食管鳞状细胞癌中MTDH和c-myc的表达及意义

杨宣琴，赵园园，杜海燕，徐恩伟

食管鳞状细胞癌中MTDH和c-myc的表达及意义

杨宣琴，赵园园，杜海燕，徐恩伟

目的 探讨异黏蛋白(metadherin, MTDH)和c-myc基因在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)中的表达及其与临床病理特征的关系。方法 采用免疫组化法检测78例ESCC、20例高级别上皮内瘤变和30例正常食管黏膜组织中MTDH和c-myc蛋白的表达。结果 MTDH和c-myc在ESCC组和高级别上皮内瘤变组中的阳性率高于正常食管黏膜组(P<0.01)，MTDH在有淋巴结转移、低分化的ESCC中高表达(P<0.05)。c-myc在有淋巴结转移、低分化、浸润深的ESCC中高表达(P<0.05)，MTDH和c-myc表达与患者年龄、性别均无明显相关性(P>0.05)。结论 MTDH和c-myc与食管癌前病变的发生、发展相关，MTDH和c-myc的协同作用共同参与ESCC的发展、浸润和转移。

食管肿瘤；鳞状细胞癌；上皮内瘤变；异黏蛋白；c-myc蛋白

食管癌是消化系统常见的恶性肿瘤，病死率较高。涉及多因素、多阶段、多基因变异积累及相互作用的复杂过程，在分子水平上涉及众多原癌基因、抑癌基因以及蛋白的改变。异黏蛋白(metadherin, MTDH)又名AEG-1、LYRIC或3D3，是近年来发现的癌基因。其在多种人类肿瘤组织中高表达，且被认为与肿瘤的侵袭转移及预后不良有关[1]。原癌基因c-myc可使细胞无限增殖，并能促进细胞的分裂，与多种肿瘤的发生有关[2]。本文采用免疫组化法检测78例食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)、20例癌旁高级别上皮内瘤变及30例正常食管黏膜组织中MTDH和c-myc蛋白的表达，分析两者在食管癌发生、发展中的作用。

1 材料与方法

1.1 一般资料 选自山西省肿瘤医院2012～2014年收治的78例未经化放疗、诊断明确的ESCC手术切除标本，其中男性51例，女性27例；年龄40～77岁，平均58岁。≥60岁35例，<60岁43例；高分化13例，中分化45例，低分化20例；有淋巴结转移者46例，无淋巴结转移者32例。同时选择同组病例癌旁20例高级别上皮内瘤变和30例正常食管黏膜组织作为对照。

1.2 方法 免疫组化检测采用EnVision法。MTDH试剂盒购自广州深达，c-myc试剂盒购自北京中杉金桥公司。取自石蜡包埋的ESCC组织，3 μm厚连续切片，65 ℃烤箱，15 min，具体操作步骤按试剂盒说明书进行。脱水封固，镜下观察。

1.3 结果判定 MTDH以细胞膜及细胞质出现棕黄色颗粒为阳性，c-myc以细胞核出现棕黄色颗粒为阳性。阳性细胞数<10%或无阳性着色为阴性，阳性细胞数≥10%为阳性。

1.4 统计学处理 应用SPSS 17.0软件进行统计学分析。临床病理特征间指标比较采用χ2检验，指标相关性采用Spearman等级相关分析。

2 结果

2.1 MTDH和c-myc蛋白在ESCC组织中的表达 78例ESCC中MTDH和c-myc蛋白均过表达，阳性率分别为71.79%和61.53%，MTDH在正常食管黏膜组织、高级别上皮内瘤变、ESCC组织中的阳性率分别为6.67%、70.00%和71.79%，c-myc蛋白阳性率分别为3.33%、65.00%、61.53%，组间比较差异有统计学意义(P<0.01)，MTDH和c-myc在上皮内瘤变组及ESCC组的表达远远高于正常食管黏膜组，差异有统计学意义(P<0.01)，而在上皮内瘤变与ESCC组间比较差异无统计学意义(P>0.05，表1)。

2.2 MTDH和c-myc蛋白表达与ESCC临床病理特征的关系 78例ESCC组织中，MTDH蛋白表达仅与ESCC分化程度和淋巴结转移相关，高分化者癌巢周边瘤细胞强表达，低分化者弥漫强表达，分级越高阳性率越高(P<0.05)，而与患者性别、年龄、浸润深度无关。c-myc蛋白在ESCC中的表达与MTDH相同，低分化者弥漫强表达(图1～4)，c-myc在有淋巴结转移、低分化、浸润深的ESCC中表达高，差异有统计学意义(P<0.05)，MTDH和c-myc表达与患者年龄、性别无关(P>0.05，表2)。

