紫外分光光度法测定清热润燥口服液中总多糖的含量

袁小淋++余晓玲++魏丹霞++李月亭

摘要：目的建立紫外分光光度法測定清热润燥口服液中总多糖含量的方法。方法采用苯酚-硫酸比色法，以D-无水葡萄糖为对照品，在波长490 nm处测定总多糖含量。结果D-无水葡萄糖回归方程为A=00726x+01531，R=09998，线性范围0260 mg～0910 mg，平均回收率为10037%，RSD 为132%（n=6）。结论本方法稳定、快捷，可用于清热润燥口服液中总多糖的含量测定。

关键词：清热润燥口服液；总多糖；紫外分光光度法；苯酚-硫酸比色法；含量测定

中图分类号：R9272文献标志码：A文章编号：1007-2349（2017）07-0063-03

地域气候特征、居民的饮食习惯，使得昆明地区的咳嗽多发，并具有独特的特点。虽然，临床用于治疗咳嗽的西药及中成药较多，但有效针对昆明地区咳嗽特点的中成药还未见报道。清热润燥口服液处方来源于云南省著名老中医陆家龙教授的临床验方，临床上经过了多年的验证。处方由桑叶、芦根、薏苡仁等13味中药组成，具有清热养阴，润燥止咳之功。为控制剂的质量，确保临床疗效，本研究采紫外分光光度法对清热润燥口服液中的总多糖进行含量测定，为该制剂的质量控制方法研究打下基础。

1仪器与试药

UV-2000型紫外可见分光光度计（无尼可仪器有限公司）；电热恒温水浴锅（北京市永光明医疗仪器厂）；FB124自动内校电子分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）。苯酚；浓硫酸；D-无水葡萄糖（110833-200904）；乙醇；清热润燥口服液3批样品（自制批号为150616，150713，150716）。

2方法与结果

21测定波长选择[1～8]显色后D-无水葡萄糖对照品溶液和供试品溶液在490 nm处均有最大吸收，故选择测定波长为490 nm。

22对照品溶液的制备精密称取D-无水葡萄糖标准品适量，加水制成每1 mL含D-无水葡萄糖0052 mg的溶液，即得。

23供试品溶液的制备[9～14]精密吸取清热润燥口服溶液（批号150616）1 mL，加水稀释至50 mL，从中另取2 mL蒸干，用80%乙醇2 mL洗涤2次，离心（3000r/min）10 min，倾去上清液，用水分散，放置，合并残留在蒸发皿上的沉淀一并过滤，收集滤液后，定容至10 mL容量瓶中，即得供试品溶液。

24测定方法精密量取1 mL供试品溶液置10 mL量瓶中，加5% 苯酚溶液1 mL，混匀，沿壁加入浓硫酸50 mL，混匀，40℃水浴加热20 min，置冷水浴中冷却至室温。以相应的溶液为空白，在490 nm处测定吸光度。连续测定3次，取平均值，以D-无水葡萄糖为对照品，采用标准曲线法测定总多糖含量。

25标准曲线的制备线性关系考察精密吸取D-无水葡萄糖对照品溶液（0052 mg/mL）5、75、100、125、150、175 mL置25 mL量瓶中，加5% 苯酚溶液1 mL，混匀，沿壁加入浓硫酸50 mL，加水至刻度线，混匀，40℃水浴加热20 min，置冷水浴中冷却至室温。以吸光度（A）为纵坐标，进样量（C）为横坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程。结果D-无水葡萄糖对照品的回归方程为A=00726x+01531（r=09998），表明D-无水葡萄糖对照品在0260 mg～0910 mg范围内有良好的线性关系，见图1。

26精密度试验精密量取D-无水葡萄糖对照品溶液5 mL置25 mL容量瓶中，按制备供试品溶液操作方法，连续测定6次。结果表明，RSD为0215%，精密度符合含量测定要求，结果见表1。

