孤立性纤维性肿瘤/脑膜血管周细胞瘤中STAT6、PAX8和CD34的表达及意义

曹 钟，魏建国，岑红兵，袁晓露，夏丹萍，敖启林

·短篇论著·

孤立性纤维性肿瘤/脑膜血管周细胞瘤中STAT6、PAX8和CD34的表达及意义

曹 钟1，魏建国2，岑红兵1，袁晓露3，夏丹萍1，敖启林4

目的 探讨STAT6、PAX8和CD34在孤立性纤维性肿瘤(solitary fibrous tumor, SFT)/脑膜血管周细胞瘤(meningeal hemangiopericytoma, M-HPC)中的表达及意义。方法 采用免疫组化法检测26例M-HPC、22例神经鞘瘤、25例脑膜瘤以及10例肿瘤旁正常脑膜组织中STAT6(单/多克隆)、PAX8及CD34的表达。比较STAT6、PAX8和CD34在诊断M-HPC及其相似肿瘤中的价值。结果 不论单/多克隆抗体，26例M-HPC中STAT6均呈弥漫核强阳性，阳性率为100%(26/26)；57.7%(15/26)的SFT/脑膜HPC中PAX8呈核阳性；92.3%(24/26) 的M-HPC中CD34呈膜阳性；而在其他类型肿瘤及脑膜组织中所有抗体均阴性。相比PAX8和CD34，STAT6抗体具有较高的敏感性。结论 M-HPC是一种罕见的纤维母细胞软组织肿瘤。特别是不典型病例，其形态学谱容易与其他间充质肿瘤混淆。相比PAX8和CD34，STAT6单/多克隆抗体免疫组化染色能够更好地阐明M-HPC的免疫表型特征。

孤立性纤维性肿瘤/脑膜血管周细胞瘤；单克隆/多克隆抗体；STAT6；PAX8；CD34

孤立性纤维性肿瘤(solitary fibrous tumor, SFT)是一种少见的纤维母细胞软组织肿瘤，WHO(2013)软组织肿瘤分类认为其常发生于中年人，男女比例相当[1]。最初于1931年描述为发生在胸膜表面的来源于胸膜的纤维性肿瘤，随后发现在全身许多部位均可发生。发生在脑膜的血管周细胞瘤(meningeal hemangiopericytoma, M-HPC)形态与SFT结构类似，具有相同的免疫表型。近年来，利用新一代的基因检测技术表明：绝大多数SFT病例在12q13号染色体发生NAB2和STAT6基因融合，部分恶性和脂肪瘤样SFT的肿瘤样本中也可以检测到NAB2-STAT6融合转录本[2]。PAX8基因是成对盒(paired box, PAX)转录因子家族成员，最近有报道提示部分SFT检测出PAX8高表达。为此，本文检测26例M-HPC中STAT6(单克隆/多克隆抗体)、PAX8以及CD34的表达，同时亦对22例神经鞘瘤、25例脑膜瘤及10例肿瘤旁正常的脑膜组织中的4种抗体进行检测。比较4者对诊断M-HPC的敏感性。

1 材料与方法

1.1 材料 收集湖北省黄冈市中心医院和浙江省绍兴市人民医院2004年8月～2014年6月期间手术切除的26例M-HPC、22例神经鞘瘤、25例脑膜瘤及10例肿瘤旁正常脑膜组织。26例M-HPC中，男性12例，女性14例，年龄27～70岁，中位数为45岁，肿瘤直径4.2～12.5 cm，其中2例有复发病史，2例具有恶性特征。

1.2 方法 标本均经10%中性福尔马林固定，常规脱水透明浸蜡切片，HE染色，同时行免疫组化染色。对所有标本进行免疫组化EnVision两步法检测，采用一抗包括：STAT6兔单克隆抗体(稀释度1 ∶500，Abcam公司，)、STAT6兔多克隆抗体(稀释度1 ∶1 000，购自美国Santa Crus公司)，PAX8兔单克隆抗体、CD34、vimentin、BCL-2、CD99均为工作液，购自北京中杉金桥公司，试剂盒购自福州迈新公司。STAT6、PAX8单克隆抗体经1 mmol/L EDTA(pH 9.0)缓冲液，STAT6多克隆抗体经10 mmol/L枸橼酸(pH 6.0)缓冲液高压抗原修复后，按照使用说明书进行操作，用已知的PAX8阳性的肾细胞癌作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判定 依据Schweizer等[3]对STAT6染色结果判定：染色强度进行半定量分级，根据肿瘤细胞核/质或膜中出现黄色或棕黄色信号，观察每张切片中10个具有代表性的高倍视野，计算肿瘤细胞数，阳性结果评分分为3类，阴性：0～5%(-)；局部阳性：6%～50%(+)；弥漫阳性：≥51%()。PAX8、CD34、vimentin、BCL-2和CD99染色结果的判定也依据上述标准。

