山鸡椒水溶性成分的研究

王玲燕　曲郁虹　李彦程　武玉卓　李瑞　郭庆兰　王素娟　王亚男　杨永春　林生

[摘要]通過MCI树脂、Sephadex LH20和反相HPLC等多种色谱分离方法相结合，从山鸡椒乙醇提取物中的水溶性部位中分离得到25个芳香苷和3个紫罗兰苷类成分，经MS和NMR等波谱技术分别鉴定为（7S，8R）去氢二松柏醇4，9′二OβD吡喃葡萄糖苷（1），（7S，8R）5甲氧基二氢去氢二愈创木基醇4OβD吡喃葡萄糖苷 （2），（7S，8R）urolignoside （3），（7R，8S）二氢去氢二愈创木基醇4′OβD吡喃葡萄糖苷 （4），（7S，8R）二氢去氢二愈创木基醇9OβD吡喃葡萄糖基（1→2）OβD吡喃葡萄糖苷（saposide B） （5），lanicepside A （6），罗汉脂素4OβD吡喃葡萄糖苷 （7），4O甲基罗汉脂素4′OβD吡喃葡萄糖苷（tyraxjaponoside B）（8），（+）南烛木树脂酚9′OβD吡喃葡萄糖苷（9），（-）（2R）1OβD吡喃葡萄糖基2{2，6二甲氧基4[1（E）丙烯3醇]苯氧基}丙烷3醇（alaschanisoside A） （10），紫丁香苷（syringin） （11），psoralenoside （12），isopsoralenoside （13），东莨菪苷（scopolin） （14），2，6二甲氧基4羟基苯酚1OβD吡喃葡萄糖苷 （15），3羟基4，5二甲氧基苯酚βD吡喃葡萄糖苷 （16），2（3，4二羟基苯基）乙基βD吡喃葡萄糖苷（17），2（4羟基苯基）乙基βD吡喃葡萄糖苷（18），（+）儿茶素7OβD吡喃葡萄糖苷（19），3′甲氧基表儿茶素7OβD吡喃葡萄糖苷（20），山奈酚3，7αL二鼠李糖苷（kaempferitrin）（21），槲皮素3OαL鼠李糖苷 （22），山奈酚3OβD吡喃葡萄糖苷（23），山奈酚3OβD吡喃葡萄糖基（1→2）βD吡喃半乳糖苷7OαL鼠李糖苷（24），槲皮素3OαL鼠李糖基（1→6）OβD吡喃葡萄糖基（1→3）OαL鼠李糖基（1→2）OβD吡喃葡萄糖苷 （25），staphylionoside D （26），吐叶醇9OβD吡喃葡萄糖苷（27），二氢吐叶醇OβD吡喃葡萄糖苷（28），其中化合物1～21，24～28均为首次从该属植物中发现。

[关键词]木姜子属； 山鸡椒； 水溶性成分； 芳香苷； 倍半萜苷

[Abstract]Twenty five known aromatic glycosides （125） and three known sesquiterpene glycosides （2628） have been isolated from the twigs of Litsea cubeba by using various chromatographic techniques Their structures were identified by spectroscopic data analysis （MS， IR， 1D and 2D NMR） as （7S，8R）dehydrodiconiferyl alcohol 4，9′diOβDglucopyranoside（1），（7S，8R）5methoxydihydrodehydrodiconiferyl alcohol 4OβDglucopyranoside（2）， （7S，8R）urolignoside（3）， （7R，8S）dihydrodehydrodiconiferyl alcohol 4OβDglucopyranoside（4）， saposide B（5）， lanicepside A（6）， matairesinol4OβDglucopyranoside （7）， tyraxjaponoside B（8）， （+）lyoniresinol9′OβDglucopyranoside （9）， alaschanisoside A （10）， syringin （11）， psoralenoside （12）， isopsoralenoside （13）， scopolin（14）， 2，6dimethoxy4hydroxyphenol1OβDglucopyranoside （15）， 3hydroxy4，5dimethoxyphenylβDglucopyranoside （16）， 2（3，4dihydroxyphenyl）ethylβDglucopyrnoside （17）， 2（4dihydroxyphenyl）ethylβDglucopyranoside （18）， （+）catechin7OβDglucopyranoside （19）， 3′Omethylepicatechin7OβDglucopyranoside （20）， kaempferitrin （21）， quercetin3OαLrhamnopyranside （22）， kaempferol3OβDglucopyranoside （23）， kaempferol 3OβDglucopyranosyl（1→2）OβDgalactopyr anoside7OαLrhamnopyranoside （24）， quercetin 3OαLrhamnopyranosyl（1→6）OβDglucopyranosyl（1→3）OαLrhamnopyranosyl（1→2）OβDglucopyranoside （25）， staphylionoside D（26）， vomifoliol 9OβDglucopyranoside （27）， dihydrovomifoliolOβDglucopyranoside （28） Compounds 121 and 2428 were obtained from this genus for the first time

