三阴乳腺癌中CXCR1和CXCR2的表达及临床意义

赵晓婷，孙洁，刘爽，白阳，王星，初瑞，王翠芳

（1.沈阳医学院基础医学院研究生院，沈阳110034；2.沈阳医学院附属中心医院病理科，沈阳110024；3.辽宁省新民市人民医院病理科，沈阳110300）

三阴乳腺癌中CXCR1和CXCR2的表达及临床意义

赵晓婷1，孙洁2，刘爽3，白阳2，王星2，初瑞1，王翠芳2

（1.沈阳医学院基础医学院研究生院，沈阳110034；2.沈阳医学院附属中心医院病理科，沈阳110024；3.辽宁省新民市人民医院病理科，沈阳110300）

目的探讨CXCR1和CXCR2蛋白在三阴乳腺癌（TNBC）组织中的表达及意义。方法收集乳腺癌（BC）癌旁正常组织28例，乳腺非特殊型浸润性导管癌（IDC-NOS）30例，TNBC组织34例，应用免疫组化EnVision法检测CXCR1和CXCR2蛋白的表达，并分析其与患者临床病理特征的关系，以及CXCR1和CXCR2蛋白与TNBC的相关性。结果在TNBC中，CXCR1和CXCR2蛋白表达的阳性率（23.5%，35.3%）明显低于IDC-NOS（63.3%，60.0%）和BC癌旁正常组织（89.3%，92.9%）。在TNBC中，CXCR1和CXCR2蛋白的表达与临床病理特征（年龄、淋巴结转移、肿瘤大小、组织学分级）无相关性（P＞0.05）。CXCR1和CXCR2蛋白的表达水平呈显著正相关（r=0.606，P＜0.01）。结论CXCR1和CXCR2蛋白在BC癌旁正常组织、IDC-NOS和TNBC中均有表达，呈强阳性、中度阳性、阴性递减，且二者在TNBC中的表达呈显著正相关。CXCR1和CXCR2蛋白的表达与TNBC的发生、发展密切相关。

三阴乳腺癌；CXCR1；CXCR2；免疫组织化学

乳腺癌（breast cancer，BC）属于组织高度异质性肿瘤［1］，是女性最常见的恶性肿瘤，占女性恶性肿瘤的第一位。在全球范围内，乳腺癌死亡率占女性全部恶性肿瘤的14%［2］。发病年龄高峰在45～55岁［3］。BC按照分子免疫表型分为5种亚型［4］，其中，三阴乳腺癌（triple-negative breast cancer，TNBC）是一种殊的亚型，具有很强的异质性，病因尚不完全清楚，遗传和机体免疫等多种内源性因素均可促进其发生、发展［5］。因此，明确其发生机制，寻找有效的靶向治疗方法是延长患者生存期的关键。近年来，研究发现趋化因子受体CXCR1和CXCR2与包括BC在内的肿瘤的发生、发展和转移有关。本研究拟应用免疫组化EnVision法检测CXCR1和CXCR2蛋白在TNBC中的表达，并探讨其与TNBC临床病理学特征的关系。

1 材料与方法

1.1 临床资料

收集沈阳医学院附属中心医院2010年1月至2011年12月女性浸润性BC标本92例，其中，TNBC 34例，乳腺非特殊型浸润性导管癌（invasive ductal carcinoma-not otherwise specified，IDC-NOS）30例，BC癌旁正常组织标本28例（对照组）。TNBC和IDCNOS患者年龄29～87岁，平均（55.4±13.2）岁，64例标本中，＜55岁33例，≥55岁31例；肿瘤最大径≤2 cm 22例，＞2 cm 42例；有转移25例，无转移39例；组织学分级Ⅰ和Ⅱ级42例，Ⅲ级22例。所有病例的诊断均经HE染色和免疫组化确认。

