萝藦种子中脂肪油和挥发油成分分析Δ

胡鹏，蔡静，张园娇，李祥，2，陈建伟，3#（.南京中医药大学药学院，南京20023；2.江苏省中药炮制重点实验室，南京20023；3.江苏省方剂研究重点实验室，南京20023）

萝藦种子中脂肪油和挥发油成分分析Δ

胡鹏1＊，蔡静1，张园娇1，李祥1，2，陈建伟1，3#（1.南京中医药大学药学院，南京210023；2.江苏省中药炮制重点实验室，南京210023；3.江苏省方剂研究重点实验室，南京210023）

目的：分析萝藦种子中脂肪油和挥发油成分。方法：采用气相色谱-质谱联用法（GC-MS）分析萝藦种子中脂肪油和挥发油成分：色谱柱为HP-5MS石英弹性毛细管柱，载气为高纯氮气，流速为1m L/m in，进样口温度为220℃，色谱柱初始温度为120℃（程序升温），柱压为80 kPa，分流进样，分流比为20∶1，进样量为1μL；质谱条件：离子源为电子轰击离子源，电子能量为70 eV，接口温度为250℃，质量扫描范围为m/z 50～550，扫描间歇为1.0 s。采用顶空气相色谱-质谱联用法（HSGC-MS）分析炒制前后萝藦种子挥发油成分的差异：色谱柱为HP-5MS石英弹性毛细管柱，载气为高纯氮气，流速为1m L/min，顶空加热温度为90℃，加热时间为30min，色谱柱初始温度为80℃（程序升温），柱压为80 kPa，分流进样，分流比为20∶1，进样量为1μL；质谱条件：离子源为电子轰击离子源，电子能量为70 eV，接口温度为210℃，质量扫描范围为m/z 50～550，扫描间歇为1.0 s。结果：从脂肪油中共鉴定出30个成分，其中亚油酸、油酸、棕榈油酸相对含量较高；从挥发油中共鉴定出54个成分，主要为萜烯类成分，其中衣兰油二烯、罗汉柏烯、脱氢香橙烯相对含量较高。炒制后多检测出4-萜烯醇，且二氢香芹醇相对含量较炒制前增加了1倍。结论：该研究基本明确了萝藦种子脂肪油和挥发油主要成分；炒制前后萝藦种子挥发油成分存在一定差异。

萝藦种子；脂肪油；挥发油；气相色谱-质谱联用法；顶空气相色谱-质谱联用法

萝藦Metaplexis japonica（Thunb.）Makino为萝藦科萝藦属的一种药用植物，多年生草质缠绕藤本，广泛分布于甘肃、陕西、贵州、河南和湖北等省区[1]。萝摩入药始载于陶弘景《本草经集注》，谓：“补益精气，强盛阴道”。此后唐·《新修本草》在草部中品之下卷第九载“萝摩子”（萝藦的果实）中记载：“味甘辛，温，无毒。主虚劳”[2-3]。现今全草可入药，味甘辛、平，归肺、肝经。其果可治劳伤、虚弱、腰腿疼痛、缺奶、白带、咳嗽等；根可治跌打、蛇咬、疔疮、瘰疬、阳萎；茎叶可治小儿疳积、疔肿；种毛可止血；乳汁可除瘊子[1，3]。萝藦藤收载于《上海市中药材标准》，曰：“补肾强壮，用于肾亏遗精，乳汁不足，脱力劳伤”[4]。近年研究发现，其脂肪油和挥发油均有一定的生物活性，具有抗氧化、抗菌、抗炎等作用[5-6]，但对萝藦种子的研究，笔者尚未见国内外文献报道。为了准确了解萝藦种子的化学成分，本试验采用气相色谱-质谱联用法（GC-MS）对萝藦脂肪油和挥发油成分进行分析，并采用顶空（HS）GC-MS法分析萝藦种子炒制前后挥发油的成分差异，为研究萝藦种子脂肪油和挥发油生物活性研究提供理论依据。

1 材料

1.1 仪器

7890B/7000C型GC-MS仪、7687A型顶空进样器（美国Agilent公司）；PTHW型电热套（南京文科仪器科技有限公司）；M illi-Q D irect8超纯水仪（德国Merck公司）；BT125D型十万分之一电子分析天平（德国Sartorius公司）；HH-2型数显恒温水浴锅（常州朗越仪器制造有限公司）；2WAJ型阿贝折射仪（上海光学仪器厂）。