[Key words]Litsea； Litsea cubeba； water soluble constituents； aromatic glycosides； sesquiterpene glycosides

樟科Lauraceae木姜子属Litsea植物全世界约有200余种，在我国约有72种18变种和3变型，是我国樟科中种类较多，分布较广的属之一[1]。本属植物入药的达17种，如杨叶木姜子Lpopulifoliu民间用于胃寒腹痛、食滞饱胀的治疗；木姜子Lpungens和宜昌木姜子Lichangensis均用于风寒湿痛、跌打肿痛和食积气滞的治疗，外用于疮毒肿痛；豺皮樟Lrotundifolia对风湿性关节炎、腰腿疼、痛经和消化不良有疗效[2]。

山鸡椒Lcubeba性温，味辛、微苦。干燥成熟果实和根入药，分别称为荜澄茄和豆豉姜，均收载于2015年版《中国药典》 [3]。其中荜澄茄具有温中散寒、行气止痛的功效，临床上用于胃寒呕逆，脘腹冷痛，寒疝腹痛，寒湿郁滞和小便浑浊；豆豉姜具有祛风除湿，理气止痛之功效，主治感冒、心胃冷痛、腹痛吐泻、脚气、孕妇水肿、风湿痹痛、跌打损伤及脑血栓形成等[45]。前人已对荜澄茄和豆豉姜的化学成分进行了较为系统的研究，主要为生物碱，尤其是阿朴啡类生物碱，和少量的黄酮、木脂素、脂肪酸、甾体等[4，68]，但对山鸡椒枝化学成分的研究却未见任何报道。为了扩大山鸡椒药用资源的综合利用，进一步寻找山鸡椒的活性成分，本课题对山鸡椒树枝乙醇提取物的化学成分进行了研究，从其水溶性部位中分离得到了25个已知芳香苷和3个已知倍半萜苷类成分，其中化合物1～21，24～28为首次从该属植物中发现。

1材料

Micromass Auto spcUltima ETOF质谱仪（美国Micromass公司），四极杆离子阱串联质谱仪（Agilent公司），Nicolet Impact 400 FTIR红外光谱仪（溴化钾压片），PerkinElmer 343旋光仪；JASCO J810园二色谱仪；Inova500或600M核磁共振光谱仪 （美国Varian公司），Sq 16x（ISCO），combi Flash，Rp C18（40～60 μm Micron Silicag Gel）组合闪式色谱仪（Isco公司），Agilent HP1100型高效液相色谱仪，Rp C18 （5 μm，半制备型）（Agilent公司），羟丙基葡聚糖凝胶Sephadex LH20 （Amersham Biosciences），色谱用硅胶和硅胶预制板（青岛海洋化工集团公司）。所用试剂若无特别说明均购自北京化工厂，级别为分析纯或色谱纯。

