木耳液体菌种与固化菌种的特性研究

王清霖 范博文 祁金威 李东 窦文鹏 王智慧

摘要：以木耳菌株“黑29”为试验材料，制备木耳液体菌种及固化菌种（1.5%琼脂固化菌种、2%琼脂固化菌种）。比较液体菌种和固化菌种萌发生长速度、菌丝形态、菌种活力、现耳时间、出耳产量等。结果表明：液体菌种和固化菌种均随菌种保存时间的延长表现出菌丝生长速度减缓，发满菌袋时间加长、出耳时间延迟，产量略有下降。液体菌种保存15d，失活不萌发，但固化菌种仍然保持较高的活性，可以正常生长、出耳。

关键词：木耳；液体菌种；固化菌种

现今，木耳种植大多数还停留在家庭小作坊式生产阶段，菌种使用是传统的固体菌种，其菌丝体量少、生长速度慢、活力弱。而液体菌种的特点是菌丝含量高、活力强，成本相对较低，但液体菌种容易染杂菌、难保存，不方便长途运输，推广到个人及家庭式木耳生产有一定的困难。本研究旨在对液体菌种进行固化处理，探讨液体菌种和固化菌种的特性及出耳情况，为家庭小作坊种植生产的菇农提供优质的新型的木耳菌种。

1材料和方法

1.1试验材料

菌种：“黑29”黑木耳菌种，由黑龙江省科学院微生物研究所菌种保藏中心提供。

1.2菌种制备方法

木耳液体菌种的制备：配置木耳液体菌种培养基（配方：葡萄糖3%、麦麸汁8%、KH₂P0₄0.1%、MgSO₄0.15%、土豆汁20%、VB₁0.01%），按培养基配方称取土豆，去皮，将土豆切成小块放入锅中，加水，在加热器上加热至沸腾，维持20～30min，待土豆酥而不烂时，可用4层纱布趁热在量杯上过滤，弃去滤渣，得到土豆汁。将称取好的麦麸加水，煮至沸腾状态，持续20min，用4层纱布趁热在量杯上过滤数次，弃去滤渣，得到麦麸汁，将土豆汁与麦麸汁混合，加入葡萄糖、KH₂P0₄、MgS0₄、VB₁，补充水分至所需量。分装至250mL锥形瓶中，每瓶装至1/3，用封口膜封好，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性能。再放入121℃灭菌20min后取出，冷却后放人无菌操作台中接菌。液体培养基接种完成后，将锥形瓶放置在pH值5.0～6.0，转速140r/min，溫度25cc的摇床中进行培养，7d左右木耳液体菌种制备完成。

木耳固化菌种的制备：将不同含量的琼脂粉加入到无菌水中，灭菌后制得琼脂浓度为1.5%、2%的热琼脂溶液。当琼脂溶液冷却到38℃左右，将培养好的木耳液体菌种，通过过滤得到菌丝球，然后分别加入到不同比例的琼脂溶液中，制得木耳固化菌种。

1.3试验设计

以常规液体菌种作为对照，以制得浓度为1.5%琼脂和2%琼脂固化剂菌种为处理。菌种分别放置0d、7d、15d。具体处理见表1，共9个处理，每处理3次重复。栽培袋料配方为木屑78%、麦麸20%、石灰1%、石膏1%。在25℃培养室中避光培养，湿度60%左右，按常规方法进行出耳管理。

1.4测定项目

观察菌种萌发时间、菌丝生长速度、菌丝形态、菌种的活力、现耳时间、出耳产量。

2结果分析

2.1不同处理对木耳菌种发满天数、菌丝日增长速度、菌丝形态的影响

由表1可知，液体菌种和固化菌种均随着菌种保存时间的延长表现出菌丝生长速度减缓、发满时间加长，菌丝形态减弱。这说明菌种存放时间长对菌丝的萌发及生长有一定抑制。比较存放0d和7d的菌种发现，液体菌种T0-1和T7-1较固化菌种T0-2、T0-3和T7-2、T7-3的萌发及菌丝生长速度慢，且T0-2

2.2不同处理对木耳现耳时间、耳片颜色、形态的影响

由表2可知，比较保存相同时间（0d、7d）的菌种，发现液体菌种的出耳时间较快。菌种保存0d，液体菌种6.07d现耳，较2%琼脂固化剂菌种的出耳速度快1倍；菌种保存7d后，液体菌种7.13d现耳，也较固化剂菌种出耳速度快；菌种保存15d，液体菌种失活，无法出耳，但固化剂菌种仍表现出较好的出耳情况。随着菌种保存时间的加长，液体菌种和固化菌种的出耳时间都延迟，这可能是由于菌种长时间存放导致活性降低，进而导致出耳较慢。比较2个固化剂菌种发现，1.5%琼脂固化菌种的出耳时间早于2%琼脂固化剂菌种出耳。

2.3不同处理对木耳现耳时间、耳片颜色、形态的影响

由图1可知，随着菌种保存时间的延长，木耳产量略有下降，但不明显。木耳液体菌种保存0d时，T0-2产量略高；液体菌种保存7d木耳产量T7-1较高。这说明液体菌种和固化菌种对木耳产量无显著的影响，菌种的形态对产量影响较弱。

3结论

研究表明，液体菌种和固化菌种均随菌种保存时间的延长表现出菌丝生长速度减缓，发满时间加长，菌丝形态减弱，出耳时间延迟，产量略有下降；且液体菌种保存15d，已基本失活，菌丝不再萌发出耳，但固化菌种仍然保持较高的活性，可以正常生长出耳。因此液体菌种的固化不仅可以保证菌丝的正常生长及出耳产量，同时可以延长菌种保存时间，方便长途运输使用。

研究还发现，2%琼脂固化菌种的萌发速度和菌丝生长情况略好于1.5%琼脂固化剂菌种。但1.5%琼脂固化菌种的出耳时间较2%琼脂固化剂菌种早，且木耳产量高。产生这种现象的原因及机理还有待进一步研究。