实时荧光PCR检测非洲猪瘟病毒

2017-07-20

猪业科学 2017年5期

（四川省动物疫病预防控制中心，四川成都 610041）

实时荧光PCR检测非洲猪瘟病毒

张睿,裴超信,张毅,李春,邢坤,李丽,周莉媛,邵靓

（四川省动物疫病预防控制中心，四川成都 610041）

非洲猪瘟（ASF）目前已对全球多个发病国家的养猪业造成了巨大的经济损失，是我国明确规定须重点防范的外来动物疫病之一，其对我国的威胁也与日俱增。本实验采用北京世纪元亨非洲猪瘟实时荧光PCR试剂盒，重点对来源于四川省阿坝、广元、巴中、达州、广安等边境高危地区的规模场及散养户的猪组织病料进行了检测，结果表明97份组织样本均为ASFV抗原阴性，四川境内尚未发现ASFV感染。

非洲猪瘟；实时荧光PCR；病毒监测

非洲猪瘟（African swine fever，ASF）又称非洲猪瘟疫、疣猪病，是由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）感染猪引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。临床症状以高热、高死亡率、内脏器官广泛性出血以及呼吸系统和神经系统功能改变为主要特征[1]。该病是世界动物卫生组织的法定报告动物疫病（OIE，2004），我国农业部将其列为一类动物疫病，是《国家中长期动物疫病防治规划（2012-2020年）》中明确规定须重点防范的外来动物疫病之一[2]，全世界尚缺乏有效疫苗进行免疫预防，目前对于该病面临着巨大的防控压力。

近年来，ASF疫情从非洲、欧洲逐步扩散至亚洲地区，并在俄罗斯等邻国地区扎根蔓延，对疫情国家的养猪业造成严重危害，同时对东欧、中亚以及中国等国家和地区也构成了直接威胁[3]。中国猪饲养量几乎占世界50%，猪产品消费呈现快速增长之势，中国与非洲国家日益频繁的贸易往来、中国对非援助等使中国与ASF流行国家接触日益频繁，特别是近期俄罗斯ASF疫情的持续散播和流行，这些因素使国外ASF疫情跨境传入我国的风险在不断加大[4]。一旦侵入我国，将会给我国养猪业带来极大的危害，并对养猪相关产业造成巨大冲击。须采用多种检测方法持续进行ASFV监测，严防该病传入我国。

表1 猪组织病料采集情况

1 材料与方法

1.1 材料

材料来源于四川省阿坝、广元、巴中、达州、广安的规模场及散养户的猪组织病料，共计97份见表1。

检测试剂：北京世纪元亨非洲猪瘟病毒实时荧光检测试剂盒，批号20160310。

1.2 检测方法

参照北京世纪元亨非洲猪瘟病毒实时荧光检测试剂盒说明书进行。采用吸附柱法提取RNA进行实验。

2 结果判定

2.1 结果有效性

阳性对照Ct值≤30，阴性对照Ct值≥37，实验成立。

2.2 结果

结果见表2，表明实验中所有被试样品均为ASFV抗原阴性。

3 讨论

对于非洲猪瘟，世界范围尚未研制出有效疫苗，在非免疫状态下，使用实时荧光PCR进行非洲猪瘟病毒检测，是目前灵敏度及准确度最高的方法。本研究选取97份临床及病理特征与非洲猪瘟相似的病料进行检测，首次在四川省境内对非洲猪瘟病毒病原进行本底调查，未发现非洲猪瘟阳性的病例。

非洲猪瘟属于外来病，边境地区、生猪养殖贸易活跃区是重点防范地区。本研究针对高危的5个边境市（州）开展调查，与邓飞等[5]于2015年开展的非洲猪瘟抗体监测选取地区一致，进一步印证了四川省尚未发现非洲猪瘟感染的现状。下一步研究中，取样地区将进一步扩大，增加边境市（州）数量，并加入四川省内地的贸易活跃区，提高调查的合理性。

目前，尚无非洲猪瘟我国境内发生的报道，但国际及周边国家疫情形势严峻，本研究在四川省开展非洲猪瘟的流行病学调查，探索了实时荧光PCR病原检测与ELISA抗体检测相结合、高危边境地区抽样的监测模式，为严防非洲猪瘟入省提供了重要的技术储备，也希望能为该病的国境防疫提供一些参考。