山鸡椒树枝于2013年8月采自云南大理昭通，经云南大学李干鹏教授鉴定为山鸡椒Lcubeba的枝。

2提取分离

山鸡椒12 kg，阴干粉碎，用95%乙醇回流提取3次，每次3 h，提取液减压浓缩得浸膏12 kg，加去离子水2 000 mL，乙酸乙酯萃取5次，每次2 000 mL，乙酸乙酯层合并，减压回收至干，得乙酸乙酯部位300 g。水相部位直接上大孔树脂，分别用水，30%，50%，90%乙醇水进行梯度洗脱，减压回收溶剂得相应洗脱部位。30%乙醇部位（354 g）经反相中压柱色谱，甲醇水梯度洗脱（5%～95%），洗脱液经薄层色谱检测，合并相同组分，回收溶剂得到A～D组分。组分B经Sephadex LH20 柱色谱，甲醇洗脱，洗脱液经薄层色谱检测，合并相同组分，回收溶剂得到B1～B5组分。组分B1经硅胶柱色谱（二氯甲烷甲醇15∶1～1∶1梯度洗脱），洗脱液经薄层色谱检测，合并相同组分，回收溶剂得到B11～B19组分。组分B13经反相半制备HPLC纯化（28%甲醇，01%醋酸）得化合物6（32 mg，tR=325 min）；组分B15经反相半制备HPLC纯化（30%甲醇，01% 醋酸）得化合物10（22 mg，tR=385 min）；组分B17经反相半制备HPLC纯化（32%甲醇水，01%醋酸）得到化合物11（31 mg，tR=246 min）。组分B3经硅胶柱色谱（二氯甲烷甲醇15∶1～1∶1梯度洗脱），洗脱液经薄层色谱检测，合并相同组分，回收溶剂得到组分B31～B38；组分B32经反相半制备HPLC纯化（33%甲醇，01%醋酸）得化合物14（22 mg，tR=183 min）；组分B33经反相半制备HPLC纯化（12%乙腈，05%醋酸）得化合物9（120 mg，tR=214 min）；组分B35经反相半制备HPLC纯化（17%乙腈，1%醋酸）得化合物12（12 mg，tR=217 min）和13（10 mg，tR=243 min）；组分B36经反相半制备HPLC纯化（10%乙腈，05%醋酸）得化合物24（15 mg，tR=145 min）；组分B38經反相半制备HPLC纯化（7%乙腈，01% 醋酸）得化合物25（165 mg，tR=298 min）。B4组分经硅胶柱色谱，反相半制备HPLC纯化（30%甲醇，01% 醋酸）得化合物1（20 mg，tR=462min）。C组分经Sephadex LH20 柱色谱，甲醇洗脱，洗脱液经薄层色谱检测，合并相同组分，回收溶剂得到C1～C4组分，组分C3经硅胶柱色谱和反相半制备HPLC纯化（20%乙腈，05%醋酸）得化合物2（45 mg，tR=283 min），3（42 mg，tR=356 min）和5（24 mg，tR=322 min）。

[参考文献]

[1]谢宗万，余有芩主编全国中草药名鉴·上册[M]北京： 人民卫生出版社，1996，114

[2]严小红，张凤仙，谢海辉，等木姜子属化学成分研究概况[J]热带亚热带植物学报，2000，8（2）： 171

[3]中国药典一部[S]2015： 235

[4]张水英，郭强，高小力，等樟科药用植物山鸡椒的化学成分和药理活性研究进展[J]中国中药杂志，2014， 39（5）： 769

[5]中国科学院昆明植物所云南植物志编辑委员会云南植物志第3卷[M]北京： 科学出版社， 2003

[6]张水英， 郭强， 曹愿， 等豆豉姜的生物类成分[J]中国中药杂志， 2014， 39（20）：3964

[7]朱超兰， 杨培明豆豉姜的化学成分分离和结构鉴定[J]中国医药工业杂志， 2007， 38（8）： 558

[8]Guo Q， Zeng K W， Gao X L， et alChemical constituents with NO production inhibitory and cytotoxic activities from Litsea cubeba[J]J Nat Med， 2015， 69： 94

[9]Deyama T， Ikawa T， Kitagawa S， et alThe constituents of Eucommia ulmoides OLIVVIisolation of a new sesquiligan and neoligan glycosides[J]Chem Pharm Bull， 1987， 35（5）： 1803

[10]Xiong L， Zhu C G， Li Y R， et alLignans and neolignans from Sinocalamus affinis and their absolute configuration [J]J Nat Prod， 2011， 74：1188

[11]Kuang H X， Xia Y G， yang B Y， et alLigan Constituents from Chloranthus japonicus Sieb[J]Arch Pharm Res， 2009， 32（3）： 329

[12]Yashikawa K， Tani S， Baba C， et alPhenylpropanoid， sapnol A， lignan and neolignan sophorosides， saposides A and B， isolated from Canadian sugar maple sap[J]Molecules， 2013， 18（8）： 9641