27稳定性试验分别吸取D-无水葡萄糖对照品溶液和供试品溶液5 mL和1 mL置25 mL容量瓶中，按制备供试品溶液操作方法，在显色15 min后每隔10 min测定一次吸光度，结果表明D-无水葡萄糖对照品溶液吸光度在65min内稳定性良好，而样品溶液吸光度在45 min内基本稳定，表明在测定时间45 min内样品稳定性良好。结果见表2。

28重复性考察精密称取同一份样品6份，按制备供试品溶液操作方法，每份取1 mL，测定吸光度。结果表明：6份样品的RSD<3%，表明本法具有较好的重复性，结果见表3。

29加样回收率试验精密吸取已知含量的样品溶液（8741 mg/mL）1 mL（9份），分别加入5 mL、10 mL、20 mLD-无水葡萄糖对照品溶液（0052 mg/mL），按制备供试品溶液操作方法，测定每份样品溶液吸光度，计算其平均回收率为10037%，RSD 为132%，表明本含量测定方法稳定可靠，可用于总多糖的含量测定，结果见表4。

210样品测定取清热润燥口服溶液3批（每批测定两次，即n=2），按23项下方法制备供试液，取1 mL测定吸光度，并计算每mL含量，结果见表5。

3讨论

在实验过程中，精密准确的加入各种试剂是关键，由于稳定性不好，时间的把握也直接影响其测定的准确性，故在测定时要准确把握时间和试剂的加入。处方组成中的药材含大量的多糖，如：沙参、芦根、薏仁、麦冬、冬瓜等。而多糖具有增强机体免疫力，促进康复的作用。因此，选择此类成分作为处方含量测定的控制指标较为合理。

参考文献：

[1]张媛媛，张彬苯酚-硫酸法与蒽酮-硫酸法测定绿茶茶多糖的比较研究[J].食品科学，2016，（04）：158-163

[2]范传颍，陶正明，吴志刚苯酚硫酸法与蒽酮硫酸法测定铁皮石斛中多糖含量的比较[J].浙江农业科学，2013，（07）：799-801

[3]陈杨琼，伍春莲，侯怡铃，等松乳菇多糖含量的苯酚硫酸法检测研究[J].西华师范大学学报（自然科学版），2012，（02）：135-153

[4]张杰，李春艳，李劲平，等蒽酮硫酸法与苯酚硫酸法测定竹节参多糖含量的比较研究[J].中南药学，2012，（06）：421-424

[5]张锦雀，吴晓珊，朱善岚，等金线莲多糖苯酚-硫酸法测定条件的优化[J].中国医院药学杂志，2010，（02）：113-116

[6]刘晓涵，陈永刚，林励，等蒽酮硫酸法与苯酚硫酸法测定枸杞子中多糖含量的比较[J].食品科技，2009，（09）：270-272

[7]张志军，刘建华，李淑芳，等灵芝多糖含量的苯酚硫酸法检测研究[J].食品工业科技，2006，（02）：193-195

[8]杨勇杰，姜瑞芝，陈英红，等苯酚硫酸法测定杂多糖含量的研究[J].中成药，2005，（06）：706-708

[9]江汗美，王琴，许家琦，等薏苡仁多糖提取物的质量标准研究[J]，湖北中医院报，2010，（4）：35-37

[10]齐素芬，张华峰，姚美，等苯酚-硫酸法测定花椒叶多糖含量[J].食品科学技术学报，2015，（04）：40-46

[11]冯学珍，伍善广，孔靖，等正交试验优选苯酚-硫酸法测定石莼多糖的含量[J].海峡药学，2013，（12）：94-96

[12]郁玮，杨小明，刘伟民，等苯酚-硫酸法测定无花果中多糖含量的研究[J].食品科技，2009，（10）：256-258+262

[13]Thomas MJones，Peter AlbershemA Gas Chromatographic Method for the Determination of Aldose and Uronic Acid Constitu-euts of Plant Cell[J].Plant Physion，1972，49：926-936

[14]Michel Dubois，KAgilles，JKHamilton et al Colorimetric Method for Determination of Sugars and Related Substances[J].AnalChem，1956，28：350