冠心病患者冠状动脉病变与免疫细胞的相关研究

高荣华，张韶辉

冠心病患者冠状动脉病变与免疫细胞的相关研究

高荣华1，张韶辉1

目的 冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）患者冠状动脉粥样硬化病变与免疫细胞的关系。方法 选取2014年1月～2016年1月于济宁医学院附属医院治疗的冠心病患者100例，其中急性心肌梗死（AMI）组患者35例、不稳定型心绞痛（UAP）组患者40例、稳定型心绞痛组（SAP）患者25例。同时选取30例健康者作为对照组。采用流式细胞仪检测各组外周血CD4+CD25+调节性T细胞（Treg）和单核细胞CD36比例，同时检测高敏C反应蛋白（hs-CRP）、白细胞介素-17（IL-17）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平。结果 AMI组和UAP组外周血CD4+CD25+Treg比例分别为（8.60±1.55）%和（8.17 ±1.43）%，低于对照组的（10.40±1.43）%和SAP组的（10.72±1.66）%，差异有统计学意义（P均＜0.05）。与对照组比较，SAP组、AMI组和UAP组单核细胞CD36比例均升高；AMI组和UAP组高于SAP组，差异有统计学意义（P均＜0.05）。对照组、SAP组、UAP组以及AMI组hs-CRP、IL-17和TNF-α水平均呈升高趋势，差异有统计学意义（P均＜0.05）。相关性分析结果显示，冠心病患者CD4+CD25+Treg和单核细胞CD36比例与hs-CRP、IL-17、TNF-α等炎症因子水平无明显相关（P均＞0.05）。结论 冠心病患者冠状动脉粥样斑块的不稳定与炎症和免疫反应有关，外周血单核细胞CD36比例明显增加，CD4+CD25+Treg比例明显减低，炎症因子水平升高。

冠状动脉疾病；调节性T细胞；单核细胞

冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）是临床上较为常见的心血管疾病，主要由冠状动脉粥样硬化导致管腔狭窄或阻塞引起心肌缺血、缺氧或坏死，其发病率较高，且近年来发病人数持续上升[1]。冠心病患者的临床症状多为胸痛、心前区不适、心悸、乏力等，严重者可出现心力衰竭、猝死等，严重影响人们的生活质量[2]。炎症因子如高敏C反应蛋白（hs-CRP）、白细胞介素-17（IL-17）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等在冠心病的发生和发展中发挥重要作用，能扩大斑块的脂质中心并破坏纤维组织的完整性，导致斑块不稳定甚至破裂，最终促使冠心病的发生[3]。也有研究表明[4]，免疫反应与动脉粥样硬化有关。为进一步探讨冠心病与免疫反应的关系，本研究对冠心病患者和正常人群的外周血CD4+CD25+调节性T细胞（Treg）、单核细胞CD36、hs-CRP、IL-17和TNF-α等进行检测分析。

1 资料与方法

1.1 研究对象和分组 选取2014年1月～2016年1月于济宁医学院附属医院治疗的冠心病患者100例，其中急性心肌梗死（AMI）组患者35例、不稳定型心绞痛（UAP）组患者40例、稳定型心绞痛组（SAP）患者25例。纳入标准：①符合国际心脏病学会及WHO《缺血性心脏病的命名及诊断标准》中冠心病的标准；②近6个月内未进行心脏外科或介入手术治疗；③患者及家属知情同意并签署同意书。排除标准：①合并心力衰竭、心肌病、先天性心脏病、肺心病、风湿性心脏病及其他严重心脏瓣膜病；②合并肿瘤、创伤、感染、自身免疫性疾病等。另选取30例健康者纳入对照组（冠状动脉造影正常，无器质性疾病）。

1.2 标本采集及处理 所有入选者均于清晨空腹状态下抽取静脉血约10 ml（UAP组患者于最后一次胸痛发作后的24 h内采血，AMI组患者于发病后24 h内），分为两份，肝素抗凝后以3000 r/min离心10 min，取上清液，-80℃保存备用，用于检测炎症因子；另一份未抗凝，并于采集4 h内采用流式细胞仪测定。

1.3 检测方法 TNF-α和IL-17采用酶标免疫分析法测定，采用酶标仪（HC-880，德国拜发公司）及试剂盒（北京陆桥科技公司）测定，检测步骤严格按照试剂盒说明书进行。hs-CRP采用全自动生化分析仪（C8000，美国雅培公司）以及配套试剂盒（四川新成生物科技有限公司）测定，采用胶乳免疫透射比浊法进行检测。流式细胞术测定入选者外周血中CD4+CD25+Treg和单核细胞CD36，流式细胞仪为谷美特科技有限公司生产，型号为Coulter Epics XL，鼠抗人CD25抗体、鼠抗人CD4抗体和鼠抗人Ig G1免疫球蛋白均购自美国 Beckman-Coulter公司，检测步骤严格按照说明书进行。

1.4 统计学处理 数据处理采用SPSS 19.0软件，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间均数比较采用方差分析，两两比较采用LSD检验。相关性分析采用Pearson相关分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组基线资料比较 各组年龄、性别比、总胆固醇和三酰甘油比较，差异无统计学意义（P均＞0.05）（表1）。

2.2 各组外周血CD4+CD25+Treg和单核细胞CD36比较 AMI组和UAP组外周血CD4+CD25+Treg比例分别为（8.60±1.55）%和（8.17± 1.43）%，低于对照组的（10.40±1.43）%和SAP组的（10.72±1.66）%，差异有统计学意义（P均＜0.05）。与对照组比较，SAP组、AMI组和UAP组单核细胞CD36比例均升高；AMI组和UAP组高于SAP组，差异有统计学意义（P均＜0.05）（图1～2、表2）。