1.2 试剂

试验所用试剂均为分析纯，水为超纯水。

1.3 药材

试验用萝藦种子于2015年10月采自江苏省南京市江宁区，经南京中医药大学陈建伟教授鉴定为真品。阴干至恒质量，粉碎后过30目筛，置于自封袋中于4℃贮藏。

2 方法与结果

2.1 脂肪油和挥发油的提取

2.1.1 脂肪油精密称取药材样品粉末2.5 g，用石油醚（30～60℃）200m L于55℃下索氏提取4 h，挥干溶剂，即得游离脂肪酸。在残渣中加盐酸溶液（25∶11，V/V）20m L，水浴中水解1 h，加95%乙醇溶液20m L，以石油醚-乙醚（1∶1，V/V）萃取上述溶液，取上层液，挥干溶剂即得结合脂肪酸，与游离脂肪酸混合即得总脂肪酸。

2.1.2 挥发油参照2015年版《中国药典》（四部）“通则2204”挥发油测定法[7]乙法Ⅰ法：称取药材样品粉末50 g，加水500m L，浸泡12 h，蒸馏8 h，至挥发油体积不再增加，得到淡黄色油状液体，具有芳香气味，冷藏，备用[8]；重复提取3次，挥发油得率为0.068%。

2.2 试验条件

2.2.1 GC-MS条件（1）色谱条件。色谱柱：HP-5MS石英弹性毛细管柱（30m×0.25mm，0.25μm）；载气：高纯氮气；流速：1m L/m in；进样口温度：220℃；色谱柱初始温度：120℃，程序升温（120℃保持2min；以10℃/min升至210℃，保持5m in；以2℃/m in升至220℃，保持5 min；再以3℃/min升至240℃，保持3min）；柱压：80 kPa；分流进样，分流比：20∶1；进样量：1μL。（2）质谱条件。离子源：电子轰击离子源；电子能量：70 eV；接口温度：250℃；质量扫描范围：m/z50～550；扫描间歇：1.0 s。

2.2.2 HSGC-MS条件（1）色谱条件。色谱柱：HP-5 MS石英弹性毛细管柱（30m×0.25mm，0.25μm）；载气：高纯氮气；流速：1m L/m in；顶空加热温度：90℃；加热时间：30min；色谱柱初始温度：80℃，程序升温（80℃保持3m in，以10℃/m in升至150℃，再以3℃/m in升至210℃保持15min）；柱压：80 kPa；分流进样，分流比：20∶1；进样量：1μL。（2）质谱条件。离子源：电子轰击离子源；电子能量：70 eV；接口温度：210℃；质量扫描范围：m/z50～550；扫描间歇：1.0 s。

2.3 定性分析

2.3.1 分析方法通过标准品、NIST14谱库检索，并结合Kovats保留指数（Kovats index，KI），参考文献及相关网站（www.vcf-online.nl）等进行定性分析。公式如下：

式中：n和n+1分别为未知物流出前、后正构烷烃碳原子数；tRn和tRn+1分别为相应正构烷烃的保留时间；tR为未知物在气相色谱中的保留时间（tRn＜tR＜tRn+1）。

2.3.2 分析结果取“2.1”项下挥发油1μL，按“2.2”项下试验条件进样测定，再按“2.3.1”项下方法分析，以面积归一化法确定各成分的相对含量。根据所得的质谱信息并结合有关文献采用Class5000色谱软件和基峰、相对丰度、KI等几个方面进行直观比较，从而确定了其中的部分化学成分。结果，所得挥发油为淡黄色澄清液体，气味芳香，空气中久置颜色渐深，在乙醇、乙醚中易溶，在水中几乎不溶，相对密度为0.968，折光率为1.497，挥发油得率为0.068%，游离脂肪油提取率为24.79%，总脂肪油提取率为42.35%。经GC-MS分析，鉴定出脂肪油30个成分，占总面积的99.65%；挥发油53个成分，占总面积的91.45%。萝藦种子脂肪油总离子流图见图1，成分分析结果见表1；萝藦种子挥发油总离子流图见图2，成分分析结果见表2。

图1 萝藦种子脂肪油总离子流图Fig 1 TIC plot of fatty oil from the seed of M.japonica

表1 萝藦种子脂肪油成分分析结果Tab 1 Analysis results of constituents of fatty oil from the seed of M.japonica

续表1Continued Tab 1

图2 萝藦种子挥发油总离子流图Fig 2 TIC p lot of the volatile oil from the seed of M. japonica

表2 萝藦种子挥发油成分分析结果Tab 2 Anahysis results of constituents of volatile oil from the seed of M.japonica

