出现以结肠受累为主的放射性肠炎的相关症状，或症状持续≥3个月；③经病理检查排除肿瘤局部转移或复发；④既往无结直肠炎病史。31例慢性放射性结肠炎均为女性宫颈癌患者，年龄 38～72岁，平均（48.8±8.41）岁，未行手术治疗，所有患者接受放射治疗（外照射+后装），同步予顺铂[cis-Dichlorodiammineplatinum（Ⅱ），DDP]及5-氟尿嘧啶化疗，均为放疗结束后3～10个月发病的患者。以正常肠黏膜组织30例作为对照组。本研究通过广西医科大学第二附属医院伦理委员会批准，患者均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 慢性放射性肠炎病情评估标准 对病情的评估采取临床症状和内镜下表现相结合的形式。临床症状参照SOMA（subjective objective management analysis）进行评定（见表1）；目前对放射性肠炎的内镜下病变评估尚无标准的方法，本实验采用5个常见的内镜下病变：毛细血管扩张、黏膜潮红水肿、溃疡、狭窄及坏死相结合的评分系统来评估内镜下病变。见表2。

表1 慢性放射性肠炎症状的SOMA评分标准

表2 慢性放射性肠炎内镜分级标准

1.2.2 免疫组织化学染色 IL-17及IL-23抗体（购自英国Abcam公司），即用型免疫组织化学试剂盒及DAB酶底物显色剂（购自北京中杉金桥生物技术有限公司），常规脱蜡、水化，以0.01 mol/L柠檬酸高压修复5 min，3%过氧化氢H2O2室温孵育5～10 min，正常山羊血清封闭10 min后，滴加一抗（IL-17和IL-23 P19浓度均为1∶400），孵育过夜，余步骤严格遵照免疫组织化学试剂盒说明书进行。DAB显色，苏木素复染，中性树胶封片。阳性对照由试剂公司提供，用PBS代替一抗作为阴性对照。以胞质中出现明显的黄色或黄褐色颗粒视为免疫组织化学染色阳性，综合染色强度及阳性细胞数量进行半定量分析。根据免疫阳性细胞染色程度（A）：①无染色为0分；②细胞膜或质内见淡黄色颗粒，高于背景为1分；③较多棕黄色颗粒为2分；④大量棕黄色颗粒为3分。每片随机观察5个视野，计数500数（B）：①阳性细胞数<5%为0分；②5%～25%为1分；③25%～50%为2分；④>50%为3分。A与B相加为其最后得分：①0分判为“-”；②1～2分判为“+”；③3～4 分判为“++”；④5～6 分判为“+++”。以“++”和“+++”定义为阳性表达，“-”和“+”定义为阴性表达[5]。

1.3 统计学方法

数据分析采用SPSS 22.0统计软件，计量资料以均数±标准差（±s）表示，计数资料用个数（%）表示。率的比较用χ2检验。IL-17及IL-23 P19表达程度与临床症状和内镜评分的比较做秩和检验（H检验），相关分析用Pearson法或Spearman法，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 IL-17及IL-23在肠黏膜中的表达

IL-17及IL-23主要表达于胞质（见附图）。IL-17及IL-23在在慢性放射性肠炎中的阳性率均高于正常肠黏膜（均P=0.000）。见表3。

2.2 IL-17及IL-23的表达与慢性放射性肠炎患者临床特征的关系

附图 IL-17和IL-23在正常肠黏膜、慢性放射性肠炎结肠黏膜组织中的表达 （SP×200）

表3 慢性放射性肠炎组织与正常肠黏膜组织IL-17及IL-23阳性表达率的比较 例（%）

对不同疾病严重程度和IL-17及IL-23不同表达等级进行秩和检验，发现IL-17及IL-23在不同的疾病严重程度分级中的表达水平有差异（见表4）。进一步进行Spearman相关分析发现，IL-17及IL-23在慢性放射性肠炎中的表达水平与临床症状积分、内镜表现呈正相关。随着临床症状的加重，IL-17及IL-23的表达强度等级越高。见表5。