表1 各组基线资料比较

图1 各组CD4+CD25+Treg流式细胞术检测图

图2 各组单核细胞CD36流式细胞术检测图

2.3 各组炎症因子水平比较 对照组、SAP组、UAP组以及AMI组hs-CRP、IL-17和TNF-α水平均呈升高趋势，差异有统计学意义（P均＜0.05）（表3）。

2.4 相关性分析结果 将患者外周血CD4+CD25+Treg和单核细胞CD36分别与hs-CRP、IL-17和TNF-α进行相关分析，结果显示CD4+CD25+Treg与hs-CRP、IL-17、TNF-α无相关性（P均＞0.05），单核细胞CD36与hs-CRP、IL-17和TNF-α无相关性（P均＞0.05）。

表2 各组外周血CD4+CD25+Treg和单核细胞CD36比较

表3 各组炎症因子水平比较

3 讨论

冠心病发病率和死亡率较高，是目前全球死亡率最高的疾病之一[5]。冠心病与冠状动脉粥样硬化密切相关，同时高血压、高血脂、高血糖和不良生活方式等也加速冠心病的形成[6]。目前临床上通常将冠心病分为5种类型：心绞痛型、心肌梗死型、无症状心肌缺血型、心力衰竭型和猝死型，患者的常见症状有典型胸痛、心前区不适、心悸、乏力、发热、出汗、惊恐、恶心、呕吐、心力衰竭等，严重影响其生活质量，甚至导致死亡[7,8]。

目前临床上多采用药物和介入治疗冠心病，并已取得初步成效，但冠心病的发病机制至今尚未完全清楚[9]。有研究表明[10-12]，冠状动脉硬化病变是一种炎症反应，由炎症细胞和血管内皮细胞表面粘附分子介导，而C反应蛋白在其发生和发展过程中发挥着重要作用。研究表明[13,14]，冠状动脉粥样硬化病变与T淋巴细胞介导的免疫反应有关，高血压、高血脂等致病因素可造成血管内皮细胞损伤，分泌各种细胞因子，激活平滑肌细胞和巨噬细胞，从而释放更多的细胞因子，激活T淋巴细胞并促使免疫反应的发生，CD4+CD25+Treg是一种功能成熟的T细胞亚群，可通过负向调节来抑制自身反应性T细胞的作用，进而减少免疫性疾病的发生，并通过转化生长因子（TGF-β）、IL-10等多种细胞因子进行免疫调节[15]。

为了进一步探讨冠状动脉粥样硬化与免疫细胞的关系，本研究分别选取了AMI、UAP和SAP患者，分别检测了各组外周血CD4+CD25+Treg、单核细胞CD36比例，以及hs-CRP、IL-17和TNF-α水平。结果表明，AMI组和UAP组外周血CD4+CD25+Treg比例明显低于SAP组和对照组，单核细胞CD36明显高于SAP组和对照组，提示CD4+CD25+Treg与单核细胞CD36在冠状动脉粥样硬化发生、发展过程中有一定的调控作用。同时，对照组、SAP组、UAP组以及AMI组hs-CRP、IL-17和TNF-α水平均呈升高趋势，提示冠状动脉粥样硬化与炎症反应关系密切。但患者外周血CD4+CD25+Treg和单核细胞CD36比例与炎症因子水平无相关性。其原因可能是样本量不足，研究具有一定局限性和缺陷，仍需扩大样本量作进一步的深入研究。

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本文编辑：姚雪莉

Correlation between coronary artery lesions and immune cells in patients with coronary heart disease

GAO Rong-hua*, ZHANG Shao-hui.*Department of Cardiology, Affiliated Hospital of Jining Medical University, Jining 272100, China.

GAO Rong-hua, E-mail: 13854778476@163.com

Objective To discuss the relationship between coronary atherosclerosis and immune cells in patients with coronary heart disease (CHD). Methods CHD patients (n=100) were chosen from the Affiliated Hospital of Jining Medical University from Jan. 2014 to Jan. 2016, and divided into acute myocardial infarction group (AMI group, n=35), unstable angina pectoris group (UAP group, n=40) and stable angina pectoris group (SAP group, n=25). At the same time, 30 healthy controls were chosen into control group. The percentages of peripheral CD4+CD25+regulatory T cells (Treg) and monocyte CD36 were detected by using flow cytometer, and meanwhile the levels of high-sensitivity C-reactive protein (hs-CRP), interleukin-17 (IL-17) and tumor necrosis factor-α (TNF-α) were detected in all groups. Results The percentage of CD4+CD25+Treg was (8.60±1.55)% in AMI group and (8.17±1.43)% in UAP group, and were lower than that in control group [(10.40±1.43)%] and SAP group [(10.72±1.66)%, all P<0.05]. The percentage of monocyte CD36 increased in SAP group, AMI group and UAP group compared with control group, and was higher in AMI group and UAP group than that in SAP group (all P<0.05). The levels of hs-CRP, IL-17 and TNF-α showed an ascending trend in all groups (all P<0.05). The results of correlation analysis showed that the percentages of CD4+CD25+Treg and monocyte CD36 were not correlated to levels of inflammatory factors including hs-CRP, IL-17 and TNF-α (all P>0.05) in CHD patients. Conclusion The instability of coronary artery atherosclerotic plaque is related to inflammation and immune reactions, percentage of peripheral monocyte CD36 increases significantly, percentage of CD4+CD25+Treg decreases significantly, and levels of inflammatory factors increase in CHD patients.

Coronary artery lesions; Regulatory T cells; Monocytes

R543.3

A

1674-4055(2017)06-0727-03

1272100 济宁,济宁医学院附属医院心内科

高荣华,E-mail:13854778476@163.com

10.3969/j.issn.1674-4055.2017.06.25