2.3 ESCC中MTDH与c-myc蛋白表达的相关性 ESCC组织中MTDH蛋白表达与c-myc蛋白表达呈正相关(r=0.266，P<0.05，表3)。

3 讨论

食管癌和其他恶性肿瘤一样在多种致癌因素的作用下，部分组织细胞在基因水平上发生变化并失去原有的生长调控能力，从而出现异常增生。MTDH是近年发现的癌基因，MTDH基因定位于8q22染色体，包含12个外显子和11个内含子，总长度为85 482 bp。MTDH通过调节多个信号转导途径以及相关基因的表达水平来促进肿瘤的形成。MTDH通过PI3K/AKT、NF-κB、Wnt/β-catenin等信号通路促进肿瘤的发生、发展，包括启动肿瘤细胞的增殖与凋亡、增强肿瘤细胞的侵袭与转移以及提高肿瘤细胞对化疗药物及放射线的耐受[3-5]。MTDH在正常组织中不表达或低表达，而在多种肿瘤中呈过表达[6-8]。本实验显示，MTDH在ESCC中阳性率为71.79%，高于癌旁正常食管黏膜组织(6.67%)，两者相比差异有统计学意义(P<0.01)，而ESCC与高级别上皮内瘤变组间差异无统计学意义(P>0.05)，提示MTDH基因改变是ESCC发生的早期事件。其过表达在中低分化组中明显高于高分化组，并与ESCC的淋巴结转移相关(P<0.05)，提示MTDH表达与ESCC的发生、发展及转移过程密切相关。可作为评估ESCC恶性程度及转移的指标之一。c-myc基因是myc基因家族的重要成员之一， myc基因参与细胞凋亡，与多种肿瘤的发生、发展有关[9-11]。虽然c-myc基因的确切功能尚未完全明确，但有研究表明c-myc蛋白是一种转录因子，当其不受调节过表达时，就会单独或与其他因素协同引起细胞恶性转化。本实验中c-myc在高级别上皮内瘤变及ESCC组的阳性率(65.00%、61.53%)高于正常食管黏膜组(3.33%)，两者差异有统计学意义(P<0.01)，提示c-myc基因异常表达与食管癌的形成有关。实验结果亦显示c-myc在有淋巴结转移、分化差、浸润深的ESCC中表达高，差异有统计学意义(P<0.05)，提示c-myc基因异常表达可能与食管癌的分化、浸润及转移有关。

①②③④

图1 c-myc在高分化食管鳞状细胞癌中的表达，EnVision法 图2 c-myc在低分化食管鳞状细胞癌中的表达，EnVision法

图3 MTDH在高分化食管鳞状细胞癌中的表达，EnVision法 图4 MTDH在低分化食管鳞状细胞癌中的表达，EnVision法

表1 MTDH和c-myc在正常食管黏膜、高级别上皮内瘤变、鳞状细胞癌组织中的表达

与正常食管黏膜组相比，*P<0.01；与高级别上皮内瘤变组相比，△P>0.05

表2 MTDH和c-myc蛋白表达与食管鳞状细胞癌临床病理特征的关系

表3 MTDH和c-myc在食管鳞状细胞癌组织中表达的相关性

在恶性肿瘤发生的癌基因研究中，许多学者提出了基因协同作用假说。他们认为在恶性肿瘤发生、发展和转移的各阶段，至少有2个或2个以上功能不同的异常激活的基因各自发挥不同作用，并在时间和空间上相互配合，协同促进细胞癌变。PI3K/AKT通路在调节MTDH表达方面起重要作用，MTDH是Ha-ras的下游目的基因，Ha-ras通过调节PI3K/AKT通路导致转录因子c-myc连接到MTDH启动子区域的E-BOX盒上，从而诱导MTDH转录。MTDH反过来激活PI3K/AKT信号通路，进而在某些应激情况下能起到抗凋亡、保护正常细胞的作用。c-myc可以诱导MTDH转录，MTDH同样也可以诱导c-myc表达，进一步增强致瘤作用[12-13]。本实验ESCC组织中MTDH蛋白表达与c-myc蛋白表达呈正相关，提示两者协同作用，共同参与ESCC的发生、发展、浸润及转移。通过联合检测MTDH和c-myc在ESCC组织中的表达及其生物学特性，了解各个指标之间的关联性可为ESCC早期诊断、早期治疗及判断预后提供参考。

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山西省卫生厅科技攻关项目(2011043)

山西省肿瘤医院病理科，太原 030013

杨宣琴，女，硕士，副主任医师。E-mail: yxq6622@163.com 徐恩伟，男，硕士，副主任医师，通讯作者。E-mail: xewcn@qq.com

时间：2017-6-20 11:18 网络出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170620.1117.021.html

R 735.1

A

1001-7399(2017)06-0680-03

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.06.021

接受日期：2017-02-17