2.3 慢性放射性肠炎中IL-17与IL-23表达的相关性

通过相关分析，慢性放射性肠炎中IL-17与IL-23表达呈正相关。见表6。

表4 不同临床特征IL-17及IL-23P19表达等级的比较

表5 IL-17及IL-23 P19的表达与临床特征的相关性

表6 慢性放射结肠炎中IL-17与IL-23表达的相关性

3 讨论

目前，尚未有明确的治疗放射性肠炎的指南，临床上多采用内科解痉、止痛、止血、抗感染及对症支持治疗，但效果不尽理想[6-7]。虽然大部分的急性放射性肠炎有自愈性，但仍然有部分患者持续发展成为症状复杂而顽固的慢性放射性肠炎，给患者带来巨大的痛苦。研究慢性放射性肠炎的发病机制及防治对策，是临床亟需解决的重要问题。随着对放射性损伤的深入研究，人们逐渐认识到其发病机制与免疫细胞因子存在密切关系[8-10]。IL-17/IL-23免疫轴在多种自身免疫性疾病、肠道慢性炎症、肿瘤及移植排斥中发挥重要作用[11-12]，近年来，IL-17/IL-23免疫轴已成为放射损伤免疫学研究的热点。王洁等以放射性肺炎大鼠为研究对象，利用流式细胞术检测大鼠外周血辅助性 T 细胞 17（helper T cell 17，Th17）细胞数的变化以及免疫组织化学法检测Th17在肺组织的表达。发现放射性肺炎大鼠全血中Th17细胞逐渐上升，在放射性肺炎组织中，Th17细胞数量增多，提示Th17细胞可能参与大鼠放射性肺炎形成过程。有课题组进一步以148例实施放疗的胸部肿瘤患者为研究对象，采用流式细胞术检测放疗前、放疗期间及放疗后第4周研究对象外周血中Th17细胞水平并分析其与临床特征的关系。结果发现，发生放射性肺炎患者的Th17细胞水平高于未发生放射性肺炎的患者[13-14]。目前，针对IL-17/IL-23免疫轴与放射性肠炎关系的相关研究较少。

本实验探讨IL-17/IL-23免疫轴是否在放射性肠黏膜损伤过程中发挥重要作用。实验结果显示IL-17及IL-23在慢性放射性结肠炎患者肠黏膜组织中高表达，而在正常肠黏膜组织中低表达，提示慢性放射性肠炎肠黏膜组织中可能有IL-17及IL-23细胞的浸润。进一步分析IL-17和IL-23的表达与疾病炎症程度的关系，结果显示临床症状越严重、肠黏膜受损越大的患者，IL-17及IL-23蛋白表达的强度越高。说明肠黏膜IL-17及IL-23的表达水平与慢性放射性肠炎的严重程度密切相关，两者可能促进放射性肠炎的慢性化及病情进展。在本实验中，IL-17与IL-23的表达呈正相关，其可能的机制是IL-23通过刺激促使Th17释放大量IL-17，两者在慢性放射性肠炎的发病机制中起积极作用。

本课题着眼于慢性放射性肠炎的发生、发展机制，研究发现IL-17及IL-23在慢性放射性肠炎患者中高表达，提示慢性放射性肠炎患者的促炎因子和抗炎因子的动态平衡遭到破坏，促炎因子的上调可能是放射性肠炎发生、发展和慢性化的重要因素。对于IL-17及IL-23表达增加的慢性放射性肠炎，调控IL-17/IL-23免疫轴的应答，阻断其致炎过程，是否也有希望成为未来研发新药物的炎症靶标？这需要更深入的研究。

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Expression of IL-17 and IL-23 in chronic radiation colitis*

Chang-liang Wu,Li Yao,Fu-qing Cai,Peng Peng,Jie-an Huang
(Department of Gastroenterology,yhe Second Affiliated Hospital of Guangxi Medical University,Nanning,Guangxi 530021,China)

R516.1

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.15.007

1005-8982（2017）15-0034-04

2017-02-28

广西卫生厅自筹课题（No：Z2013100）

黄杰安，E-mail：jieanh@163.com