副溶血弧菌噬菌体的吸附材料选择及其吸附和洗脱作用

胡蝶 邱德全

摘要 [目的]选择副溶血弧菌噬菌体的适宜吸附剂，并研究其吸附和洗脱作用。[方法]比较了滑石粉+硅藻土（3∶1）、活性炭、蒙脱石、玻璃纤维4种吸附剂对副溶血弧菌噬菌体的吸附固定化效果以及洗脱效果。[结果]蒙脱石和玻璃纤维对噬菌体的吸附效果好。

通过单因素试验和正交试验研究蒙脱石用量、吸附时间、吸附液pH对噬菌体固定化的影响，结果发现当蒙脱石用量为0.5 g，吸附时间为1 h，吸附液pH为6.0时，吸附效果最佳。[结论]将副溶血弧菌噬菌体制成固定化制剂后分别作用于养殖动物和养殖水体，可以达到对养殖动物进行生物防治和改善水体环境的目的。

关键词 副溶血弧菌噬菌体；吸附；洗脱；蒙脱石

中图分类号 S94 文献标识码

A 文章编号 0517-6611（2017）13-0107-04

Selection of Adsorption Material for Vibrio parahaemolyticus Phage and Its Adsorption and Elution Effects

HU Die1，QIU De-quan2*

（1.Zhanjiang Tengfei Industrial Co.，Ltd.，Zhanjiang，Guangdong 524072；2.College of Fisheries，Guangdong Ocean University，Zhanjiang，Guangdong 524025）

Abstract [Objective] To select suitable adsorbent for Vibrio parahaemolyticus phage and study its adsorption and elution effects.[Method] The adsorption immobilization effect and elution effect of 4 kinds of adsorbents French chalk+diatomite（3：1），active carbon，montmorillonite，and fiberglas）on V.parahaemolyticus phage were compared.[Result] Montmorillonite and fiberglas had better adsorbability to phage.The effects of montmorillonite quantity，adsorption time and pH of eluant on the phage immobilization were studied by single factor test and orthogonal test，and the results showed that the adsorption effect was the best when the quantity of montmorillonite was 0.5 g，the adsorption time was 1 h，pH of eluant was 6.[Conclusion] After V.parahaemolyticus phage was prepared to immobilized preparation，it was used in aquaculture animal and water，to achieve the purpose of biological control and improvement of aquatic environment.

Key words Vibrio parahaemolyticus phage；Adsorption；Elution；Montmorillonite

随着海水养殖的发展，弧菌病已成为养殖对虾的主要细菌病害之一。其中，副溶血弧菌主要感染对象是对虾、海水鱼类等，感染蟹类、贝类会引起大量死亡[1]。由该菌引起的食物中毒具有起病急、发病率高的特点[2]。治疗的常用方法有抗菌药物防治、免疫防治、生物防治等。抗菌药物主要使用抗生素[3]，但使用抗生素存在着药物残留、对人体健康造成危害、对环境产生污染等危害，并伴随着耐药菌的大量出现。疫苗免疫接种是免疫防治的主要方式，采用口服 、浸泡、注射、喷雾等措施来提高机体的免疫力[4]，但制作复杂，周期长和成本高，不合适大范围养殖规模。噬菌体是感染细菌和放线菌的病毒，作为生物防治的主要手段[5]，将改变单纯用抗生素治疗细菌性疾病的传统观念，开辟一个全新的治疗领域，将细菌性疾病的治疗推向一个新阶段。固定化微生物技术是20世纪60年代由生物化工中的固定化酶技术发展起来的生物处理技术[6]。吸附法在固定化微生物技术中最为常用，利用微生物具有的可吸附到固体物质表面或其他细胞表面的能力，将微生物吸附在附加剂表面的方法，是一种非常廉价和有效的微生物固定化方法，实现简单，操作容易，反应条件温和，对微生物活性影响小，载体可重复使用。多孔陶粒[7]、活性炭[8]、沸石[9]、石英砂[10]、硅藻土[11]等吸附剂能将微生物吸附在表面，从而使其固定化。笔者对副溶血弧菌噬菌体进行固定化，以期制得可以作用于水体的固定化制剂。然而，由于噬菌体的个体较小，直接将噬菌體包埋成固定化小球的效果并不好。因此，笔者先将噬菌体进行吸附法固定，再将吸附过后的物质进行包埋，以制取可以作用于水体的固定化小球。

1 材料与方法

1.1 菌株 副溶血弧菌（Vivrio parahaemolyticus）菌株，广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室分离自患红体病凡纳滨对虾，经鉴定为副溶血弧菌[12]。