2 结果

2.1 镜检 镜下见22例良性M-HPC肿瘤界限清，部分见假包膜。细胞形态善良，呈圆形、卵圆形或短梭形；组织呈随意性生长模式，出现细胞密集区和疏松区，显著的胶原间质，“血管外皮瘤”样血管腔隙(图1)，核分裂罕见。2例复发性M-HPC与良性者形态学相似，Ki-67增殖指数10%～20%。2例恶性M-HPC呈浸润性生长，典型的“血管外皮瘤”样外观突然过渡到恶性区域，细胞核非典型性，核分裂象>4/10 HPF，部分区域可见凝固性坏死，细胞增殖指数均>20%。

2.2 免疫表型 26例M-HPC中，CD34阳性率为92.3%(24/26)、BCL-2阳性率为84.6%(22/26)、CD99阳性率为76.9%(20/26)、vimentin阳性率为100%(26/26)；上述标志物的阳性信号均位于细胞膜(图2)；CD34在所有22例神经鞘瘤、25例脑膜瘤及10例正常脑膜组织中均不表达。26例M-HPC中，STAT6单/多克隆抗体的阳性信号均限于细胞核(图3、4)，呈弥漫强阳性，其阳性率均为100%(26/26)，与患者年龄、性别、肿瘤大小、复发与否以及良恶性无关；所有其他类型的肿瘤及脑膜组织均未显示STAT6阳性信号；其具有100%敏感性。在26例M-HPC中，PAX8阳性信号位于细胞核(图5)，阳性信号强弱不等，其阳性率为57.7%(15/26)；所有其他类型的肿瘤及脑膜组织均未显示PAX8阳性信号；其具有57.7%的敏感性。

3 讨论

血管周细胞瘤，又称血管外皮瘤。该病变包括了真性周细胞肿瘤、肌周细胞瘤和细胞变异型SFT。现今，SFT还包括了脂肪变异型、巨细胞血管纤维瘤型以及去分化/恶性变异型。SFT发病年龄谱系广泛，无性别优势，不仅可以发生在胸膜，是一种解剖学无处不在的成纤维细胞肿瘤，78%～88%归为良性，12%～22%归为恶性，其复发率和转移率为5%～34%。良性SFT组织呈随意性生长模式、出现细胞密集区和疏松区、显著的胶原间质、“血管外皮瘤”样的血管腔隙。在脂肪形成的SFT变异型(以前称为脂肪瘤样血管外皮瘤)中混杂有成熟的脂肪细胞，与经典的SFT免疫表型相同，但是需与梭形细胞脂肪瘤鉴别。当SFT出现散在的多核巨细胞时，与巨细胞血管纤维瘤在形态学上发生重叠，两者免疫反应相似。极少数情况下，SFT发生大片的黏液样变伴显著的血管和随机分布的一致性细胞的图像与黏液样/圆形细胞型脂肪肉瘤非常类似。细胞性SFT包含一致性小圆细胞需与尤因肉瘤鉴别。去分化变异型/恶性SFT呈现出经典的“血管外皮瘤”区域突然过渡到高级别肉瘤，细胞核分裂象>4/10 HPF伴细胞核非典型性、凝固性坏死、细胞增殖指数较高[4]。恶性SFT与单相型滑膜肉瘤、隆突皮肤纤维肉瘤、胃肠间质瘤、纤维肉瘤、多形性肉瘤等在形态上无法区分。M-HPC与纤维型脑膜瘤、神经鞘瘤的形态也极为类似。因此，对于SFT和上述相似病变的鉴别诊断显得尤为重要。

以往认为CD34弥漫性细胞膜强阳性是SFT最重要的特征，但是后来发现其阳性率仅为81%～95%，少数病例可以是阴性或者局部阳性；BCL-2和CD99也是诊断SFT的重要标志物，阳性率分别为100%和75%；而且在许多与SFT形态相似的软组织肿瘤中也可以检测到上述标志物呈阳性[5]。在极少数情况下，SFT也可以表达EMA、SMA、S-100、CK、desmin。本组26例M-HPC中，CD34的阳性率为92.3%(24/26)、BCL-2的阳性率为84.6%(22/26)、CD99的阳性率为76.9%(20/26)、vimentin的阳性率为100%(26/26)。由于上述指标在许多与SFT相似的软组织肿瘤中也有表达，因此CD34对于诊断M-HPC的特异性和敏感性不强。