续表2Continued Tab 2

由表1可知，萝藦脂肪油中主要成分为亚油酸（46.55%）、油酸（26.95%）、棕榈油酸（7.80%）、十六烷酸（7.19%）、硬脂酸（3.72%）、9，12-十六碳二烯酸（3.00%），其中亚油酸和油酸占总油脂的73.50%，不饱和脂肪酸占总油脂的85%以上。由表2可知，萝藦种子中挥发油主要成分为衣兰油二烯（11.25%）、罗汉柏烯（10.01%）、脱氢香橙烯（8.86%）、异喇叭烯（6.17%）；萝藦种子中挥发油化学成分主要包括醇类、脂类、酮类、醛类、萜烯类等。萝藦种子炒制之后在5.299min出现一新成分，经过鉴定为4-萜烯醇，在6.442min出现的成分相对含量增加了近1倍，经过鉴定为二氢香芹醇。

3 讨论

不饱和脂肪酸是构成人体内脂肪的必须脂肪酸。目前食用油中含有大量油酸和亚油酸，萝藦种子出油率高达42%，有广泛的应用前景。通过比较游离脂肪和结合脂肪的不同可以发现，结合脂肪中也以亚油酸和油酸为主，油酸的相对含量大于游离脂肪，而亚油酸、棕榈油酸等小于游离脂肪的相对含量，这可为继续研究其成分差异提供依据。

通过HSGC-MS可以分析得到炒制前后萝藦种子芳香性成分的变化。由于高温炒制，总体挥发性成分低于炒制之前，4-萜烯醇和二氢香芹醇均具有较强烈的香气，而二氢香芹醇为香芹中主要香性成分，其催化产物具有一定的抗癌活性[9]，因此有必要对其加深研究。

本研究基本明确了萝藦种子中脂肪油和挥发油的主要成分，且炒制前后萝藦种子挥发性成分存在一定差异。本研究为合理开发利用萝藦种子资源利用提供了科学依据。

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Analysisof Volatile O il and Fatty O il in Seed of Metaplexis japonica

HU Peng1，CAIJing1，ZHANG Yuanjiao1，LIXiang1，2，CHEN Jianwei1，3（1.Schoolof Pharmacy，Nanjing University of TCM，Nanjing 210023，China；2.Jiangsu Key Laboratory for Chinese Materia Medica Processing，Nanjing 210023，China；3.Jiangsu Key Laboratory for TCM Formulae Research，Nanjing 210023，China）

OBJECTIVE：To analyze fatty oil and volatile oil in seed of Metaplexis japonica.METHODS：Fatty oil and volatile oil in seed of M.japonica were analyzed by GC-MS：HP-5MS quartz capillary column，high purity nitrogen as carrier gas，flow rate of 1m L/min，injector temperature of 220℃，primary column temperature of 120℃（temperature programmed），column pres-sure of 80 kPa，split sampling，split ratio of 20∶1，sample size of 1μL.Mass condition：electron bombardment ion source，electron energy of 70 eV，interface temperature of 250℃，mass scanning range ofm/z 50-550，scanning intervalof 1.0 s.The difference of volatile components in seed of M.japonica before and after processing was analyzed by HSGC-MS：HP-5MSquartz capillary column，high purity nitrogen as carrier gas，flow rate of 1m L/min，headspace heating temperature of 90℃，heating time of 30min，primary column temperature of 80℃（temperature programmed），column pressure of 80 kPa，split sampling，split ratio of 20∶1，sample size of 1μL.Mass condition：electron bombardment ion source，electron energy of 70 eV，interface temperature of 210℃，mass scanning range ofm/z 50-550，scanning interval of 1.0 s.RESULTS：A totall of 30 components were identified in fatty oil，among which relative contents of linoleic acid，oleic acid，palm itic acid were in high level；54 components were identified in volatile oil，main componentswere terpenes，among which relative contents of cananga oil diene，thujopsene，dehydro aromadendrene were in high level.Terpinen-4-olwas found and dihydrocarveol increased 100%after frying，compared with before frying.CONCLUSIONS：The study basically confirm main component of fatty oil and volatile oil in seed of M.japonica；there is difference of volatile components in seed of M. japonica before and after frying.

Seed of Metaplexis japonica；Fatty oil；Volatile oil；GC-MS；HSGC-MS

R284.1

A

1001-0408（2017）18-2532-04

2016-09-11

2017-01-03）

（编辑：张静）

国家公益性行业科研专项（No.201407002）；江苏高校优势学科建设工程项目（No.ysxk-2010）

＊硕士研究生。研究方向：中药资源化学及其利用。E-mail：hp381554489@163.com

#通信作者：教授，博士生导师。研究方向：中药资源化学与中药生物技术。电话：025-85811280。E-mail：chenjw695@126.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.18.24