[13]Zhou Z W， Yin S， Wang X N， et alTwo new lignan glycosides from Saussurea laniceps[J]Helv Chim Acta， 2007， 90（5）： 951

[14]Liu X T， Wang Z X， Yang Y， et alActive components with inhibitory activities on IFNγ/STAT1 and IL6/STAT3 signaling pathways from Caulis Trachelospermi[J]Molecules， 2014， 19（8）： 11560

[15]王超， 朱麗萍， 杨敬芝， 等草珊瑚醋酸乙酯部位化学成分研究[J]中国中药杂志， 2010， 35（6）： 714

[16]Ohashi K， Watanabe H， Okumura Y， et alIndonesian medicinal plants Ⅻfour isomeric liganglucosides from the bark of Aegle marmelos（Rutaceae）[J]Chem Pharm Bull， 1994， 42（9）： 1924

[17]甘茂罗， 朱承根， 张艳玲， 等微花藤乙醇提取物水溶性部位的化学成分[J]中国中药杂志， 2010， 35（4）： 456

[18]Sugiyama M， Nagayama E， Kikuchi MLignan and phenylpropanoid glycosides from Osmanthus asiaticup[J]Phytochemistry， 1993， 33（5）： 1215

[19]Qiao C F， Han Q B， Mo S F， et alPsoralenoside and isopsoralenoside， two new benzofuran glycosides from Psoralea corylifolia[J]Chem Pharm Bull， 2006， 54 （5）： 714

[20]赵森淼， 侴桂新， 王峥涛华山参化学成分研究[J]中草药， 2013， 44（8）： 938

[21]谢乔， 王文婧， 李国强， 等仔榄树的化学成分[J]暨南大学学报：自然科学版， 2013， 34 （1）： 121

[22]Takara K， Matsui D， Wada K， et alNew antioxidative phenolic glycosides isolated from Kokuto noncentrifuged cane sugar[J].Biosci Biotechnol Biochem， 2001， 66 （1）： 29

[23]林生， 刘明韬， 王素娟，等小蜡树的酚苷及苯乙苷类成分[J]中国中药杂志， 2010， 35 （8）： 992

[24]肖凯， 宣利江， 徐亚明， 等拳参的DNA裂解活性成分研究[J]中草药， 2003， 34 （3）： 203

[25]Otsuka H， Hirata E， Shinzato T， et alGlochiflavanosides A-D： flavanol glucosides from the leaves of Glochidion zeylanicum （Gaertn） AJuss[J]Chem Pharm Bull， 2001， 49 （7）： 921

[26]李维宏， 彭伟， 樊继山， 等白叶蒿的化学成分研究[J]中国药房， 2014， 25 （3）： 253

[27]褚纯隽， 李显伦， 夏龙， 等乌饭树叶的抗补体活性成分研究[J]中草药， 2014， 45 （4）： 458

[28]唐露， 李喜凤， 杨胜祥， 等吊球草的化学成分及抑菌活性研究[J]中国中药杂志， 2014， 39 （12）： 2284

[29]Kite G C， Veitch N C， Boalch M E， et alFlavonol tetraglycosides from fruits of Styphnolobium japonicum （Leguminosae） and the authentication of Fructus Sophorae and Flos Sophorae[J].Phytochemistry， 2009， 70： 785

[30]Vilegas W， Sanommiya M， Rastrelli L， et alIsolation and structure elucidation of two new flavonoid glycosides from the infusion of Maytenus aquifolium LeavesEvaluation of the antiulcer activity of the infusion[J]J Agric Food Chem， 1999， 47（2）： 403

[31]Yu Q， Matsunami K， Otsuka H， et alStaphylionosides AK： megastigmane glucosides from the leaves of Staphylea bumalda DC [J]Chem Pharm Bull， 2005， 53 （7）： 800

[32]羅明， 林丽美， 李春， 等藏药甘青乌头化学成分的研究[J].中国中药杂志， 2012， 37 （9）： 1245

[33]Matsunami K， Otsuka H， Takeda Y， et alReinvestigation of the absolute stereochemistry of megastigmane glucoside， icariside B5[J]Chem Pharm Bull， 2010， 58 （10）： 1399

[责任编辑丁广治]