1.2 主要试剂

兔抗人CXCR1多克隆抗体浓缩型（BA0755-1）购自武汉博士德生物公司，兔抗鼠/兔/人CXCR2多克隆抗体浓缩型（ab14935）购自美国Abcam公司，二抗试剂盒DAB染色液（聚合物法）、PBS磷酸盐缓冲液（粉剂）（产品编号：PBS-0060/0061）、粉剂型抗原修复液（柠檬酸法）（产品编号：MVS-0066）均购自福州迈新生物技术开发有限公司。DAB显色剂购自上海基因科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 免疫组化（EnVision法）：标本石蜡切片脱蜡水化，柠檬酸抗原高压修复（pH6.0）25 min，室温冷却30 min，PBS溶液冲洗3 min×3次，将抗原修复后的切片用自来水冲洗1 min，用油性笔圈定玻片上的待测组织区域，PBS溶液冲洗3 min×3次。除去PBS溶液，在油性笔圈定的区域内滴加阻断内源性过氧化物酶阻断剂，在室温下保湿盒孵育10 min，PBS溶液冲洗3 min×3次。滴加CXCR1与CXCR2一抗（1∶50稀释），4℃过夜。PBS冲洗，滴加酶标羊抗小鼠/兔IgG聚合物，室温下保湿盒内孵育20 min（CXCR1蛋白）和15 min（CXCR2蛋白），PBS溶液冲洗3 min× 3次。室温下，DAB显色3～5 min，苏木素轻度复染，脱水，透明，封片。显微镜观察。分别用人肺癌和胰腺癌组织切片作为CXCR1和CXCR2阳性对照。

1.3.2 免疫组化结果判定：由2位独立的病理医生盲法进行免疫组织化学半定量评分。CXCR1和CXCR2蛋白染色评分参考FROMOWITZ等［6］的方法进行，2种蛋白主要在细胞质中表达，极少数也在细胞核表达。所有染色结果均采用统一评分标准，所有评分均重复2次以上，每张切片随机取5个100倍视野，进行阳性细胞百分比计分与着色强度计分。无着色为0分；浅黄色为1分；棕黄色为2分；棕褐色为3分。阳性细胞数＜5%为0分，5%～25%为1分，＞25%～50%为2分，＞50%～75%为3分，＞75%为4分，两者相加之和＜2分为（-），2～3分为（+），4～5分为（++），6～7分为（+++）。为了统计学方便，本研究将显色（-）～（+）定义为阴性，（++）～（+++）为阳性。

1.4 统计学分析

采用SPSS 22.0统计软件进行统计学分析。采用χ2检验和关联性分析或Fisher’s确切概率法进行数据的比较，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CXCR1和CXCR2蛋白在不同组织中的表达

CXCR1和CXCR2蛋白在BC癌旁正常组织、IDC-NOS和TNBC中表达程度不同。二者主要细胞质中表达，少数在细胞核表达（图1）。如表1所示，CXCR1和CXCR2蛋白在BC癌旁正常组织中均呈高表达，IDC-NOS中呈中度表达，TNBC中呈低表达，差异有统计学意义（P均＜0.05）。

2.2 TNBC中CXCR1和CXCR2表达的相关性

34例TNBC中，CXCR1阳性8例（23.5%），阴性26例（76.5%），CXCR2阳性12例（35.3%），阴性22例（64.7%），CXCR1和CXCR2蛋白的表达呈正相关（r=0.606，P＜0.001）。

2.3 CXCR1和CXCR2蛋白与TNBC临床病理特征的关系

如表2所示，CXCR1和CXCR2蛋白的表达与TNBC患者的年龄、淋巴结转移、肿瘤大小、组织学分级均无相关性（P＞0.05）。

3 讨论

TNBC具有侵袭性高、恶性程度高、易转移、易复发和生存率低等特点，治疗有一定的难度。目前，化疗是TNBC主要的治疗手段，内分泌治疗和和抗HER2靶向治疗基本无效。

图1 CXCR1、CXCR2在乳腺癌癌旁正常乳腺组织、乳腺非特殊型浸润性导管癌、三阴乳腺癌组织中的表达IHC×10Fig.1 Exp ression o f CXCR1 and CXCR2 in adjacent norm al tissues o f breast cancer，invasive ducta l carcinoma（NOS）and triple-negative breast cancer IHC×10

表1 CXCR1和CXCR2蛋白在乳腺癌癌旁正常组织、乳腺非特殊型浸润性导管癌和三阴乳腺癌中的表达［n（%）］Tab.1 CXCR1 and CXCR2 p rotein expression in ad jacent norm al tissue，invasive ducta l carcinom a（NOS）and triple-negative breast cancer［n（%）］

表2 CXCR1和CXCR2蛋白表达与TNBC临床病理特征的关系（n）Tab.2 Association of CXCR1 and CXCR2 expression w ith clinicopathological features of trip le-negative breast cancer（n）