近年来研究发现在良性和恶性SFT中普遍发生NAB2-STAT6基因融合，融合的部位位于NAB2中的与早期生长反应因子结合阻遏结构域的C-端和STAT6反式激活结构域，激活了EGR介导的前馈方式转录，导致其失平衡，从而发挥致瘤效应。NAB2-STAT6基因被认为是SFT的特异性基因，在部分SFT/M-HPC和胸腔内SFT中可以检测到NAB2-STAT6基因融合[6-7]。NAB2-STAT6基因融合有多种变异型，最常发生融合的部位位于NAB2外显子4与STAT6外显子2/3之间，其次位于NAB2外显子6与STAT6外显子16/17之间[8]。但是，基因检测价格比较昂贵并且效果不稳定。Schweizer等[3]提出利用免疫组化法检测STAT6蛋白代替融合基因的检测，NAB2与STAT6基因融合后使细胞质中的STAT6蛋白进入到细胞核中。因此通过免疫组化法检测STAT6蛋白能反映出NAB2-STAT6融合基因的信息[9]。STAT6弥漫强阳性细胞核的表达对于诊断SFT和鉴别其他的软组织肿瘤具有较高的敏感性和特异性。目前，STAT6有单克隆和多克隆两种抗体，两者对于诊断SFT具有不同的敏感性和特异性。对于STAT6多克隆抗体，研究显示89%～98%的SFT和所谓的“M-HPC”中STAT6在细胞核免疫反应阳性[3,10]。Yoshida等[9]采用STAT6多克隆抗体检测49例SFT及其159例相似肿瘤发现：在SFT中，不论其发生部位以及组织学形态，STAT6呈100%(49/49)核强阳性表达；相比而言，仅有(4/159)2.5%的非SFT肿瘤显示核/质为弱阳性，其余155例未表达。Demicco等[11]检测2 366例间充质肿瘤后发现：除了240例SFT中的206例检测出STAT6表达外，还检测出在高分化/去分化脂肪肉瘤(49/408)、未分类肉瘤(8/65)和纤维瘤病(14/184)中核/质呈阳性表达。在其他的软组织肿瘤也会有STAT6核/质阳性表达的具体机制还不甚明了。相比多克隆抗体，STAT6单克隆抗体的特异性和敏感性更高。Cheah等[12]利用STAT6单克隆抗体检测54例SFT及其他相似病变发现：在SFT中，STAT6呈100%阳性，而在细胞性血管纤维瘤、肌纤维母细胞瘤、梭形细胞脂肪瘤等其他肿瘤均未见表达，显示100%特异性和100%敏感性，是一种强有力的诊断标志物。本组26例M-HPC中，不论单/多克隆抗体，STAT6的阳性信号均位于细胞核，呈弥漫强阳性，其阳性率为100%(26/26)；STAT6在所有其他类型的肿瘤和正常脑膜中均不表达，显示出100%的敏感性。

①②③④⑤图1 镜下肿瘤呈“血管外皮瘤”样外观图2 肿瘤细胞CD34呈细胞膜弥漫阳性，EnVision法 图3 肿瘤细胞STAT6呈细胞核弥漫强阳性，EnVision法 图4 恶性肿瘤细胞STAT6呈细胞核阳性，EnVision法 图5 肿瘤细胞PAX8呈细胞核弥漫强阳性，EnVision法

PAX8蛋白属于配对盒成员转录因子家族成员，该蛋白在甲状腺、肾脏及米勒管形成过程中起重要作用。现在已经发现PAX8在卵巢、肾脏、膀胱、甲状腺及胸腺等上皮性肿瘤中呈过表达，而在乳腺、肺及间皮肿瘤则不表达，因此对于判断转移癌的原发部位和鉴别诊断是很好的标志物，在软组织肿瘤中的表达情况鲜有相关研究。McDaniel等[13]检测了41例已经证实CD34阳性的SFT中PAX8的表达，结果显示26.8%和45.6%的SFT分别呈局部和弥漫阳性，其阳性率与患者年龄、肿瘤大小、部位、恶性与否以及复发无关。在NAB2-STAT6基因融合的肾脏SFT中也发现了PAX8呈弥漫强阳性[14]。本实验结果显示，在26例M-HPC中，PAX8阳性信号位于细胞核，其阳性率为57.7%(15/26)，而其他类型的肿瘤均未见其信号，显示出57.7%的敏感性，其敏感性低于STAT6(100%)和CD34(92.3%)。虽然对于PAX8在SFT中的表达机制还不清楚，但是容易造成诊断陷阱，因此必须排除转移性伴有肉瘤样或梭形细胞形态的癌。

综上所述，免疫组化检测STAT6、PAX8和CD34在诊断和鉴别诊断SFT/M-HPC上有帮助。相比PAX8和CD34，利用STAT6单/多克隆抗体具有更高的敏感性，是一种理想的生物学标志物。

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1湖北省黄冈市中心医院病理科，黄冈 4380002浙江省绍兴市人民医院病理科，绍兴 3120003湖北省孝感市中心医院病理科，孝感 4320004华中科技大学同济医学院附属同济医院病理研究所/同济医学院病理学系，武汉 430030

曹 钟，男，硕士，副主任医师。Tel: (0713)8625273， E-mail: caozhong1980@sina.om 敖启林，男，副教授，硕士生导师，通讯作者。E-mail: aoqilin@263.net

时间：2017-6-20 11:18 网络出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170620.1117.017.html

R 739.45

A

1001-7399(2017)06-0669-03

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.06.017

接受日期：2017-02-07