近年来，趋化因子受体在在肿瘤中的作用日益引起研究者们的重视，目前已经鉴定的趋化因子受体至少有20种［7］。CXCR1和CXCR2属于趋化因子CXCR家族中的2个重要成员。CXCR1和CXCR2基因定位于2q35，CXCR1包含2个外显子和1个内含子，长4 149 bp。CXCR2包含3个外显子和2个内含子，长11 964 bp。CXCR1和CXCR2属于G蛋白耦联的7次跨膜受体，主要在特定炎症细胞表面表达，如中性粒细胞、单核细胞、肥大细胞等，可与CXCR家族其他成员结合，形成复杂的网络系统。主要功能是通过G蛋白变构激活下游的效应分子并进行信号转导，介导细胞发生迁移、脱颗粒等一系列生物学效应，在调节局部炎症反应、细胞发育、新生血管生成和对组织细胞及肿瘤细胞的趋化等方面发挥重要功能。目前发现，受体CXCR1和CXCR2可存在于某些癌细胞及新生血管内皮细胞中，白细胞介素8与该受体结合后能促进癌细胞增殖，促进血管生长，还能调控血管内皮细胞生长因子分化。

研究［8］表明，CXCR1在胃癌、子宫内膜癌、黑色素瘤和结肠癌、乳腺癌等肿瘤细胞中均呈过度表达，胃癌、前列腺癌和部分乳腺癌等实体肿瘤中也可见CXCR2表达［9］。本研究应用免疫组织化学的方法检测了CXCR1和CXCR2蛋白在BC癌旁正常组织、IDC-NOS和TNBC中的表达。结果显示，CXCR1和CXCR2蛋白在3组标本中均有不同程度的表达，二者在癌旁正常组织中均呈高表达，IDC-NOS中呈中度表达，TNBC中呈低表达，即在BC癌旁正常组织、IDC-NOS和TNBC中的表达呈递减趋势。CXCR1和CXCR2蛋白在TNBC中的表达呈正相关（r= 0.606，P＜0.001），证实了这2种受体具有很高的同源性，与文献［10］中二者有76%的高度同源性的结论一致。

研究［11-12］表明，TNBC共有6种亚型，它在PI3K/ AKT/mTOR信号通路中可能存在某些关键因子的突变或缺失。本研究结果显示，CXCR1和CXCR2蛋白在TNBC中呈低表达，考虑可能与TNBC的不同亚型及PI3K/AKT/mTOR信号通路关键因子的突变或缺失有关。尽管目前还没有针对乳腺癌的CXCR1抑制剂，但是有文献［13］报道对小鼠乳腺癌模型给予药物阻断CXCR1，可抑制乳腺癌症干细胞生长。本研究还发现，在34例TNBC标本中，有8例CXCR1蛋白表达阳性，12例CXCR2蛋白表达阳性，提示二者可能具有高度同源性，因此，在未来的研究中，本研究组将进一步探讨使用阻滞剂同时阻断CXCR1和CXCR2的表达从而改善TNBC疗效的可能性。

［1］陈青，孟刚，黄雯.乳腺癌中ERα、PR的表达与预后关系及其影响阳性率的相关因素［J］.临床与实验病理学杂志，2016，32（1）：13-18.DOI：10.13315/j.cnki.cjcep.2016.01.004.

［2］XU YY，ZHANG YY，LU WF，et al.Prognostic value of osteopontin expression in breast cancer：a meta-analysis［J］.Mol Clin Oncol，2015，3（2）：357-362.DOI：10.3892/mco.2014.480.

［3］朱亚宁，吴健，周武碧，等.三阴型乳腺癌中BRCA1的表达及其预后意义［J］.临床与实验病理学杂志，2015，31（7）：740-743. DOI：10.13315/j.cnki.cjcep.2015.07.005.

［4］BADVE S，DABBS DJ，SCHNITT SJ，et al.Basal-like and triplenegative breast cancers：a critical review with an emphasis on the implications for pathologists and oncologists［J］.Mod Pathol，2011，24（2）：157-167.DOI：10.1038/modpathol.2010.200.

［5］FU J，ZHANG L，HE T，et al.TWIST represses estrogen receptor-alpha expression by recruiting the NuRD protein complex in breast cancer cells［J］.Int J Biol Sci，2012，8（4）：522-532.DOI：10.7150/ ijbs.4164.

［6］HAN YP，MA CK，WANG SQ，et al.Evaluation of osteopontin as a potential biomarker for central nervous system embryonal tumors［J］.J Neurooncol，2014，119（2）：343-351.DOI：10.1007/s11060-014-1484-4.

［7］ROLLINS BJ.Inflammatory chemokines in cancer growth and progression［J］.Eur J Cancer，2006，42（6）：760-767.DOI：10.1016/j. ejca.2006.01.002.

［8］SANCHEZ J，MOLDOBAEVA A，MCCLINTOCK J，et al.The role of CXCR2 in systemic neovascularization of the mouse lung［J］.J Appl Physiol，2007，103（2）：594-599.DOI：10.1152/japplphysiol.00037.2007.

［9］NANNURU KC，SHARMA B，VARNEY ML.Role of chemokine receptor CXCR2 expression in mammary tumor growth，angiogenesis and metastasis［J］.J Carcinog，2011，10：40.DOI：10.4103/1477-3163.92308.

［10］WANG J，HU W，WANG K，et al.Repertaxin，an inhibitor of the chemokine receptors CXCR1 and CXCR2，inhibits malignant behavior of human gastric cancer MKN45 cells in vitro and in vivo and enhances efficacy of 5-fluorouracil［J］.Int J Oncol，2016，48（4）：1341-1352.DOI：10.3892/ijo.2016.3371.

［11］倪韵碧，曾婉珊，谢文杰，等.乳腺癌分子分型的研究进展［J］.中华病理学杂志，2014，43（7）：433-436.DOI：10.3760/cma.j. issn.0529-5807.2014.07.001.

［12］MOULDER SL.Does the PI3K pathway play a role in basal breast cancer?［J］.Clin Breast Cancer，2010，10（Suppl 3）：66-71.DOI：10.3816/CBC.2010.s.014.

［13］薛缪群，桑剑锋，苏磊，等.乳腺癌CXCR1的表达特征及其与新辅助化疗疗效的相关性［J］.现代生物医学进展，2015，15（24）：4659-4663.DOI：10.13241/j.cnki.pmb.2015.24.014.

（编辑王又冬）

Expression and Clinical Significance of CXCR1 and CXCR2 in Triple-negative Breast Cancer

ZHAO Xiaoting1，SUN Jie2，LIU Shuang3，BAI Yang2，WANG Xing2，CHU Rui1，WANG Cuifang2

（1.Graduate School of Basic Medical Sciences，Shenyang Medical College，Shenyang 110034，China；2.Department of Pathology，The Central Hospital Affiliated to Shenyang Medical College，Shenyang 110024，China；3.Department of Pathology，Xinmin People’s Hospital，Shenyang110300，China）

Objective To investigate the expression of CXC chemokine receptor 1（CXCR1）and CXC chemokine receptor 2（CXCR2）in triplenegative breast cancer（TNBC）and its significance.Methods The EnVision immunohistochemistry system was used to detect the expression of CXCR1 and CXCR2 in 28 specimens from normal tissues adjacent to breast cancer，30 specimens of invasive ductal carcinoma not otherwise specified（IDC-NOS），and 34 TNBC specimens.The relationship between the expression of CXCR1 and CXCR2，and clinical pathological features was analyzed.Results In the adjacent normal tissues of breast cancer，the positive expression rates of CXCR1 and CXCR2 were 89.3%and 92.9%，respectively；CXCR1 and CXCR2 expression displayed no significant association with clinicopathological parameters such as age，tumor size，or Scarff-Bloom-Richardson（SBR）score.The positive expression rates of CXCR1 and CXCR2 were 63.3%and 60.0%，respectively，in the IDCNOS samples and 23.5%and 35.3%，respectively，in the TNBC samples.There was a positive correlation between CXCR1 and CXCR2 expression in the TNBC samples（r=0.606，P＜0.001）.Conclusion Correlation of CXCR1 and CXCR2 expression with sample type was strong in adjacent normal tissues，moderate in IDC-NOS samples，and low in TNBC samples.CXCR1 expression was positively correlated with CXCR2 expression in all sample types.The expression of CXCR1 or CXCR2 was closely related to the development and promotion of TNBC.

CXCR1；CXCR2；triple-negative breast cancer；immunohistochemistry

R737.9

A

0258-4646（2017）07-0636-04

10.12007/j.issn.0258-4646.2017.07.014

2014年沈阳市卫生和计划生育委员会科研课题

赵晓婷（1990-），女，硕士研究生.

王翠芳，E-mail：sywcf321@sohu.com

2016-09-13

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